生化湯對子宮作用的影響

生化湯對子宮作用的影響

生化湯是婦科疾病的常用方劑，尤其是治療產(chǎn)后疾病的常用方劑。它具有活血化瘀、調(diào)經(jīng)止痛的功效。所有配方都由當歸、川藥、桃仁、浸姜和甘草組成。該方源于南宋末年的《女科秘要》,后被《傅青主女科》收錄而廣為流傳,時至今日已廣泛應(yīng)用于臨床,療效顯著。許多科研工作者做了大量的工作和較深入的研究,并取得了一定的成果,本文就近5~10年來生化湯的研究進展做一簡要綜述。1關(guān)于藥理學(xué)的研究1.1生化湯提取物對妊娠合并心臟病精子肌電近年來在生化湯對子宮作用的影響上研究較多,且主要以研究孕后動物的子宮平滑肌為主,對正常未孕及產(chǎn)后動物子宮平滑肌的影響較為少見。趙丁等通過對正常未孕、雌激素預(yù)處理后及產(chǎn)后小鼠的離體子宮的觀察,發(fā)現(xiàn)對正常未孕小鼠,低劑量生化湯提取物使其子宮平滑肌收縮頻率增強,收縮強度無顯著影響,因而子宮活動力略增強,但無統(tǒng)計學(xué)差異,中劑量使其子宮平滑肌收縮頻率略增加,收縮強度減弱,子宮活動力減弱,高劑量使其子宮收縮頻率和強度均減弱,子宮活動力減弱,呈現(xiàn)“雙向作用”;對雌激素預(yù)處理后的小鼠,低、中、高劑量均使其子宮收縮頻率顯著增強,但收縮強度無明顯變化,子宮活動力顯著增強;對產(chǎn)后小鼠的子宮,低、中劑量使子宮平滑肌收縮頻率略增強,收縮強度顯著減弱,子宮活動力顯著減弱,高劑量對收縮頻率無顯著變化但收縮強度明顯減弱,子宮活動力顯著減弱。洪敏等對生化湯與縮宮素對懷孕末期家兔子宮平滑肌電活動的影響進行了對比,結(jié)果表明,生化湯提取物能明顯增加懷孕末期家兔子宮體的肌電活動,但對子宮頸的肌電活動作用不明顯,說明生化湯提取物能顯著提高懷孕末期家兔子宮平滑肌的興奮性,引起子宮收縮,發(fā)動分娩,但對子宮頸作用不明顯,這有利于產(chǎn)程正常進行。通過觀察離體子宮平滑肌的肌電動作電位時程,表明生化湯提取物誘發(fā)的子宮體收縮富有節(jié)律性,溫和而持久。王明軍等通過對生化湯縮宮效應(yīng)的正交設(shè)計分析,發(fā)現(xiàn)川芎與炮姜的組合是促進子宮收縮的最佳組合。他們又對生化湯與芎姜合劑的縮宮效應(yīng)進行了對比,發(fā)現(xiàn)兩個處方達到縮宮藥峰的時間不同,芎姜合劑藥峰時間較早,但是二者在各藥峰時間的灌胃給藥血清的縮宮作用相近。李喜香等采用大鼠離體子宮運動實驗及玻片法和斷尾法觀察了新生化口服液對大鼠子宮運動和小鼠出/凝血時間的影響,發(fā)現(xiàn)新生化口服液對大鼠離體子宮收縮蠕動有明顯促進作用,可使離體子宮收縮頻率增加,收縮幅度升高;可明顯縮短小鼠出/凝血時間,并增加子宮收縮幅度及收縮頻率,說明它可通過提高子宮肌壁張力,減少充血,縮短凝血時間,促進增生過厚的子宮內(nèi)膜迅速剝脫而止血。1.2生化湯治療血流變性血管炎作用的研究生化湯中的當歸、川芎、桃仁等均屬活血化瘀藥物,對血液及心血管系統(tǒng)有顯著的作用。任清華等研究發(fā)現(xiàn)生化湯具有明顯的抗體外血栓形成的作用,說明生化湯對血液的流變性及心血管系統(tǒng)有一定影響,可改善高黏度的血流。宋金春等通過對生化湯及生化丸對血瘀證大鼠作用的觀察,發(fā)現(xiàn)生化湯中、高劑量組和生化丸組的紅細胞聚集指數(shù)和紅細胞電泳指數(shù)均顯著低于模型組(P<0.05),同時正常組和高劑量組的紅細胞變形指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05),且呈一定的量效關(guān)系,說明生化湯可明顯降低正常大鼠的全血比黏度、全血還原黏度、紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞電泳指數(shù)等一系列指標,提示生化湯具有一定改善血液流變性及血液淤滯狀態(tài)的作用。