膠體金法與抗原片熒光法檢測流行性出血熱的比較

膠體金法與抗原片熒光法檢測流行性出血熱的比較

流行出血（ehf），即腎綜合征出血（hfrs），是由老鼠傳播的一種急性病毒性傳染病。臨床上以發(fā)熱、出血和急性腎功能損害為主要特征。該病流行于世界上38個(gè)國家和地區(qū),中國是EHF疫情最嚴(yán)重的國家,據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),近10年來我國EHF的累積報(bào)病例數(shù)占全世界報(bào)病國家總病例數(shù)的90%左右。做好該病的監(jiān)測工作意義重大[3~5]。目前,臨床上有抗原片熒光法或免疫膠體金法檢測EHF,本研究擬通過比較,篩選一種更適合的方法用于日常檢測。另外,由登革病毒引起的登革熱(DF)、登革出血熱(DHF)和登革休克綜合癥(DSS),已成為除歐洲以外所有大陸流行地區(qū)普遍關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。在我國,以往登革熱主要在華南地區(qū)和臺灣省流行,近幾年隨著國際交往的日益頻繁,登革熱在我國的流行范圍不斷擴(kuò)大[6~8],流行頻度也有所上升。2004年7~10月在浙江省慈溪市突發(fā)疑似登革熱暴發(fā)疫情,共報(bào)告病例113例,發(fā)病83例,其中血清學(xué)診斷68例,臨床診斷15例,可見血清學(xué)診斷的重要性。這些病例中,發(fā)熱100%,發(fā)病后出現(xiàn)皮疹(63.5%),肌肉關(guān)節(jié)酸痛(60.9%),三紅征(顏面、頸部、胸部潮紅)(59.8%)、頭痛(56.4%)。這些癥狀與EHF很相似,所以,我們考慮,將這些EHF檢測陰性卻疑似登革熱的病例進(jìn)行登革熱抗體的檢測,以排除登革熱病毒的感染。1材料和方法1.1試驗(yàn)片和試劑出血熱和登革熱IgM、IgG金標(biāo)試劑盒購于廈門市波生生物技術(shù)有限公司?？乖?購于浙江省疾病預(yù)防控制中心。登革熱IgM、IgG抗體檢測試劑盒購于澳大利亞PANBIO公司(CatNo.E-DEN01M,CatNo.E-DEN02G)。按照說明書在有效期內(nèi)使用。1.2患者的血清采集2005~2008年南京地區(qū)高淳、鼓樓醫(yī)院等地臨床確診或懷疑為腎綜合征出血熱病人的血清。1.3方法出血熱和登革熱IgM、IgG金標(biāo)法,以及出血熱抗原片熒光法均按說明書進(jìn)行操作。1.4抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)法在20min內(nèi)記錄結(jié)果,陽性對照條帶清晰表明結(jié)果可靠,在IgM、IgG相對應(yīng)位置出現(xiàn)條帶即判斷相應(yīng)抗體陽性,無條帶即為陰性;抗原片在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞漿內(nèi)有無特異性熒光顆粒,陽性對照應(yīng)有細(xì)胞漿內(nèi)特異性熒光顆粒,而陰性對照應(yīng)無細(xì)胞漿內(nèi)特異性熒光顆粒。1.5統(tǒng)計(jì)分析用χ2檢驗(yàn)的Fisher確切概率法檢驗(yàn)(注:因理論頻數(shù)小于1,故采用χ2檢驗(yàn)該法,直接計(jì)算P值)。2結(jié)果2.1兩種類型的炎癥反應(yīng)熱測試方法的比較2.1.1免疫膠體金法檢測血熱陽性血清結(jié)果檢測南京地區(qū)2005~2008年經(jīng)抗原片熒光法或免疫膠體金法檢測為陽性的45份臨床確診或懷疑為腎綜合征出血熱病人的血清,以及15份陰性血清,再用兩種方法同時(shí)檢測,發(fā)現(xiàn)有一份膠體金法檢測為陽性的血清,用抗原片法檢測為陰性,其余44份陽性血清和15份陰性血清結(jié)果一致,1份抗原片法檢測為陰性的樣本免疫膠體金法檢測是IgM陽性。