微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案模板

第頁(yè)驗(yàn)證文件類(lèi)別：編號(hào)：部門(mén)：XXXX微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案XXXXX公司2016年XXXX微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案審批起草起草部門(mén)簽名日期質(zhì)量管理部年月日審核審核部門(mén)簽名日期質(zhì)量管理部年月日批準(zhǔn)批準(zhǔn)人簽名日期年月日

4.2文件及存放地方資料名稱(chēng)存放地點(diǎn)5、可接受的限度范圍標(biāo)準(zhǔn)5.1XXXX微生物限度檢查質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定需氧菌總數(shù)霉菌和酵母菌總數(shù)控制菌不得檢出大腸埃希菌（1g）5.2需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法采用《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部通則1105非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法中敘述的平皿法中的傾注法。控制菌檢查方法采用1106非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法中大腸埃希菌檢查方法6、測(cè)試方法6.1供試品XXXX批號(hào)：6.2培養(yǎng)基及菌種6.2.1采用符合中國(guó)藥典規(guī)定的干燥培養(yǎng)基，并經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基適用性檢查。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基批號(hào)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基批號(hào)：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)：麥康凱液體培養(yǎng)基批號(hào)：MUG培養(yǎng)基批號(hào)：6.2.2菌種名稱(chēng)編號(hào)購(gòu)入日期傳代日期傳代次數(shù)枯草芽孢桿菌第代金黃色葡萄球菌第代銅綠假單胞菌第代大腸埃希菌第代白色念珠菌第代黑曲霉第代6.3菌液制備6.3.1需氧菌、霉菌和酵母菌的檢查菌液制備6.3.1.1接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌適量至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，取上述培養(yǎng)物一定量用PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成制成適宜濃度的菌懸液，備用。6.3.1.2接種白色念珠菌適量至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)2～3天，取上述培養(yǎng)物一定量用PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液，備用。6.3.1.3接種黑曲霉適量至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20～25℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml的含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液，備用。菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2～8℃可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在適用性過(guò)程的貯存期內(nèi)使用。6.3.2控制菌的檢查菌液的制備接種大腸埃希菌適量至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，取上述培養(yǎng)物用PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成制成適宜濃度的菌懸液，備用。菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2～8℃可在24小時(shí)內(nèi)使用。菌落數(shù)確認(rèn)稀釋級(jí)別104稀釋級(jí)別105稀釋級(jí)別106稀釋級(jí)別107枯草芽孢桿菌（cfu/ml）金黃色葡萄球菌（cfu/ml）銅綠假單胞菌（cfu/ml）大腸埃希菌（cfu/ml）白色念珠菌（cfu/ml）黑曲霉（cfu/ml）6.4需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)6.4.1取供試品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，制成1：10的供試液。6.46.4.2.1分別取5份1：10的供試液各10ml分別加入0.1ml試驗(yàn)菌液（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉）混勻，使每1ml供試液中含菌量不大于100cfu。取1ml含試驗(yàn)菌液的供試液分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿。另取1ml含白色念珠菌和黑曲霉的供試液分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿。按平皿法測(cè)定其菌落數(shù)，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基用于需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌、酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。6.4.2.2取制備好的供試液，以稀釋液替代菌液同試驗(yàn)組操作。6.4.2.3取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。6.4.2.4陰性對(duì)照取相應(yīng)稀釋液代替供試液和菌液同試驗(yàn)組操作。6.4.胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30～35℃培養(yǎng)3～5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20～25℃培養(yǎng)5天，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)別兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。6.4.6.4.5結(jié)果判斷試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，可用所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢査。6.5控制菌大腸埃希菌6.5.1取供試品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，制成1：10的供試液6.5.26.5.2.1試驗(yàn)組取制備好的1:10的供試液10ml，加入0.1ml含菌數(shù)50～100cfu的大腸埃希菌菌懸液，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置30～35℃培養(yǎng)18～24h。6.5.2.2取制備好的1:10的供試液10ml，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置30～35℃培養(yǎng)18～24h。6.5.2.3陰性取制備好的PH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置30～35℃培養(yǎng)18～24h。6.5.2.4陽(yáng)性取稀釋液10ml代替供試液，加入0.1ml50～100cfu的大腸埃希菌菌懸液，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置30～35℃培養(yǎng)18～24h。6.5.3取上述培養(yǎng)物1ml，接種至100ml的麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時(shí)。若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。大腸埃希菌的鑒定應(yīng)顯MUG與靛基質(zhì)陽(yáng)性6.5.4結(jié)果若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，可按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用其他方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。7、異常情況處理嚴(yán)格按照微生物限度檢查法操作，如在檢測(cè)中出現(xiàn)不符合要求的情況出現(xiàn)，分析問(wèn)題原因后，決定是否需對(duì)本方案中設(shè)定的XXXX的微生物限度檢查方法進(jìn)行修改，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。8測(cè)試結(jié)果8.