他們又通過對生化湯誘導(dǎo)ADP大鼠血小板聚集率、血小板黏附率以及紅細胞數(shù)、血小板數(shù)、血紅蛋白濃度影響的觀察,發(fā)現(xiàn)生化湯可抑制血小板的聚集和黏附且呈現(xiàn)一定量效關(guān)系;對于正常大鼠,生化湯能顯著降低血小板聚集百分率及血小板黏附率,提高血小板抑制百分率,從而進一步說明了生化湯活血化瘀,縮短小鼠出/凝血時間的功效。胡小勤等運用免疫組織化學(xué)和RT-PCR方法,觀察了生化湯不同劑量對血瘀證動物模型血管內(nèi)皮細胞幾種黏附分子及誘生型一氧化氮合酶(iNOS)表達的影響,結(jié)果提示生化湯對血瘀證大鼠血管內(nèi)皮細胞黏附分子蛋白及mRNA的表達,尤其對mRNA的表達,呈現(xiàn)出了明顯的量效關(guān)系,從分子生物學(xué)和分子免疫學(xué)角度闡明了生化湯治療血瘀諸證的作用。另外,宋金春等對生化湯補血作用進行了研究。通過實驗觀察得知生化湯能有效的提高失血性貧血小鼠的紅細胞和血紅蛋白;對環(huán)磷酰胺所致的小鼠骨髓有核細胞減少有明顯的改善作用,對骨髓的造血機能有明顯的促進作用;對小鼠的髓外造血有一定的促進作用?？梢娚瘻梢允贡緛砭突钴S的造血功能更加活躍,有明顯的抗貧血作用,并能促進骨髓及脾臟的造血功能。宋金春等還通過實驗觀察到生化湯對健康大鼠細胞、血紅蛋白、血小板在正常的波動范圍內(nèi)有一定的提升作用,這說明生化湯在改善血液流變性的同時還具有一定的補血、養(yǎng)血作用。綜上所述可見,生化湯在對血液及心血管系統(tǒng)的作用表現(xiàn)為:明顯縮短小鼠出/凝血時間,抗體外血栓作用,改善血液流變性,改善微循環(huán),促進骨髓及脾臟的造血功能等作用,這些正好對應(yīng)了其去瘀生新,既活血又止血的功效。1.3明生化湯治療侯涿生等對生化湯抗炎作用進行了研究。在三批實驗中,生化湯組有兩只小鼠在給藥后3h,巴豆混合液所致的腫脹完全消失,說明生化湯在對抗炎癥的治療中,能消除瘀血水腫,明顯的減輕小鼠耳部的炎性腫脹。楊奎等對小鼠灌胃生化湯后,亦發(fā)現(xiàn)它能明顯抑制醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)(P<0.05)。另外楊奎等于小鼠分娩后24h開始,灌胃給藥生化湯,1次/d,給藥7d后小鼠子宮重量明顯減輕,胎盤點消失快,對ICR種小鼠產(chǎn)后子宮復(fù)舊有明顯作用(P<0.05),但對小鼠體重?zé)o明顯影響。1.4家兔口服阿魏酸加生化湯后的藥動學(xué)特征王雁梅等利用反相高效液相色譜儀,對健康女性志愿者口服生化湯后血清中的阿魏酸含量進行了藥動學(xué)研究,結(jié)果顯示健康女性服用生化湯后,體內(nèi)藥動學(xué)歸屬二室開放模型,T1/2Ka為11.19min,吸收速率常數(shù)Ka為0.062min-1,達峰時間為22.78min,說明生化湯復(fù)方有效成分自胃腸吸收迅速;T1/2α為18.72min,分布速率常數(shù)α為0.037min-1,說明復(fù)方中有效成分在體內(nèi)分布較快;T1/2β為79.21min,消除速率常數(shù)β為0.009min-1,說明復(fù)方中有效成分在體內(nèi)消除過程較快。此結(jié)果與宋金春等用高效液相色譜法對家兔口服生化湯后血漿藥動學(xué)特征相比結(jié)果大致相同,后者的血藥濃度-時間關(guān)系符合二室模型,只是家兔血藥濃度達峰時間(12.74min)較晚。宋金春等又對家兔口服阿魏酸及口服阿魏酸加生化湯后阿魏酸的血藥濃度進行了藥動學(xué)比較,數(shù)據(jù)處理和模型擬合后得兔口服阿魏酸及兔口服阿魏酸加生化湯后的阿魏酸分布、代謝呈開放性一室模型,阿魏酸加生化湯對阿魏酸相對生物利用度為302.5%,藥動學(xué)參數(shù)表明兔口服阿魏酸后,血中阿魏酸吸收非常迅速(Ka、T1/2Ka和Tpeak),消除緩慢[Ke、T1/2Ke和CL/F(s)];加服生化湯后,加快了阿魏酸的吸收(Ka、T1/2Ka、Cmax和AUC),減緩了阿魏酸消除[Ke、T1/2Ke和CL/F(s)],提高了阿魏酸的相對生物利用度達2倍。