hplc測定玉龍美腮顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量

hplc測定玉龍美腮顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量

七寶美贊是在明代邵英節(jié)傳的七寶美贊基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，經(jīng)過最新的現(xiàn)代科學(xué)工藝，開發(fā)出具有調(diào)理肝腎功能的藥物。七寶美髯顆粒由滋補肝腎類藥組成,有制何首烏、當(dāng)歸、補骨脂、枸杞子、菟絲子、茯苓等中藥,經(jīng)提取加工制成,用于肝腎不足、須發(fā)早白、頭眩耳鳴、腰酸背痛等癥。其中,補骨脂與枸杞子、菟絲子、懷牛膝,同為臣藥,能雙補腎之陰陽,補骨脂素、異補骨脂素為補骨脂的主要活性成分。目前雖有七寶美髯顆粒的質(zhì)量研究,但尚未對該藥中的補骨脂活性成分進行測定,為了進一步完善七寶美髯顆粒的標(biāo)準(zhǔn),更好地控制該制劑的質(zhì)量,本文采用液相色譜法對制劑中的補骨脂素與異補骨酯素。1藥品與藥品層面高效液相色譜儀(Shimadzu20A);電子天平(MetlerAB265-S);紫外分光光度計(島津UV-2450);補骨脂素(批號:110739-200309)、異補骨脂素(批號:110738-200410)對照品購自中國食品藥品檢定研究院;七寶美髯顆粒(批號:120305,120612,120820);制何首烏、當(dāng)歸、補骨脂、枸杞子、菟絲子、茯苓、牛膝均購自廣州市同健醫(yī)藥連鎖有限公司;甲醇(色譜純,OCEANPAK);水為純化水。2方法和結(jié)果2.1流動相、檢測波長色譜柱:DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:甲醇-水(55∶45);流速:1.0mL/min;檢測波長:246nm;柱溫:室溫;進樣量:10μL。2.2溶液的制備2.2.1成分配液的制備精密稱取補骨脂素對照品、異補骨脂素對照品分別為10.6mg和11.3mg,置100mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成濃度分別為106μg/mL和113μg/mL的儲備液。精密吸取儲備液5mL置25mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,得到濃度分別為21.2μg/mL和22.6μg/mL的補骨脂素對照品、異補骨脂素對照品溶液。2.2.2樣品溶液的制備精密量取本品2.0g置10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。2.2.3陰性對照溶液取處方中除補骨脂外的其余中藥,參考2010年版中國藥典,按七寶美髯顆粒的工藝制備不含補骨脂的陰性對照制劑,按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。2.3對照品溶液的確定分別以補骨脂素對照品溶液、異補骨脂素對照品溶液在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果補骨脂素對照品在波長為246nm處有最大吸收,異補骨脂素對照品溶液在247nm處有最大吸收。故以247nm作為補骨脂素、異補骨脂素的檢測波長。2.4柱溫的選擇和柱壓的確定固定色譜柱和梯度條件,設(shè)定不同柱溫考察其對所得色譜圖的影響,結(jié)果見表1。雖然較低的柱溫有利于補骨脂素和異補骨脂素兩峰的分離,但是本地區(qū)在多數(shù)天氣情況下20℃的柱溫,需要配備可降溫的柱溫箱,柱壓較高也不利于儀器的維護,因此選擇30℃為柱溫,分離可滿足定量分離需要,柱壓適中。在夏天,實驗室超過30℃時,如果柱溫箱不能降溫,建議保持空調(diào)降溫。2.5色譜圖的保留時間精密量取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液注入液相色譜儀中,按照色譜條件分別進樣,進樣量為10μL,記錄色譜圖,在與對照品色譜圖主峰相同的保留時間上,供試品溶液有對應(yīng)峰顯示,陰性對照溶液無對應(yīng)峰。結(jié)果表明,陰性溶液對檢測結(jié)果無干擾,結(jié)果見圖1。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取補骨脂素、異補骨脂素對照品儲備液適量,用甲醇分別稀釋成濃度為10.6、15.9、21.2、31.8、42.4μg/mL和11.3、16.9、22.6、33.9、45.2μg/mL,注入液相色譜儀中,按前述色譜條件測定,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程分別為:補骨脂素:Y1=2900.9X1+3.5×10-11(r1=0.9999),異補骨脂素:Y1=77.356X1+3.3014(r2=1.0000)。結(jié)果表明補骨脂素濃度在10.6～42.4μg/mL時與峰面積呈良好線性關(guān)系,異補骨脂素濃度在11.3～45.2μg/mL時與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.7進樣和色譜條件取同一對照品溶液進行試驗,每次進樣10μL,按“2.2.1”項下的色譜條件重復(fù)進樣6次,記錄主峰面積。補骨脂素、異補骨脂素的RSD分別為1.24%和0.98%。結(jié)果表明儀器精密度良好。2.8補骨脂素、異補骨脂素的rsd測定精密吸取同批的供試品溶液10μL,分別于0、1、2、4、6、12、24h時進樣,測定主峰面積,補骨脂素、異補骨脂素的RSD分別為1.55%和1.18%。結(jié)果表明溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.9補骨脂素含量測定按照擬定的含量測定方法,對同一批樣品(批號:120612)制備供試品溶液,平行操作6份,結(jié)果測得補骨脂素平均含量為0.24mg/g,RSD為1.86%;異補骨脂素平均含量為0.26mg/g,RSD為2.13%,表明本測定方法具有較好的重復(fù)性。2.10加樣回收率和精密度精密吸取已知含量的同一批樣品(批號:120612)1.0g,置10mL量瓶中,共9份,分別精密加入一定量的補骨脂素對照品和異補骨脂素對照品,按供試品溶液制備方法制備并測定,補骨脂素和異補骨脂素的平均回收率(n=9)分別為99.61%和98.94%,RSD分別為0.81%和1.03%。結(jié)果表明本方法具有良好的回收率。2.11樣品含量測定分別取七寶美髯顆粒3批,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按照色譜條件進樣測定,記錄色譜圖,計算樣品含量,結(jié)果見表2。3對苯乙烯hplc含量測定的意義目前七寶美髯顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅限于對制何首烏進行鑒別研究,對2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯進