針灸治療單純性肥胖患者的腸道菌群分析

針灸治療單純性肥胖患者的腸道菌群分析

胖是由能量代謝平衡失衡、攝入過多和（或）能耗不足引起的，以及體內(nèi)脂肪的過度積聚引起的體重超過特定區(qū)域的營養(yǎng)和代謝障礙引起的。我國成人超重率為22.8%,肥胖率為7.1%,肥胖癥已經(jīng)嚴(yán)重影響人們的生活。近年報道發(fā)現(xiàn)肥胖與腸道菌群失調(diào)密切相關(guān),而針灸減肥以其副反應(yīng)小、安全等優(yōu)勢受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注。但針灸減肥是否能調(diào)控腸道菌群,尚缺乏研究。本文通過對單純性肥胖患者進行針灸治療,選取臨床治愈及顯效患者,以及年齡、性別相匹配的健康志愿者,分析其腸道菌群的變化規(guī)律。現(xiàn)將報告如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1病例選擇選擇標(biāo)準(zhǔn)本研究的全部病例均來源于2009年5月～2010年10月成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院針灸門診收治的患者36例,其中男12例,女24例,年齡20～60歲,平均年齡39.89±12.88歲。參照1997年第五屆全國肥胖病研究學(xué)術(shù)會議制定的單純性肥胖癥診斷標(biāo)準(zhǔn),納入病例。入選者納入標(biāo)準(zhǔn):體重指數(shù)(BMI)≥25kg/m2;治療前3個月沒有服用減肥藥;排除標(biāo)準(zhǔn):合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病;長期使用激素類藥物、口服避孕藥者;肥胖呈急性過程,過敏體質(zhì)或暈針者。1.2穴位同證治療對單純性肥胖患者首先進行辨證分型,基于中醫(yī)診斷結(jié)果選取中脘、水分、氣海、天樞、大橫、水道、腎俞、脾俞等穴位,并隨證加減。留針30分鐘,隔天針灸1次,10次為1療程。間隔5天后,開始下一個療程,共治療3個療程。在治療前及每個療程后收集患者大便標(biāo)本,進行腸道菌群培養(yǎng),同時記錄體重。1.3體質(zhì)量下降療效療效評定標(biāo)準(zhǔn):按照《中藥新藥治療肥胖病的臨床研究指導(dǎo)原則》中單純性肥胖病的療效評定標(biāo)準(zhǔn)。近期痊愈:體質(zhì)量下降已達到標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量或超質(zhì)量范圍內(nèi),有關(guān)癥狀消失,持續(xù)3個月以上。顯效:體質(zhì)量下降5kg以上或脂肪百分率下降5%以上,有關(guān)癥狀基本消失。有效:體質(zhì)量下降3kg以上或脂肪百分率下降l%以上,有關(guān)癥狀減輕。無效:體質(zhì)量下降未達3kg及脂肪百分率下降未達1%,有關(guān)癥狀未減輕。2實驗方法菌群檢測與方法,參考丁維俊等的文獻完成操作。2.1樣本收集和保存在清晨收集患者和健康志愿者的糞便標(biāo)本約0.5g置于盛有4.5ml硫乙醇酸鹽轉(zhuǎn)運液試管中,將標(biāo)本凍存于-150℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2前及治療后的大樣選擇針灸治療痊愈/顯效者的患者治療前及治療后的大便樣本。同時選取年齡、性別與生活狀態(tài)相匹配的健康志愿者,收集其大便標(biāo)本,完成實驗研究。2.3厭氧培養(yǎng)箱dy-型醫(yī)用培養(yǎng)箱(HHB11420型,江蘇連云港市墟溝電器廠);厭氧培養(yǎng)箱(DY-Ⅱ型,浙江義烏冷凍機總廠);隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(pc370型,上海躍進醫(yī)療器械廠)、電熱恒溫水浴箱(SSH-W21～600型,天津市泰斯特儀器有限公司)。