經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn),兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。見表1。2.1.2熒光顯微鏡的使用膠體金法操作簡單,需要的簡單的用具試劑盒中都有,不需要另外準(zhǔn)備;而抗原片法則相對復(fù)雜,需要配制必要的溶液,還需要昂貴的熒光顯微鏡,其使用需要專門培訓(xùn)。膠體金法20min出結(jié)果;抗原片需要2h。2.1.3光顯微鏡下的定性診斷膠體金法結(jié)果判斷很簡單,條帶有無直接觀察;而熒光顯微鏡下關(guān)于特異性胞漿顆粒的判斷需要一定的專業(yè)知識基礎(chǔ)和經(jīng)驗(yàn)的積累,尤其是對于感染早期,抗體滴度低的樣本結(jié)果判斷可能因人而異,具有主觀性。2.2排除建于炎癥熱陰性樣本的可能性15例流行性出血熱抗體陰性樣本再用進(jìn)口抗體捕獲法檢測特異性IgG、IgM抗體,結(jié)果為陰性。3抗體檢測的有效性和準(zhǔn)確性出血熱檢測結(jié)果,膠體金法,6例IgG陽性,33例IgG、IgM雙陽性,6例IgM陽性?？乖瑹晒夥?44例陽性,1例陰性。15例陰性結(jié)果一致。從檢測結(jié)果來看,兩者沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,都適合于臨床檢驗(yàn)。但從準(zhǔn)確性來看,膠體金法比抗原片法多一個(gè)陽性,原因是抗原片法對流行性出血熱早期只有IgM抗體的樣本檢測可能更容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。從操作方法來看,膠體金法操作簡單,不需要特殊儀器和技能,而抗原片法則相對復(fù)雜,熒光顯微鏡屬于較昂貴儀器,其使用需要專門培訓(xùn)。從結(jié)果判斷來看,膠體金法很簡單,條帶有無直接觀察;而熒光顯微鏡下關(guān)于特異性胞漿顆粒的判斷需要一定的專業(yè)知識基礎(chǔ)和經(jīng)驗(yàn)的積累,尤其是對于感染早期,IgM抗體滴度低的樣本結(jié)果判斷可能因人而異,具有主觀性。從實(shí)踐來看,雖然膠體金法成本相對較高,但20min出結(jié)果;而抗原片需要2h。所以,我們的結(jié)論是膠體金法比抗原片熒光法成本高,但檢測方法簡潔,出結(jié)果快,結(jié)果容易判斷,不需要特殊儀器,更適合于CDC常規(guī)檢測。流行性出血熱臨床表現(xiàn)錯(cuò)綜復(fù)雜。潛伏期通常為7~14d,有短至4d者,偶見長至2月。典型病例有3大主征:發(fā)熱,三紅,腎臟損害表現(xiàn)。典型病例呈五期經(jīng)過,即發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期。輕型或治療合理而及時(shí)者,五期過程常不明顯,或出現(xiàn)越期現(xiàn)象;重癥病例病情重,來勢兇猛,病期可相互重疊。少數(shù)病例可僅有發(fā)熱、熱退后癥狀消退。登革病毒引起的登革熱、登革出血熱以及登革熱休克綜合征在臨床癥狀上有很多相似,高熱,三紅,肌肉疼痛等。所以我們考慮是否流行性出血熱檢測陰性樣本會有登革熱陽性的可能呢?從15份血清樣本的檢測結(jié)果來看,用國產(chǎn)膠體金法檢測有一例登革熱IgM抗體陽性,進(jìn)一步用進(jìn)口試劑盒抗體捕獲法進(jìn)行檢測,結(jié)果特異性IgG、IgM抗體均為陰性。這很可能是黃病毒的交叉反應(yīng)導(dǎo)致國產(chǎn)膠體金法的假陽性結(jié)果。在我國,主要的黃病毒成員有乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒和登革病毒。針對該病例,還需要回訪,并采血進(jìn)行進(jìn)一步的檢測。盡管如此,對其進(jìn)行登革熱的檢測仍然是很有意義的。從2004年浙江省登革熱暴發(fā)的流行病學(xué)調(diào)查來看,該病呈輸入性,且有明顯的地域性。首例是一