化學(xué)止咳平喘藥色甘酸鈉的色譜保留時(shí)間研究

化學(xué)止咳平喘藥色甘酸鈉的色譜保留時(shí)間研究

1傳統(tǒng)“中藥制劑”難以識(shí)別咳嗽和中藥歷史悠久，療效肯定，具有豐富的藥物來(lái)源、低毒和低價(jià)的優(yōu)點(diǎn)。這一直深受患者喜愛(ài)。但近來(lái)發(fā)現(xiàn)市場(chǎng)上某些所謂“強(qiáng)效、速效”治療咳嗽、哮喘的“純中藥制劑”,往往被非法摻入治療咳喘的化學(xué)藥物成分色甘酸鈉、氨溴索、克倫特羅等,面對(duì)此類(lèi)的違法行為,光憑肉眼很難識(shí)別,必須通過(guò)現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)的檢測(cè)才能識(shí)別,現(xiàn)有單一的薄層色譜法、紫外分光光度法,已很難滿(mǎn)足檢測(cè)的要求,尤其是干擾成分多且量少的情況。雖然現(xiàn)有HPLC-MS法可以解決此類(lèi)問(wèn)題,但儀器太昂貴,基層單位很難擁有,故本文根據(jù)實(shí)際需要,建立了HPLC這種專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高且基層適用的檢測(cè)技術(shù),有很大的實(shí)際應(yīng)用意義。2實(shí)驗(yàn)部分2.1色甘酸鈉對(duì)照品Agilent1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);AgilentEclipseXDB-C18色譜柱(美國(guó)Agilent公司);752紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)。色譜純甲醇(美國(guó)Fisher公司);色甘酸鈉對(duì)照品(武漢鑫華遠(yuǎn)科技術(shù)有限公司,純度≥97%,批號(hào):100599-200502)。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。樣品:止咳中藥制劑S1(口服液)、S2(口服液)、S3(口服液)、S4(口服液)、S5(口服液)、S6(口服液)、S7(口服液)、S8(膠囊)、S9(膠囊)、S10(膠囊)、S11(膠囊)、S12(膠囊)、S13(片劑)、S14(片劑)、S15(片劑)、S16(丸劑)、S17(顆粒劑)、S18(顆粒劑)、S19(顆粒劑)、S20(顆粒劑),均為市售常用止咳中藥。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1流動(dòng)相、流速和檢測(cè)方法色譜柱:AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇∶0.34%磷酸二氫鉀=15∶85;流速:1.0mL·min-1;進(jìn)樣量:5μL;檢測(cè)器:UV檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng):240nm。2.2.2紫外分光光度計(jì)上色甘酸鈉最大吸收波長(zhǎng)取色甘酸鈉對(duì)照品加水制成40μg·mL-1的溶液。以水為空白,置于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上,在200—400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描(見(jiàn)圖1)。從光譜圖可知色甘酸鈉在219、238nm和327nm有最大吸收。為減少末端吸收的干擾,故選擇240nm波長(zhǎng)處作為檢測(cè)波長(zhǎng)。2.2.3溶解成分配的量表準(zhǔn)確稱(chēng)取色甘酸鈉對(duì)照品18.49mg,置于小燒杯中溶解后轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,再準(zhǔn)確量取2mL置于10mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,即得。2.2.4膠囊、飲料、服用品若供試品為片劑、丸劑、顆粒劑,研細(xì),稱(chēng)取一次最大服用劑量,置于具塞錐形瓶中,加水20mL超聲處理20min,過(guò)濾,并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中用水稀釋至刻度,搖勻,即得;若供試品為膠囊劑,取一次最大服用劑量?jī)?nèi)容物,研細(xì),囊殼加水10mL,加熱使溶解,其溶液與膠囊內(nèi)容物混合,置于具塞錐形瓶中,加水20mL,超聲處理20min,過(guò)濾,并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中用水稀釋至刻度,搖勻,即得;若供試品為口服液,取供試品一次服用量,加甲醇20mL,振搖,離心(1000r/min)15min,取上清液至25mL容量瓶中,加水至刻度,混勻,即得。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。2.2.5準(zhǔn)分離主溶液的制備取處方中不含色甘酸鈉的止咳平喘類(lèi)中成藥,按2.2.3項(xiàng)下的方法制備,即得。2.2.6色甘酸鈉方準(zhǔn)確稱(chēng)取色甘酸鈉對(duì)照品,加入處方中不含色甘酸鈉的止咳平喘類(lèi)中成藥中,混勻。按2.2.3項(xiàng)下的方法制備成每毫升中約含色甘酸鈉各120μg的溶液,即得。3結(jié)果與討論3.1色甘酸鈉測(cè)定見(jiàn)圖2。由圖2可知,對(duì)照品色甘酸鈉保留時(shí)間為32.5min,在陽(yáng)性對(duì)照溶液中均能檢測(cè)到色甘酸鈉,而在陰性對(duì)照溶液中均不能檢測(cè)到色甘酸鈉。3.2色甘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制準(zhǔn)確稱(chēng)取色甘酸鈉對(duì)照品適量,加水制成400μg·mL-1的溶液,準(zhǔn)確量取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,各進(jìn)樣5μL,以色甘酸鈉對(duì)照品的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)x,對(duì)照品的峰面積為縱坐標(biāo)y,繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程和相關(guān)系數(shù)y=14.20758x-60.14365,r=0.9991實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明色甘酸鈉在40—200μg·mL-1之間線(xiàn)性關(guān)系良好。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及檢出限取2.2.3項(xiàng)中對(duì)照品溶液(40μg·mL-1)稀釋100倍,準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液5μL,注入液相色譜儀,記錄主峰高約為噪音峰高的3倍時(shí)的色譜圖確認(rèn)檢出限。經(jīng)實(shí)驗(yàn),色甘酸鈉的檢出限為0.744μg·mL-1。3.4進(jìn)樣的測(cè)定取2.2.3項(xiàng)下濃度為111.6μg·mL-1對(duì)照品溶液,按色譜條件下方法,以5μL的進(jìn)樣量分別注入色譜儀5次,記錄色譜圖,按色甘酸鈉峰面積計(jì)算,RSD=0.4%(n=5)結(jié)果表明精密度良好。3.5加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)對(duì)照品溶液配制:取2.1項(xiàng)下樣品S7、S8、S2的一次最大服用量各3份,準(zhǔn)確稱(chēng)取色甘酸鈉對(duì)照品適量分別加入到上述樣品中,照2.2.4項(xiàng)下方法制備成供試品溶液,按色譜條件下方法,進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn),計(jì)算其平均回收率為96.4%(見(jiàn)表1)。3.6重復(fù)實(shí)驗(yàn)取2.2.4下供試品溶液各進(jìn)樣5次,依法操作,RSD=1.1%(n=5),結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。3.7樣品的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取色甘酸鈉對(duì)照品18.49mg,照2.2.3項(xiàng)下方法制備成對(duì)照品溶液,取2.1項(xiàng)下樣品S1—S20,照2.2.4項(xiàng)下方法制備成供試品溶液,分別準(zhǔn)確吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。供試品色譜中,未呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰,檢測(cè)結(jié)果所選20種中藥止咳制劑未發(fā)現(xiàn)有非法添加色甘酸鈉化合物。4系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)制備供試品溶液使用水直接提取樣品作