乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學驗證課件

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學驗證

1整理課件ppt課程要求掌握：①乙肝表面抗原的ELISA法定量檢測方法；②ELISA法方法學評價的方法。熟悉：①定量檢測的酶標儀操作要領；②各種緩沖液的配制。了解：ELISA檢測中的影響因素和注意事項。2整理課件ppt試驗目的

進行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學驗證。3整理課件ppt試驗材料

1試劑盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析試劑盒，福州藍圖生物工程有限公司出品。2儀器及酶標板酶標儀：Bio-Rad680；洗板機：Bio-Rad1575；超純水系統(tǒng)：MilliporeElix；電熱恒溫培養(yǎng)箱(DNP-9052):上海精宏實驗設備有限公司。4整理課件ppt3溶液配制0.01MpH7.4的PBS緩沖液：稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。質控品：用PBS緩沖液將標準品配制成6、3、1.5ng/ml三個質控品，每質控品1ml。5整理課件ppt試驗方法

1標準曲線各濃度的配制用PBS緩沖液將標準品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。6整理課件ppt2測定方法

設計標準品、質控品及空白分配方案；取出試劑盒中已包被酶標板，取出板條，按需要重新配制；在相應孔中加入系列標準品、質控品及空白對照，每孔50ul；37℃溫育30min，洗板4次；加入酶標抗體，生物素二抗，50ul/孔；37℃溫育30min，洗板4次；加入A、B液,50ul/孔，37℃溫育15分鐘。加入終止液，50ul/孔。7整理課件ppt3標準曲線制作及結果計算酶標板放入酶標儀，蓋上蓋子；在電腦上打開MicroplateManager5.2軟件選擇450nm波長（參照波長630nm），設置LAYOUT和報告模式，測定各孔吸收值；輸入標準品各濃度值，以雙對數法制備標準曲線，獲取各孔的濃度值，打印標準曲線圖和計算結果。8整理課件pptELISA法標準曲線示意圖9整理課件ppt4準確度（回收率）計算

按示例表1樣式列表并計算回收率。10整理課件pptVEGFR2-Fc(ng/ml)測定值(ng/ml)回收率(%)平均回收率RR(%)SD(%)2021.765108.825103.1599.1517.78988.94520.301101.50522.612113.0620.692103.461011.279112.79116.0923.8211.148111.4811.739117.3911.828118.2812.052120.5256.467129.34102.52815.884.69593.94.41988.385.123102.464.92898.5611整理課件ppt5按示例表列表并計算精密度。12整理課件ppt板內精密度VEGFR2-Fc（ng/ml）測定值RSD(%)123452021.76517.78920.30122.61320.69220.632±1.838.871011.27911.14811.73911.82812.05211.609±0.383.2756.4674.6954.4195.1234.9285.126±0.7915.4113整理課件ppt板間精密度VEGFR2-Fc（ng/ml）測定值RSD(%)2021.76419.26221.5197.78914.76015.63020.30116.95517.86222.61219.64322.16020.69218.14420.43919.302±2.3912.381011.27810.09012.17311.1489.92811.86911.73910.45912.55811.82810.47912.45512.05210.70912.58411.423±0.917.9756.4765.6886.7344.6954.0634.7864.4173.7884.4935.1234.4635.3244.9284.2735.1354.959±0.8316.73714整理課件ppt6檢測限（LOD）計算：取空白孔的OD值的均數加2倍標準差。15整理課件ppt注意事項標準品和質控品配制要準確。實驗各個環(huán)節(jié)都很重要，每步操作都要認真。16整理課件ppt討論1.實驗背景介紹（目的、采用的方法、檢測原理、方法學驗證的基本知