SN-T 5655.13-2023 商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法 第13部分：胡桃

學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載0ICS67.50學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載0CCSX04中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準1SN/T

5655.3—20231商品化試劑盒檢測方法預包裝食品致敏原免疫分析法

13

:

i t tCommercalkitesi t tImmunoassayoffoodalergensinfoodstPar13:Walnutt-

- -

--

- -

-中華人民共和國海關(guān)總署 發(fā)

布學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1前 言本文件按照GB/T1.標準化工作導則 第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為SN/T5655《商品化試劑盒檢測方法預包裝食品致敏原免疫分析法》的第13部分。SN/T5655已經(jīng)發(fā)布了以下部分:———第1部分:麩質(zhì);———第2部分:甲殼綱類動物;———第3部分:蛋類;———第4部分:花生;———第5部分:大豆;———第6部分:乳;———第7部分:扁桃仁;———第8部分:腰果;———第9部分:榛子;———第10部分:巴西堅果;———第11部分:夏威夷果;———第12部分:開心果;———第13部分:胡桃。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國海關(guān)總署提出并歸口。本文件起草單位:中華人民共和國廣州海關(guān)、中華人民共和國上海海關(guān)。本文件主要起草人:董潔、梁穎婕、楊捷琳、劉婧文、劉津、高東微。學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1引 言食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物質(zhì),被過敏體質(zhì)人群消耗后能夠誘發(fā)過敏反應(yīng)。SN/T5655《商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法》規(guī)定了預包裝食品中致敏原成分的酶聯(lián)免疫吸附定量檢測和膠體金免疫層析定性檢測方法,旨在滿足預包裝食品致敏原標識、生產(chǎn)質(zhì)控和食品安全檢驗監(jiān)管的檢測需求。SN/T5655《商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法》擬由下列13個部分構(gòu)成?！?部分:麩質(zhì)?！?部分:甲殼綱類動物?！?部分:蛋類。———第4部分:花生?！?部分:大豆。———第6部分:乳。———第7部分:扁桃仁。———第8部分:腰果?！?部分:榛子?！?0部分:巴西堅果。———第11部分:夏威夷果。———第12部分:開心果?！?3部分:胡桃。學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1商品化試劑盒檢測方法預包裝食品致敏原免疫分析法第13部分:胡桃1

范圍本文件規(guī)定了預包裝食品中胡桃致敏原的膠體金免疫層析測定方法。本文件適用于預包裝食品中胡桃致敏原的膠體金免疫層析定性檢測,也適用于預包裝食品生產(chǎn)過程對生產(chǎn)原料和環(huán)境樣品中胡桃致敏原的定性監(jiān)測。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法l ii iii i

i i

iAOACGuideinesforl ii iii i

i i

iAnalyss.AppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISAmethods:commu-t iniybestt i3

術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。13.1胡桃

walnutJ胡桃科胡桃屬植物(uglansregiaL.)所產(chǎn)果實。J注:俗稱核桃,又名波斯胡桃,英國胡桃。23.2

G膠體金免疫層析

coloidalgoldassay;ICAG以膠體金作為示蹤標志物的一種免疫層析檢測技術(shù)

。注:通常為試紙條形式。4

原理利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應(yīng),對樣品中的胡桃致敏原進行膠體金免疫層析試紙條檢測。樣品中的胡桃致敏原與預包被在反應(yīng)管內(nèi)的標記抗體發(fā)生反應(yīng),形成抗原-抗體結(jié)合物。此抗原-抗體結(jié)合物被預包被在免疫層析試紙條上的特異性抗體捕獲,形成抗體-抗原-抗體的夾心復合物,并在檢測區(qū)顯色,通過目測判讀檢測結(jié)果。1學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載15

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應(yīng)符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。1 lii ii ii

ii

it i5. 胡桃致敏原膠體金免疫層析檢測試劑盒1 lii ii ii

ii

it iProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄

A。注:試劑盒詳細信息見附錄B。25. 吸附緩沖液,見附錄C。2 :

0 22 , 234455. PBS-吐溫緩沖液

8.

gNaCl,0.

gKCl,1.44gNaHPO4

0.24gKH2PO :

