食品中藥物殘留的檢測

第六章

食品中藥物殘留

的檢測

1第一節(jié)藥物殘留概述一、藥物殘留的概念及分類

現(xiàn)代化的畜禽生產(chǎn)中，普遍使用抗生素類藥物。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，抗生素可以防治病蟲害，刺激植物生長，提高產(chǎn)量。造成了抗生素在食品中的殘留。

2為了到達(dá)投入少量的飼料而獲得更多畜產(chǎn)品的目的，往往使用激素來促進(jìn)畜禽的生長發(fā)育。常用于食品動(dòng)物的激素為性激素具有促進(jìn)生長發(fā)育、增加體重和同步發(fā)情等作用，廣泛用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中，通過飼料添加劑或皮下置入等方法而攝入牲畜體內(nèi)，造成了肉食品中激素殘留而影響人體健康。食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，引起了世界各國的關(guān)注。因此，對食品中藥物殘留情況，必須加以監(jiān)測，以保證食用平安。3藥物使用后，局部藥物被分解或直接排出體外，另一局部將殘留在畜禽體內(nèi)，這種殘留稱為藥物殘留(residueofdrugs，residueofveterinarydrugs)。4主要?dú)埩羲幬镉幸韵聨最悾?/p>

1．抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰樂菌素等。

2．呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。

3．磺胺藥類；4.抗球蟲藥；5.激素藥類；6.驅(qū)蟲藥類。5二、藥物對食品的污染及危害(一)藥物對食品的污染1．預(yù)防和治療畜禽疾病2．作為飼料添加劑使用3．保鮮：在食品的保鮮過程中，有時(shí)參加某種抗生素以抑制微生物的生長、繁殖，使用后也會(huì)對食品造成污染。6〔二〕藥物的殘留對人體的危害藥物雖然有預(yù)防和治療疾病的作用，但同時(shí)對機(jī)體也產(chǎn)生有害的作用。藥物與毒物之間并無明顯的界限，有些毒物在適當(dāng)?shù)膭┝繒r(shí)具有治療作用，而所有藥物過量或應(yīng)用時(shí)間過長，均有毒性。殘留的藥物對人體的不良影響主要有：1．毒性作用2．使某些細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性3．過敏反響4．造成菌群失調(diào)5．致癌作用：現(xiàn)已證明殘留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。7三、各種藥物的使用原那么〔一〕合理配伍用藥畜禽發(fā)生疾病以后要正確診斷，合理用藥，能用一種藥的情況下不用多種藥?！捕嘲磭乙?guī)定的范圍、劑量使用藥物各國政府都嚴(yán)格規(guī)定了各種藥物的使用條件。多數(shù)國家規(guī)定對生命期短的食用動(dòng)物禁止應(yīng)用雌激素。8〔三〕使用獸用專用藥物一些國家規(guī)定，但凡人類經(jīng)常使用的抗生素及其藥物不能作為畜禽飼料添加劑。世界衛(wèi)生組織不主張用鏈霉素飼喂動(dòng)物，以免產(chǎn)生耐藥性菌株?！菜摹骋幸欢ǖ男菟幤谒^的休藥期是指食品動(dòng)物從停止給藥到許可屠宰或它們的產(chǎn)品許可上市的間隔時(shí)間。此時(shí)間的規(guī)定是根據(jù)上述物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)代謝的消除率和殘留量不致影響人體健康為依據(jù)的。9第二節(jié)食品中抗生素的測定抗生素種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，測定方法各不相同。因而給檢測工作帶來了許多困難?？股氐臏y定方法進(jìn)展很快。主要可分為微生物測定法，化學(xué)測定法和物理測定法三大類。10其中以微生物測定法應(yīng)用較廣。因其測定原理基于抗生素對微生物的生理機(jī)能和代謝作用的抑制，所用試劑數(shù)量少，儀器簡單。如牛乳中TTC測定法，肉中四環(huán)素杯蝶測定法都屬于微生物分析法，但這類方法測定時(shí)間較長，且結(jié)果誤差較大。11化學(xué)測定法和物理測定法那么利用抗生素中某些基團(tuán)的特殊性質(zhì)或反響來測定其含量的分析方法。包括比色法、熒光分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法。12一、高效液相色譜HPLC〔一〕高效液相色譜法的特點(diǎn)1．別離效能高2．選擇性高3．檢測靈敏度高4．分析速度快對于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對分子質(zhì)量大的有機(jī)物原那么上都可用HPLC進(jìn)行別離、分析。目前已廣泛應(yīng)用于化工、食品、醫(yī)藥、生化、衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)和高能化合物等生產(chǎn)和科研工作中。13二、四環(huán)素類抗生素殘留量的測定食品中四環(huán)素類抗生素的測定多采用微生物法?！