1.5生化湯對小鼠肝腎功能及組織形態(tài)的影響楊奎等按1.23g/kg和24.6g/kg生化湯的耐受量對大鼠灌胃給藥,1次/d,連續(xù)14d,觀察生化湯對動物生長發(fā)育情況和體重、肝功能、腎功能和血常規(guī)的影響,結(jié)果表明,生化湯對動物的生長發(fā)育、體重、肝功能、腎功能、血常規(guī)和對心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢及子宮形態(tài)組織均無明顯毒性損傷作用。李喜香等根據(jù)有關(guān)文獻進行了急性毒性試驗,將新生化口服液按最大可給藥濃度給小鼠灌胃給藥,1d內(nèi)給藥3次,間隔時間4h,連續(xù)觀察7d,小鼠未見死亡發(fā)生,也未見明顯異常反應(yīng),計算得小鼠1日給藥最大耐受量為臨床成人用量的800倍,表明該藥安全系數(shù)較大。1.6指紋圖譜檢測宋金春等運用血清藥物化學(xué)方法對生化湯進入人體內(nèi)以何種成分、何種形式發(fā)揮作用及其作用機制進行了初步研究。發(fā)現(xiàn)給藥后血清指紋圖譜中當歸和川芎有較好的譜峰,其他各味藥譜峰不理想,可能與當歸和川芎為君、臣藥有關(guān),也可能是流動相不適合的關(guān)系;并發(fā)現(xiàn)了在生藥中沒有對應(yīng)來源的峰。其結(jié)果初步闡明了生化湯血清的部分化學(xué)成分及來源,通過各單味藥、生化湯和含藥血清指紋圖譜的比較,得知生化湯各效應(yīng)成分并不是簡單的加和關(guān)系,體外看似主要成分卻并不一定是主要藥效部位。2不同溶劑對生化湯藥效學(xué)的影響因為阿魏酸為當歸、川芎中所含的主要成分,所以多數(shù)配伍組方化學(xué)分析研究中均以阿魏酸為指標。宋金春等以阿魏酸為指標,用反相高效液相色譜法對生化湯各味藥的配伍進行了研究,結(jié)果表明生化湯原方中阿魏酸的煎出量在各樣本中最高;當歸與川芎合煎,阿魏酸的煎出量有一定加和性,加入桃仁、甘草、干姜后阿魏酸的煎出量降低。王雁梅等用阿魏酸為指標,對生化湯單煎液和共煎液中阿魏酸含量進行了比較,發(fā)現(xiàn)生化湯共煎液中的阿魏酸的溶出量明顯高于單煎液(P<0.01)。王雁梅等運用反相高效液相色譜法對生化湯用不同溶媒煎煮阿魏酸的煎出量進行觀察,結(jié)果表明,不同溶媒煎煮的生化湯中,阿魏酸的溶出量存在極顯著差異(P<0.01),阿魏酸溶出高低順序為:(童便+黃酒)>(黃酒+童便+水)>(黃酒+水)>水;(黃酒+童便)、(黃酒+童便+水)與水煎組比,均可顯著提高湯劑中阿魏酸溶出量(P黃酒+童便+水、P黃酒+童便<0.01);(黃酒+水)與水煎組無明顯差別(P黃酒+水>0.05)。此前也有報道稱用水200ml、黃酒100ml浸泡10min,煎煮,沸后20min,過濾,殘渣加水100ml再煎煮,沸后10ml阿魏酸煎出率較高。王明軍等觀察了加味生化湯飲片共煎與單煎的藥效學(xué)差異,發(fā)現(xiàn)不論是單煎還是共煎,藥效大體一致,均可促進離體小鼠子宮肌肉的收縮,但是共煎組止血效應(yīng)優(yōu)于單煎組。王明軍又對該方不同提取部位的時效關(guān)系進行了比較與分析,發(fā)現(xiàn)水提醇沉物具有促進子宮收縮的作用,不同提取部位對正常小鼠離體子宮肌活力產(chǎn)生的影響不同,復(fù)方揮發(fā)油的抗子宮收縮作用與水溶性成分醇提物的促子宮收縮作用反映了復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的多樣性。關(guān)于炮制因素對生化湯方劑中有效成分的影響,王雁梅等做了研究。他們考察了由甘草和干姜的不同炮制品與生化湯中其他三味藥組合構(gòu)成的4種樣本中阿魏酸含量的變化,說明干姜、甘草的不同炮制方法對生化湯中阿魏酸的煎出率有影響,其中生化湯經(jīng)典組方(炮姜+炙甘草)組阿魏酸含量最高。