鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實驗性矽肺的作用中期報告

鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實驗性矽肺的作用中期報告中期報告一、研究背景矽肺是由于長期吸入二氧化硅粉塵而引起的職業(yè)性肺病，是一種常見的職業(yè)病。矽肺的主要病理生理學(xué)特征是肺部纖維化，導(dǎo)致呼吸功能不全和呼吸道感染性疾病的發(fā)生。矽肺的發(fā)生和發(fā)展是由多種細(xì)胞類型參與的，其中巨噬細(xì)胞是最重要的細(xì)胞類型之一。巨噬細(xì)胞在矽肺的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要作用，其表型和功能改變直接影響矽肺的病理變化。糖皮質(zhì)激素是一類廣泛使用于臨床的抗炎藥物，糖皮質(zhì)激素在治療矽肺和其他肺部疾病方面有積極的療效。當(dāng)然，長期使用糖皮質(zhì)激素會導(dǎo)致多種副作用。因此，研究替代糖皮質(zhì)激素、具有更安全性和更高效性的藥物來治療矽肺，已成為研究的熱點。我們的研究表明，鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑（mineralocorticoidreceptorantagonist,MRA）可以有效抑制肺部巨噬細(xì)胞的激活和炎癥反應(yīng)，從而減少矽肺的病理改變和提高巨噬細(xì)胞的吞噬作用。本研究旨在深入探討MRA在矽肺中調(diào)節(jié)肺部巨噬細(xì)胞表型和功能的作用機(jī)制，為矽肺的治療提供新的治療策略。二、研究設(shè)計和方法1.實驗動物和組織采集實驗動物選用C57BL/6雄性小鼠，年齡6-8周，體重18-22g。小鼠自由飲食，飲用無菌水，飼養(yǎng)在溫度23±2°C、相對濕度50±10%、光照12小時/天的環(huán)境中，健康狀態(tài)良好。矽肺模型采用顆粒質(zhì)量濃度為3mg/LSiO2，霧化吸入建立。對照組采用同等體積的生理鹽水進(jìn)行建立。術(shù)后動物隨機(jī)分為矽肺組和矽肺+MRA治療組。每組動物切口處注射2mg/kgMRA溶液或等體積的生理鹽水，每周治療一次，治療6周后取肺組織進(jìn)行實驗。2.主要實驗設(shè)備及試劑流式細(xì)胞儀（BDBiosciences）、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Eppendorf）、光鏡、透射電子顯微鏡、瑞麗迪熒光素酶常量增強(qiáng)試劑盒等。3.主要實驗方法(1)巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng)采用巨噬細(xì)胞分離和培養(yǎng)常規(guī)方法，將巨噬細(xì)胞分離并培養(yǎng)至穩(wěn)定狀態(tài)。(2)流式細(xì)胞術(shù)表型分析將巨噬細(xì)胞分離和培養(yǎng)后，經(jīng)PBS清洗，用F4/80抗體作為表型分析的標(biāo)記，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。(3)轉(zhuǎn)錄組測序分析組織RNA抽提、濃縮、反轉(zhuǎn)錄，構(gòu)建RNA文庫，并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。分析基因的表達(dá)水平和巨噬細(xì)胞表型的變化情況。三、預(yù)期成果本實驗旨在探索鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實驗性矽肺的作用機(jī)制，研究預(yù)期產(chǎn)出以下結(jié)果：(1)證明MRA可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型和功能，提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力。(2)深入探討MRA調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型的作用機(jī)制，包括交叉表觀遺傳調(diào)控等，為矽肺治療提供新的治療策略。(3)通過對MR