惨弧吃順悠方?jīng)提取，用離子交換樹脂別離，甲醇溶劑洗脫，經(jīng)濃縮，殘?jiān)肕cllvaine緩沖液溶解，經(jīng)熒光鑒定，然后用微生物法進(jìn)行定量測定。本方法的最低檢出量為0.05mg/kg。14〔二〕其它抗生素也可用此法進(jìn)行測定，只是試驗(yàn)的菌種不同或培養(yǎng)基不同。測定青霉素為金黃色葡萄球菌，鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌〔6633〕，氯霉素為卵黃色八疊球菌〔9341〕，新生霉素為白色葡萄球菌。15三、鏈霉素殘留量的測定〔比色分析法〕〔一〕原理在酸性條件下，鏈霉素可與二硝基苯肼反響生成黃色的鏈霉素二硝基苯腙；多余的試劑經(jīng)乙酸丁酯提取除去后，于430nm波長處測吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中鏈霉素的含量。16四、鮮乳中抗生素殘留量的測定〔TTC試驗(yàn)〕〔一〕原理當(dāng)乳中含有抗生素時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)菌株嗜熱鏈球菌的生長受到抑制，不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑〔TTC〕復(fù)原為無色。反之，當(dāng)乳中抗生素不存在時(shí)，參加的標(biāo)準(zhǔn)菌株，就會(huì)大量生長繁殖，而且將TTC復(fù)原為紅色化合物。其紅色強(qiáng)度與細(xì)菌數(shù)量成正比。本法對各種抗生素的最低檢出量：青霉素為0.004IU/mL，鏈霉素為0.5IU/mL，慶大霉素為0.4IU/mL17〔二〕本卷須知1.本法的正確性與菌種的活力有密切關(guān)系。如菌種活力減弱時(shí)，應(yīng)屢次反復(fù)傳代加強(qiáng)活力。2.每次檢驗(yàn)每個(gè)樣品應(yīng)一式二份，另外要作陰性、陽性對照各2管，陰性對照管作無抗生素乳9mL，陽性對照管用無抗生素乳9mL加抗生素。3.水浴培養(yǎng)要避光，保持37℃，水面高于被檢樣品，判斷要迅速；檢樣經(jīng)80℃水浴加熱5min，要嚴(yán)格掌握。4.制備培養(yǎng)基的乳要絕對無抗生素存在；操作所用試管、吸管均須經(jīng)滅菌。18第三節(jié)食品中激素的測定由于動(dòng)物性食品中性激素的含量極微，所以一般的測定方法受到了限制，較常用的方法有薄層色譜法、熒光分析法、氣相色譜法和高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法具有更大的優(yōu)越性，并有取代其它方法之勢。一、性激素總量的測定〔薄層色譜法〕〔一〕原理樣品中的性激素經(jīng)有機(jī)溶劑提取、濃縮，在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣、展開后，以硫酸顯色，與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)進(jìn)行比較，從而到達(dá)定性和半定量的目的。19硅膠H硅膠中未參加粘合劑硅膠G硅膠中參加粘合劑石膏硅膠S硅膠中參加粘合劑淀粉硅膠HF254硅膠H中參加波長254nm熒光物質(zhì)硅膠GF254硅膠G中參加波長254nm熒光物質(zhì)常見的幾種硅膠吸附劑20〔二〕本卷須知1.薄層色譜法可用于性激素的鑒別、半定量測定以及含量測定前的別離。2.由于性激素的種類多，故所用的溶劑系統(tǒng)、吸附劑、展開劑和顯色劑不能一概而論?？筛鶕?jù)具體情況，挑選效果最正確者使用。21二、雌激素殘留量的測定〔包括己烯雌酚的測定〕〔熒光分光光度法)〔一〕熒光分光光度法1.原理樣品中雌激素經(jīng)鹽酸水解為甾體綴合物，用有機(jī)溶劑提取后，再經(jīng)硫酸處理，在紫外光照射下，產(chǎn)生藍(lán)色熒光；其激發(fā)波長542nm，發(fā)射波長560nm，根據(jù)熒光強(qiáng)度，可測定雌激素的含量。222.本卷須知(1)本法測定的是雌激素的總量，包括雌酮、雌二醇和雌三醇。(2)操作過程中參加氫醌，可防止熒光產(chǎn)物氧化，增進(jìn)熒光的穩(wěn)定性；二氯甲烷溶劑中參加對—硝基苯酚也起增進(jìn)熒光穩(wěn)定性的作用。(3)因?yàn)榇萍に赜蟹恿u基存在而呈弱酸性，用碳酸氫鈉緩沖液〔pH10.5〕洗滌，可將那些強(qiáng)酸性物質(zhì)洗掉。23(4)測定中用NaOH振搖，可使雌激素轉(zhuǎn)入NaOH液層，而中性甾體仍留在有機(jī)相中，起到去除雜質(zhì)的作用。(5)在作乙醚提取之前，參加固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至10，是乙醚定量提出雌激素的關(guān)鍵。24(二〕液相色譜法1.原理試樣勻漿后，以甲醇提取過濾，注入HPLC柱中，以紫外檢測器鑒定。于波長230nm處測定吸光度，同條件下繪制工作曲線，己烯雌酚含量與吸光度值在一定濃度范圍內(nèi)成正比，試樣與工作曲線比較定量。本法適用于新鮮雞肉、牛肉、豬肉、羊肉中己烯雌酚殘留量的測定。252.分析步驟〔1〕提取及凈化：甲醇〔2〕色譜條件〔3〕繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線〔4〕測定263.本卷須知〔1〕對主要影響因素甲醇、磷酸二氫鈉、p