0 22 , 23445pH

至7.2~7.,用蒸餾水定容至1L。5. 氯化鈉(NaCl)。5. 棉簽拭子。6

儀器和設(shè)備126. 分析天平:感量0.1g。126. 勻漿機。36. 渦旋混勻儀。346. 離心機:轉(zhuǎn)速≥4000r/min。45 1 56. 單道移液器:00μL~1000μL,5 1 57

分析步驟17. 環(huán)境拭子的采樣111 ( (7.. 吸取1mLPBS-吐溫緩沖液

5.3)到潔凈的2mL離心管中,11 ( (12 (13 (27.. 用浸潤的棉簽拭子

7.1.)的棉頭,擦拭大約10cm×10cm

面積的待檢測環(huán)境表面。12 (13 (2實現(xiàn)10cm×10cm

的待檢測環(huán)境表面擦拭,請自行定義合理及合適的待檢測環(huán)境表面范圍并記錄。7.. 將擦拭取樣后的棉簽拭子

7.1.)放回裝有PBS-吐溫緩沖液的離心管中,充分浸洗并擠壓使棉頭與緩沖液充分融合和釋放,取出擠干的棉簽拭子。14 27.. 從離心管中取0.

mL14 2( 2注:若棉簽采樣拭子

7.1.)含有肉眼清晰可見的致敏原顆粒,則可能含有的致敏原超過1000( 2拭子采樣處理后的離心管中樣品液,進一步稀釋后,再用于檢測。27. 清潔用水的采樣22直接取0.

mL清潔用水用于檢測。237. 食品樣品前處理和提取3317.. 液體樣品:量取不少于5mL樣品,進行充分均質(zhì)。3132 0 (7.. 固體樣品:稱取50.0g樣品,向其中加入450mL水和4.0g氯化鈉

5.32 0 (2學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載8.2

本方法對環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限為學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載8.2

本方法對環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限為10μg/100cm

(當采樣面積為10cm×10cm

時),或12中4000r/min室溫(0℃~25℃)離心5min,取上清液用于檢測。無離心條件時,可用粗濾紙過濾,2得到濾清液用于檢測。若離心后產(chǎn)生脂肪層,則輕挑除去脂肪層后,取脂肪層下的無脂肪清液用于檢測。脂肪含量高的樣品,宜進行冷凍離心以去除脂肪。33 (022 47.. 含多酚類的樣品:對于如啤酒、葡萄酒、可可、調(diào)味料、中草藥等樣品,應(yīng)使用吸附緩沖液33 (022 4行樣品前處理。吸取1mL液體樣品或稱取1.0g均質(zhì)后的固體樣品,加入已含有9mL吸附緩沖液的樣品管中,室溫(0℃~25℃)孵育10min~15min,邊孵育邊振蕩。孵育結(jié)束后置離心機中于室溫(0℃~25℃)000r/min,離心5min,取上清液用于檢測。注:若樣品中可能含有的致敏原濃度超過1000mg/kg,建議將樣品提取液進一步稀釋后,再進行檢測。密封好的上清液或濾清液在2℃~8℃避光保存不超過2d。47. 樣品的測定41 22 1、 321向預包被標記抗體的反應(yīng)管[見

B.a)]中加入0.

mL

的流動相緩沖液1 22 1、 3210.

mL于7.

7.2、7.

步驟得到的樣品提取液,蓋上管蓋充分混勻,于室溫(0

℃~25

℃)孵育5min。向反應(yīng)管中放入胡桃致敏原試紙條[見B.b)],反應(yīng)5min,目測讀取檢測結(jié)果。注:強酸性或強堿性樣品提取液調(diào)節(jié)pH

值至7.5±0.

后再檢測。57. 測定結(jié)果評估和表述551 C C7.. 試紙條反應(yīng)區(qū)包括2條結(jié)果條帶,從上至下分別為質(zhì)控帶(

)和檢測帶(T)。當質(zhì)控帶51 C C藍紫色條帶,檢測結(jié)果有效,否則檢測結(jié)果無效。52 C7.. 試紙條同時出現(xiàn)藍紫色質(zhì)控帶(

)和藍紫色檢測帶(T),檢測結(jié)果為陽性,結(jié)果表述為“檢出52 C桃致敏原”。53C7.. 試紙條只出現(xiàn)藍紫色質(zhì)控帶(

),未出現(xiàn)藍紫色檢測帶(T),檢測結(jié)果為陰性,結(jié)果表述為53C出胡桃致敏原”。67. 試劑失效6C試紙條未出現(xiàn)藍紫色質(zhì)控帶(