3內(nèi)含量測定3.1測定條件及結(jié)果飲片及制劑中主要成分的含量測定多以質(zhì)量控制為目的,以目前文獻報道來看,高效液相色譜法是目前測定生化湯及其制劑主要成分含量應(yīng)用最廣泛的方法,此法具有測定樣品范圍廣、樣品制備步驟少、成本低、分離效率高、靈敏度高、測定結(jié)果準確等特點。報道中多以反相高效液相色譜為手段,多測定阿魏酸和川芎嗪含量,選擇紫外檢測器檢測波長多為322nm,也有的選擇280nm,以甲醇、水、冰醋酸以不同比例混合為流動相,外標一點法定量,超聲或回流提取后測定。宋金春等以甲醇-水(7∶18)(含1%的冰醋酸)為流動相,C18ODS柱(250mm×4.6mm,5μm)為固定相,紫外檢測波長為280nm,外標法定量,對阿魏酸和川芎嗪含量測定進行了研究,結(jié)果阿魏酸和川芎嗪分離完全,阿魏酸在8.06~64.48mg/L的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,方程為Y=1811.32+1170.33X,r=0.9954,平均回收率為97.9%,RSD為1.4%;川芎嗪在4.03~20.15mg/L的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為Y=16.60+1401.94X,r=0.9941,平均回收率為101.9%,RSD為2.6%。另外,也有對甘草酸、水蘇堿含量測定進行研究的。丁桂蘭等采用高效液相色譜法,以C8分析柱(150mm×6.0mm,5μm)為固定相,流動相為甲醇-醋酸銨溶液(0.2mol/L)-冰醋酸(60∶40∶1),檢測波長為250mm,流速為1.01ml/min,柱溫為35℃,對生化湯丸中甘草酸進行了含量測定。結(jié)果甘草酸濃度在0.23~1.19μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系,r=0.9999,平均回收率為99.51%,RSD=0.53%(n=5)。馮守文等采用雙波長掃描法,硅膠G薄層板以正丁醇∶鹽酸∶乙酸乙酯(4∶1.5∶0.5)展開,稀碘化鉍鉀試劑顯色,雙波長(λs=510nm,λR=700nm,狹縫0.4mm×0.4mm,SX=3)反射式鋸齒掃描,對新生化口服液中水蘇堿的含量進行了測定,結(jié)果水蘇堿含量在0.18~0.30mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系,r=0.9990,回收率為97.85%,RSD=1.8%。3.2家兔耳靜脈生化湯紫外檢測結(jié)果宋金春等用水浴法除去蛋白后,采用反相高效液相色譜,以甲醇-水(7∶18)(含1%冰醋酸)為流動相,C18ODS柱(4.6mm×250mm,10μm),紫外檢測波長為280nm,同時測定了家兔耳靜脈注射生化湯后血清中阿魏酸和川芎嗪的含量,結(jié)果阿魏酸與川芎嗪有較好的分離,阿魏酸在30.2~70.8μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9974),川芎嗪在10.1~50.7μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9922),回收率分別為100.3%、100.1%。4生化湯口服液成分檢測生化湯方中當歸為君藥、川芎為臣藥,中國藥典中主要以阿魏酸含量控制當歸、川芍的質(zhì)量,但是中國藥典未收錄生化湯有關(guān)制劑質(zhì)量標準,因此,多數(shù)飲片及制劑質(zhì)量控制研究中以控制當歸和川芎質(zhì)量為主,并以阿魏酸作為含量測定指標。王祥等采用理化方法和薄層色譜法對生化口服液的主要成分益母草、當歸、川芎進行鑒別,結(jié)果用理化方法鑒別益母草藥材中益母草堿反應(yīng)明顯,薄層色譜中當歸、川芎斑點清晰,陰性對照無干擾,對于控制生化湯口服液的內(nèi)在質(zhì)量具有實際意義。邱孟等以阿魏酸為指標對制劑中有效成分進行了測定,結(jié)果回收率高,線性關(guān)系良好。