超微粉碎對凍干人參粉體特征和皂苷的影響

超微粉碎對凍干人參粉體特征和皂苷的影響

人參是中國傳統(tǒng)的補藥方法。凍干加工的人參其熱敏性成分丙二酸單酰基皂苷損失很少,傳統(tǒng)經(jīng)熱處理加工的人參(如紅參等)中丙二酸單?；碥粘煞执蟛糠纸到?人參凍干加工可保留鮮人參中絕大部分的活性成分,藥性與鮮人參相同,偏涼平和,適合大部分人群應(yīng)用。凍干人參抗疲勞作用顯著。超微粉碎技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種粉碎新技術(shù),在中藥加工上的應(yīng)用研究日趨增多,取得了良好的效果。由于超微粉碎使顆粒微細化導(dǎo)致表面積和孔隙率增加,細胞破壁,活性成分溶出速率和含量提高,因而能加強生物活性。對凍干人參進行超微粉碎加工,在保持成分穩(wěn)定和藥性平和基礎(chǔ)上,可提高人參的生物利用度、減少用藥量、使活性作用增強。本實驗研究了凍干人參超微粉碎對粉體特征、皂苷成分和小鼠抗應(yīng)激能力的影響。1測定項目和試劑GQUS—300型氣流粉碎機,Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng),G1312A泵,G1313A自動進樣器,G1315B二極管陣列檢測器,G1316A柱溫箱;AgilentRev.A.0901化學(xué)工作站,JSM—5610LV型掃描電子顯微鏡。人參皂苷Re、Rb1、Rb2、Rd、丙二酸單酰基Rb1對照品由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)鄭毅男教授提供,質(zhì)量分?jǐn)?shù)>99%;甲醇、乙腈為色譜純,水為超純水。凍干人參由本課題用吉林長白參隆集團提供鮮人參制備。雄性ICR小鼠由中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供,合格證號:SCXK(蘇)2002-0011。2方法和結(jié)果2.1干超微粉空氣粉碎取凍干人參粗粉,然后采用氣流粉碎,得凍干超微粉。氣流粉碎條件:進料粒度≥80目,進氣工作壓力0.8MPa,空氣耗量6m3/min。其中粉碎1次,得率為98%。2.2原藥材的粉碎特征分別取2種中藥的細粉和超微粉適量,鋪于電鏡銅臺上,噴金鍍膜后置電鏡下觀察、攝影、測量、描繪,結(jié)果見圖1?？梢娪贸Ｒ?guī)方法粉碎的顆粒較大,形狀不規(guī)則,粒徑不均勻,可以看到原藥材的粉末特征;超微粉碎粒度明顯變小,且大小均勻,已很難觀察到明顯的原藥材特征。顆粒由幾個、十幾個、甚至更多的細胞組成,偶爾見個別細胞壁破裂。超微粉在電子顯微鏡下看到絕大多數(shù)是細胞碎片,僅有極個別完整的細胞存在。傳統(tǒng)的中藥粉碎一般顆粒大小約100μm,而超微粉碎則粉碎到幾個微米。中藥經(jīng)過超微粉碎后,除了植物的細胞壁破碎外,顆粒的表面積增大了,其分散性、吸附能力、表面活性等都起了綜合性變化。表明利用氣流粉碎對凍干人參進行超微粉碎后,在電子顯微鏡下觀察大多數(shù)細胞都已破壁,且粒度均勻。2.3人參糖的比較2.3.1甲醇定容液的制備人參皂苷對照品Re6.26mg、Rb15.38mg、Rb25.31mg、Rd5.65mg,分別用甲醇定容到5mL,取1mL配制好的母液,置于10mL量瓶中,再加入甲醇定容至刻度;精密稱取丙二酸單酰基Rb12.13mg于10mL量瓶中,加入甲醇定容到刻度,即得不同對照品溶液。2.3.2超聲提取法:超聲-甲醇法精密稱取人參凍干普通粉和超微粉各1.5g,分別倒入50mL三角瓶中,加入10mL甲醇,精密稱重,超聲提取20min,然后靜置,濾過,即得。2.3.3流動相-乙腈/水處理色譜柱為MerkLichroCARTRPC18(250mm×4.6mm),流動相:0.04%磷酸(A)-乙腈(B),梯度洗脫:0～20min,20%B;20～30min,20%～32%B;30～60min,32%～33%B;60～80min,33%～42%B,柱溫:30℃,檢測波長:203nm。2.3.4對應(yīng)成分的量表取供試品溶液和對照品溶液各適量,進樣測定,采用外標(biāo)法計算樣品中各對應(yīng)成分的量,結(jié)果見圖2和表1。凍干人參經(jīng)超微粉碎后,人參皂苷溶出量明顯增加,表明人參超微粉碎后,細胞破碎,細胞內(nèi)含有的有效成分充分暴露,能夠釋放出來使其量增加。2.4超微粉劑量對小鼠生長的影響雄性ICR小鼠70只,體重18～22g,隨機分為7組,每組10只,分別為空白對照組(蒸餾水20mL/kg),普通粉低、中、高劑量(1.5、3、6g/kg)組,超微粉低低、中、高劑量(0.75、1.5、3g/kg)組。ig給藥,每日1次,連續(xù)7d。末次給藥后1h,將小鼠置于裝有20g鈉石灰的250mL廣口瓶中,5min后密閉瓶蓋,記錄小鼠存活時間,結(jié)果見表2?？梢娙藚⑵胀ǚ?、6g/kg和超細粉0.75、1.5、3g/kgig給藥7d,明顯延長小鼠耐缺氧存活時間,超微粉的作用強于等劑量的普通粉。2.5超微粉劑量對小鼠低溫游泳活性率的影響雄性ICR小鼠70只,體重18～22g,隨機分為7組,每組10只,分別為空白對照組(蒸餾水20mL/kg)、普通粉低、中、高劑量(1.5、3、6g/kg)組、超微粉低、中、高劑量(0.75、1.5、3g/kg)組。ig給藥,每日1次,連續(xù)7d。末次給藥后1h,將小鼠負重(體重的5%),置于水深40cm,水溫(15±0.5)℃的水槽內(nèi),記錄小鼠低溫游泳存活時間,結(jié)果見表3?？梢娙藚⑵胀ǚ?、6g/kg和超細粉1.5、3g/kgig給藥7d,明顯提高小鼠低溫游泳時間,超微粉的作用強于等劑量的普通粉。3超微粉碎前后人參細胞的變化丙二酸單?；藚⒃碥帐酋r人參中的特有成分,在傳統(tǒng)經(jīng)過熱處理人參加工中,其受熱極易分解,脫去丙二酸形成相應(yīng)的苷,而且經(jīng)過高溫加工的人參藥性發(fā)生變化,凍干加工可以保持鮮人參特有成分和藥性。凍干人參超微粉碎后,仍然含有較高量的丙二酸單?；?Rb1皂苷,表明超微粉碎對不穩(wěn)定成分沒有影響;超微粉碎使凍干人參細胞破壁,皂苷