2.4培養(yǎng)基的設(shè)置將樣本置于37℃的電熱恒溫水浴箱解凍,稱取0.1g置于盛有0.9ml稀釋液的試管中做對數(shù)稀釋,然后做系列對數(shù)稀釋到10-7。選取不同濃度的稀釋液進行接種培養(yǎng)。需氧菌:需氧菌總數(shù)(營養(yǎng)血平板)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;大腸桿菌(EMB培養(yǎng)基)選擇10-3、10-4、10-5稀釋度;腸球菌(EC培養(yǎng)基)選擇10-1、10-2、10-3稀釋度。厭氧菌:厭氧菌總數(shù)(GAM培養(yǎng)基)選擇10-5、10-6、10-7稀釋度;雙歧桿菌(改良BS瓊脂)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;乳酸桿菌(LBs乳酸桿菌培養(yǎng)基)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度;類桿菌(卡那霉素-萬古霉素血瓊脂)選擇10-4、10-5、10-6稀釋度。用移液器吸取不同稀釋度的細菌樣本液各20μl,滴于培養(yǎng)基表面,每個稀釋度作3個平行樣,將已接種好的培養(yǎng)皿分別放入37℃需氧和厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～72h。2.5單位cfu的對數(shù)值lg菌落計數(shù):計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),即得到每g糞便標(biāo)本的菌落形成單位(CFU)的對數(shù)值(lg)表示。種類鑒定:根據(jù)細菌形態(tài)學(xué)、菌落、菌細胞和菌落形態(tài)、染色性及生化實驗鑒定特征,需氧菌和真菌的鑒定參考《臨床微生物學(xué)和微生物檢驗》,厭氧菌鑒定參考白杰氏細菌鑒定手冊。2.6xs檢驗采用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件。各數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示,組內(nèi)比較采用配對T檢驗,組間比較采用成組T檢驗,并給出相應(yīng)P值,以P<0.05作為有顯著性標(biāo)準(zhǔn)。3結(jié)果3.1“虛”以濕阻、脾腎兩虛、胃熱濕阻以及陰虛內(nèi)熱型本次收集的36例單純性肥胖癥患者,其主要證型有脾虛濕阻、脾腎兩虛、胃熱濕阻及陰虛內(nèi)熱型。經(jīng)過3個療程的治療,臨床痊愈1例,顯效13例,有效12例,無效10例,有效率72.22%。3.2針刺治療前后,雙歧桿菌和乳酸桿菌檢測結(jié)果比較見表1～3。表1顯示,針刺治療前與健康組比較肥胖患者腸道菌群:需氧菌總數(shù)、厭氧菌總數(shù)、大腸桿菌、類桿菌,均減少(P<0.01)。腸球菌增加(P<0.01);雙歧桿菌與乳酸桿菌的檢測結(jié)果顯示兩組間沒有顯著性差異(P>0.01)。如表2所示,針刺治療前后,肥胖患者腸道菌群:需氧菌總數(shù)、腸球菌、厭氧菌總數(shù),均顯著減少(P<0.01);類桿菌明顯增加(P<0.01)。值得注意的是,雙歧桿菌、乳酸桿菌未見趨勢線變化。表3顯示針刺治療后,肥胖患者腸道菌群與健康組比較顯示:需氧菌總數(shù)、厭氧菌總數(shù)、大腸桿菌均減少(P<0.01)。4國外情況分析單純性肥胖是熱量攝入超過消耗而導(dǎo)致脂肪組織過剩,肥胖癥不僅影響了形體美,而且與許多致命性疾病相關(guān),因此對于肥胖癥的治療已經(jīng)成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的研究課題。