麻痹性貝毒的研究進(jìn)展

麻痹性貝毒的研究進(jìn)展

1貝類水產(chǎn)品限制率的確定近年來，隨著有害高峰的增加，監(jiān)測和分析航道和藻類毒素變得越來越重要。許多國家和相關(guān)國際組織制定了相應(yīng)的貝類產(chǎn)品分銷模式和測試方法。麻痹性貝類毒素(Paralyticshellfishpoison,PSP)是最常見、毒性最強(qiáng)的赤潮毒素,本文重點(diǎn)介紹PSP毒性機(jī)理、檢測方法及最近進(jìn)展。2甲?；惗舅丶皀-羥基類毒素麻痹性貝類毒素(PSP)是最常見、毒性最強(qiáng)的赤潮毒素。目前已分離出20多種該類毒素,可依據(jù)基因相似性將其分為氨基甲酸酯類毒素、脫氨甲?；惗舅?、N-磺酰氨甲?；惗舅丶癗-羥基類毒素共4類,其中氨基甲酸酯類毒素中的石房蛤毒素(STX)占PSP的85%以上,固STX為PSP的主要研究對象。PSP是一種極易溶于水的白色吸水固體,不溶于石油醚、乙醛等大多數(shù)非極性溶劑,部分溶于甲醇和酒精。PSP在紫外線范圍內(nèi)不被吸收,是一種生物堿,易從酸性溶液中萃取。PSP通過選擇性阻斷Na+內(nèi)流,阻礙動作電位的形成而起抑制作用。PSP毒素及各衍生物對膜的作用機(jī)理相似,均以劑量-依賴型方式阻斷鈉離子內(nèi)流,而對靜息膜電位或鉀通道無作用。3檢測psp的主要方法檢測PSP的方法按其性質(zhì)可分為生物、理化、免疫化學(xué)三大類。3.1小鼠生物測定法生物測定法都是將毒素注射到生物體內(nèi),通過生物體反應(yīng)的時間情況來測定毒素大小的一種方法,主要包括小鼠生物測定法、家蠅生物測定法、蝗蟲生物分析法、神經(jīng)細(xì)胞生物分析法等,其中小鼠生物測定法是PSP唯一國際大多數(shù)國家普遍接受的統(tǒng)一方法,也是生物測定法研究的重點(diǎn)。小鼠生物測定法被美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)推廣為PSP的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法,是一種PSP的半定性分析方法。是定義一個鼠單位(MU相當(dāng)于0118μg)作為給予20g小白鼠注射1ml貝類提取物使其在15min內(nèi)致死的最小劑量。其優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)容易掌握,不需要使用專門儀器;缺點(diǎn)是專一性差,靈敏度不高,操作繁瑣。3.2洗脫體系及流程理化分析法是將毒素分子通過堿性氧化成為熒光衍生物或有色生物后通過紫外或熒光檢測系統(tǒng)進(jìn)行分析檢測。高效液相色譜法(HPLC)是最常用的理化分析法。HPLC法檢測不同PSP時采用不同的洗脫體系及洗脫方法,且衍生過程也不同。同小鼠生物檢測法相比HPLC具有檢測速度快、檢出限低、靈敏度高等諸多優(yōu)點(diǎn)。但是需要根據(jù)小鼠生物測定法進(jìn)行標(biāo)定且缺乏PSP分析的標(biāo)準(zhǔn)品是HPLC法的主要缺點(diǎn)。另外,影響HPLC法普遍推廣的另一個原因是PSP類似物的毒性種類都是唯一的且類似物間易相互轉(zhuǎn)化,判斷樣品中的原始或潛在總毒性較困難。3.3免疫化學(xué)檢測20世紀(jì)60年代起科研人員開始研究應(yīng)用免疫檢測技術(shù)檢測PSP;80年代末建立的酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)和放射性免疫因交叉反應(yīng)低,不能檢測所有的毒素而未能得到推廣。90年代初成功的建立了酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。免疫化學(xué)技術(shù)應(yīng)用于PSP檢測主要以單克隆抗體(MAb)為基礎(chǔ)。國外學(xué)者嘗試制備PSPMAb抗體及定量測定PSP,取得令人滿意的結(jié)果。PSP為小分子物質(zhì),不具有免疫原性,需要將其連接到大分子載體上,使其成為完全抗原,再用來免疫動物。一般采用小劑量長周期免疫方案制備單克隆抗體。免疫化學(xué)檢測法檢出限低且干擾少,對樣品前處理要求較低、簡便、快速、特異、經(jīng)濟(jì),因此具有極高的推廣價值。但免疫技術(shù)檢測貝毒存在產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)、系列標(biāo)準(zhǔn)毒素的缺乏等問題,這些問題限制著該技術(shù)的深入應(yīng)用。而且抗體往往只是針對某一種毒素所建立,對于其他貝毒常常表現(xiàn)出較低的交叉反應(yīng),不能檢測所有的貝毒等。3.4檢測方法是最新3.4.1傳感器的選擇最近發(fā)展起來的鈉通道阻斷效應(yīng)組織生物傳感器對PSP有極端的響應(yīng)靈敏度和響應(yīng)速度,這種傳感器是將一個鈉電極整合到—個含8%NaCl溶液的腔內(nèi),電極頭上覆蓋有三層膜,即兩層醋酸纖維素膜之間夾一層蛙的膀脹膜。傳感器一次檢測只需5min左右,可檢測低于86fg/ml的PSP。而且,在有0.003%NaN3的情況下,這種傳感器可持續(xù)使用約250個小時。日本和韓國均有關(guān)于采用組織傳感器法測定PSP的報(bào)道組織傳感器方法也有其弊端,比如敏感膜篩選困難,壽命低等。3.4.2麻醉性貝毒電壓敏感熒光染料檢測利用電壓敏感熒光染料測定貝體中的麻痹性貝毒是一種非常有潛力的貝毒快速篩查方法。這種方法以膀胱癌移行細(xì)胞T24為實(shí)驗(yàn)材料,采用電壓敏感熒光染料bis-oxonol,根據(jù)PSP毒素GTX2,3對藜蘆定誘導(dǎo)細(xì)胞去極化的抑制作用,建立了一種麻痹性貝毒電壓敏感熒光染料檢測法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在2～100ng·mL-1范圍內(nèi),PSP毒素GTX2,3可顯著改變培養(yǎng)體系的熒光強(qiáng)度,GTX濃度與熒光強(qiáng)度之間存在很好的線性關(guān)系。市售貝類PSP毒素檢測結(jié)果表明,此方法測定結(jié)果與小鼠法基本一致,但靈敏度更高,說明根據(jù)GTX濃度與熒光強(qiáng)度之間的線性關(guān)系可實(shí)現(xiàn)對樣品中PSP毒素的快速檢測。4半定量綜合毒性檢測由于貝類毒素的復(fù)雜性,使得以往常用的傳統(tǒng)檢測法難以解決貝毒檢測中出現(xiàn)的新問題。生物傳感器是近年來發(fā)展起來的,該方法與僅能給出半定量綜合毒性但耗時長的小鼠法和只能給出定量結(jié)果但不能給出綜合毒性理化檢測方法比較有不可替代的優(yōu)勢,由于其具有