李喜香等對新生化口服液質(zhì)量控制方法進行了研究,采用TLC法以硅膠G鋪板,阿魏酸、紅參對照藥材、白術(shù)對照藥材、辛弗林為對照品,對新生化口服液中的當歸、紅參、白術(shù)、枳殼進行了定性鑒別,結(jié)果顯示能有效地檢出其所含中藥有效成分;他們還選擇其方中君藥益母草中的鹽酸水蘇堿為指標,采用雙波長薄層掃描法對其進行了含量測定,結(jié)果滿意。5制備工藝研究生化湯原方以湯劑為用,現(xiàn)階段中成藥劑型研究中基本上是在湯劑的基礎(chǔ)上水提醇沉,進一步濃縮、除雜而制成,所以提取工藝多在醇沉濃度、加水量(水酒比例)、煎煮次數(shù)、煎煮時間上優(yōu)化。宋金春等采用正交設(shè)計,選擇阿魏酸含量為指標,對優(yōu)化生化湯的提取工藝進行了研究,結(jié)果以水煎煮2次、溶劑量分別為12倍和10倍、再次煎煮時間為30min為優(yōu)。汪國華等采用比較試驗及正交實驗法,以總固體得率、阿魏酸含量、揮發(fā)油提取率為考察指標對生化湯顆粒提取工藝進行了優(yōu)選,結(jié)果藥材粉碎度和蒸餾時間對揮發(fā)油提取率影響較大,以粉碎度20目,加12倍水浸泡1h,蒸餾3h,揮發(fā)油提取率最高;用70%乙醇浸漬藥材36h后,以8倍量70%乙醇,1ml/min漉速,滲漉提取有效成分溶出量最高,且結(jié)果穩(wěn)定。另外,李喜香等采用正交實驗法,選擇加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時間、醇沉濃度4個因素,以水蘇堿含量、藥液色澤、澄清度、沉淀物為指標對新生化口服液提取工藝進行了優(yōu)化,最佳方法為:煎煮3次,每次分別加水20、15、12倍量,每次2h,醇沉濃度為70%,但是加水量對有效成分提取無顯著意義。之后他們同樣又用正交實驗法,以揮發(fā)油提取率為指標,加水量、浸泡時間、蒸餾時間為因素對新生化口服液中揮發(fā)油的提取工藝進行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蒸餾時間對揮發(fā)油提取無顯著影響,最佳工藝條件為:加水7倍量,蒸餾6h。6生化湯復(fù)方基礎(chǔ)研究的建議及展望近年來,生化湯的藥理、含量測定、制劑及其質(zhì)量控制方面均取得了一定成就。藥理學(xué)方面,雖然取得了一定進展,但還是主要側(cè)重于生化湯在中醫(yī)基礎(chǔ)理論方面的研究,用藥效學(xué)來印證中醫(yī)理論中其化瘀生新、溫經(jīng)止痛之功效,對生化湯的體內(nèi)吸收、分布、轉(zhuǎn)化、排泄過程研究甚少,其有效成分及具體的藥理作用位置、靶點尚不明確;另外,還沒有對體內(nèi)藥物生物轉(zhuǎn)化效應(yīng)進行全面檢測,只是對方中極個別的主要成分進行檢測;分子生物學(xué)和免疫學(xué)方面的研究尚有許多空白;這些均影響了有效部位的研究與開發(fā),給制劑工作者帶來了難度。所以制劑方面,還是以與生化湯原方形式相似的口服液、顆粒劑、膠囊劑等原始制劑類型研究為主,提取工藝也只能滿足現(xiàn)有劑型需要,對新劑型缺乏研究,缺乏先進性。質(zhì)量控制方面主要是以阿魏酸為指標,但是這樣是否科學(xué),仍是一個難題。中藥復(fù)方與天然組合化學(xué)庫相似,作用呈多靶點、多層次,干擾因素多,因此也給中藥及其復(fù)方的藥理、藥劑、質(zhì)量控制等研究帶來了一定困難。應(yīng)借鑒現(xiàn)代藥理學(xué)、藥劑學(xué)、藥物分析學(xué)的研究方法,結(jié)合中醫(yī)藥理論特色,從藥物(復(fù)方、藥材)、有效部位、有效水平(整體、動物實驗、器官和組織細胞、分子生物學(xué)、免疫學(xué))來研究中藥物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍理論及藥效-藥動的相關(guān)性。對今后的研究工作筆者提出個人的建議如下。6.1對生化湯復(fù)方的研究應(yīng)遵循整體性原則。中醫(yī)強調(diào)辨證施治,從臟腑的聯(lián)系、人和自然關(guān)系等方面,