中醫(yī)認(rèn)為,肥胖病多為本虛標(biāo)實之候,本虛多為氣虛,標(biāo)實為痰濕內(nèi)停,本病與脾關(guān)系最為密切,但病久則累及于腎。針灸減肥的機制,主要是通過針刺腧穴,疏通經(jīng)絡(luò),加強脾腎的功能,扶正祛邪,從而達到減肥的目的。針灸減肥的機理研究發(fā)現(xiàn)針灸可能通過對中樞“食欲調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)”的多方位調(diào)節(jié)、對機體消化吸收與代謝功能的調(diào)節(jié)、以及對機體消化吸收功能的調(diào)節(jié)而達到減肥的作用。在針灸減肥臨床上還沒有統(tǒng)一的辨證分型,有的報道沒有分型,有的分3個型,有的分10多個型,有的證下還有型。但多以1997年召開的第五屆肥胖病研究學(xué)術(shù)會議上通過的5型分型法,即脾虛濕阻型、胃熱濕阻型、肝郁氣滯型、脾腎兩虛型及陰虛內(nèi)熱型。而在本次收集的病例中發(fā)現(xiàn)肥胖患者的證型有:脾虛濕阻型、脾腎兩虛型、胃熱濕阻型及陰虛內(nèi)熱型,與報道一致。其中,脾虛濕阻型的單純性肥胖癥的患者最多,達到18例,這可能與肥胖癥發(fā)生的病機有關(guān)。李晶等認(rèn)為脾虛痰濕是肥胖病發(fā)生的實質(zhì),脾運失健,所納入之谷不能轉(zhuǎn)化成營養(yǎng)物質(zhì)運送到周身,反釀成痰濕,痰濕日積月累則成肥胖。但因為每個證型的人數(shù)較少,故本次實驗沒有以證型分組。近年來,腸道菌群與肥胖的關(guān)系是西醫(yī)研究的熱點。人類消化道有約1×1014個活細菌,其種類有100種以上。人類的消化道就如同自然界一樣也屬于一個生態(tài)系統(tǒng),在胃腸道不同的部位,棲息著不同種類、數(shù)量的細菌,它們相互間的比例有著很大的差別,而且容易受到各種因素的影響而發(fā)生變化。研究顯示肥胖會影響腸道微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)。戈登等發(fā)現(xiàn)腸道無菌鼠食量比普通鼠多29%,但脂肪卻少40%;將正常鼠和肥胖鼠的腸道菌群移植入無菌鼠后,盡管其食量有明顯下降,植入肥胖鼠腸道菌群者體重增加47%,植入正常鼠腸道菌群者也增加27%。本實驗首次基于對單純性肥胖患者和健康人大便中腸道菌群在數(shù)量上的差異,探討針灸減肥過程中腸道菌群的變化規(guī)律。通過對這14例病例的大便標(biāo)本進行細菌培養(yǎng)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)單純性肥胖患者和健康人比較,其腸球菌明顯高于健康組,而類桿菌低于健康組;在治療三個療程后腸球菌明顯減少,類桿菌明顯增多,且治療后腸球菌及類桿菌的數(shù)量與健康組無明顯差異。但這與劉祥等報道的乳酸桿菌對脂肪積累和肥胖起抑制作用有一定差異。這可能與活菌培養(yǎng)法檢測腸道菌群的工作量大,標(biāo)本放置時間較長,導(dǎo)致其他菌群不能完全保存,而腸球菌具有正常人腸道內(nèi)定植,環(huán)境表面存活時間較長,抵抗力及耐藥性較強的特點有關(guān)。袁杰利等發(fā)現(xiàn)屎腸球菌對高血脂大鼠的血脂具有調(diào)節(jié)作用,而本次實驗發(fā)現(xiàn)腸球菌對肥胖有促進作用,對其原因筆者將做進一步的研究。但是此次實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)肥胖患者與健康人的腸道菌群確實存在差異,與相關(guān)報道的研究結(jié)果一致,但是對于腸球菌和類桿菌等指標(biāo),目前還缺少相關(guān)報道。實驗結(jié)果提示針灸減肥過程