),檢測結(jié)果無效。C77. 內(nèi)部質(zhì)控7定期或必要時使用胡桃致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞娜斯ぬ砑訕悠愤M行檢測質(zhì)量控制。8

檢出限18. 本方法對食品樣品及清潔用水中胡桃致敏原的檢出限為10mg/kg(L)。1210μg/采樣拭子(當采樣面積是自行確定時,應(yīng)明確所記錄的采樣范圍)。9

方法局限性本文件的膠體金免疫層析方法適用于檢測胡桃致敏原,檢測結(jié)果為定性檢測結(jié)果,無法獲得定量檢測結(jié)果。若樣品中含有特別高濃度的胡桃(>1000mg/kg),則檢測帶的顏色可能會變淺,甚至完全抑制其形成。若樣品可能含有特別高濃度的目標檢測過敏原,則建議對樣品進行大倍數(shù)稀釋。3學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載110

防污染措施12310. 食品樣品的均質(zhì)可能產(chǎn)生粉塵,為避免污染應(yīng)在通風櫥內(nèi)進行樣品均質(zhì)的前處理操作。12310. 設(shè)備和器具用水沖洗后,用60%乙醇或異丙醇徹底清潔,以消除致敏原(蛋白質(zhì))污染。10. 在試驗過程中應(yīng)戴手套操作,在稱量、均質(zhì)樣品、樣品提取及試劑盒檢測四個檢測階段更換手套。4學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1附 錄

A(資料性)胡桃致敏原膠體金免疫層析檢測試劑盒評價結(jié)果1)1A. 檢出限1對食品樣品及清潔用水中胡桃致敏原的檢出限為10mg/kg(L)。對環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限為10μg/100cm2(當采樣面積為10cm×10cm

時),或10μg/采樣拭子(當采樣面積是自行確定時,應(yīng)明確所記錄的采樣范圍)。2A. 特異性2對開心果有0.1%的交叉反應(yīng),對腰果有1%的交叉反應(yīng),對夏威夷果、扁桃仁、板栗、椰子、榛子、花生、腰果、芝麻、巴西堅果、板栗、杏仁、松籽、南瓜籽、油菜籽、葵花籽、玉米、椰子、蛋、豌豆、小麥、燕麥、孜然、咖喱、大豆、辣椒、桂皮、丁香、八角、姜、芥末、洋蔥、雞肉、豬肉、牛肉、可可粉、橙汁、蘋果汁、牛奶、牛血清蛋白、羊奶均無交叉反應(yīng)。-

o o l l1)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmbiavidLatera

Flow

Wanut試劑盒。給出這一信息是為了方便本-

o o l l用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。5兔ｗｗｗ學兔．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023兔ｗｗｗ學兔．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1附 錄 B(規(guī)范性)胡桃致敏原膠體金免疫層析檢測試劑盒2)1B. 試劑盒組成1111a)

預包埋標記抗體的反應(yīng)管:0支或25支(根據(jù)試劑盒規(guī)格不同);111b)

胡桃致敏原快速試紙條:0支或25支(根據(jù)試劑盒規(guī)格不同);c)

內(nèi)含10mL流動相(緩沖液)的滴瓶:

支;1d)

凍干陽性質(zhì)控:

份,使用時加入1mL水復溶,渦旋混勻5min。12B. 試劑盒驗收和保存221B.. 每個批號試劑盒應(yīng)按照質(zhì)量控制要求進行驗收試驗,考察檢測性能。2122 2B.. 未開封試劑盒保存在2℃~8℃,使用前回復至室溫(0℃~25℃22 22溫(0℃~25℃)并保持干燥。2233B.. 超過有效期的試劑盒不應(yīng)使用。233B. 試紙條檢測結(jié)果示例1試紙條檢測結(jié)果示例見圖B.。1從左至右檢測結(jié)果第1條為陰性,第2~3條為陽性。C為質(zhì)控帶,T為檢測帶。1圖B. 試紙條檢測結(jié)果示例1-

o o2)

rbipharmbiavidLateralFlow

-

o o用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。6學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1SN/T5655.3—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載1