宮頸病變組織中hpv分型檢測的意義

宮頸病變組織中hpv分型檢測的意義

在許多發(fā)展中國家，宮頸是女性生殖系統(tǒng)中最常見的腫瘤，占女性腫瘤的第二個百分點。它是由宮頸癌前病變,即宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)逐步發(fā)展形成的,其發(fā)生發(fā)展過程經(jīng)歷了CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、早期浸潤癌和浸潤癌的階段。近20年研究表明,人乳頭瘤病毒是導致宮頸癌發(fā)生的主要原因。了解HPV在宮頸炎、宮頸癌前病變、宮頸癌中的分布情況也是尤為重要,對于指導臨床工作,預防和治療HPV感染的人群,以及對宮頸病變患者治療后的隨訪及預后進行評價等具有重要意義。本研究旨在通過應用基因芯片導流雜交技術(shù)對437例宮頸病變組織進行HPV分型檢測,通過檢測結(jié)果分析其意義。1數(shù)據(jù)和方法1.1pv基因型分型檢測將2008年1月～2009年1月在新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院病房及門診就診的437例女性的宮頸脫落細胞標本進行HPV基因型分型檢測,其中慢性宮頸炎174例,宮頸癌前病變170例(CINⅠ60例,CINⅡ28例,CINⅢ82例)宮頸癌93例。1.2陰道栓劑采樣取所有患者的宮頸脫落細胞,對437例研究對象在非月經(jīng)期采樣,采樣前3d內(nèi)不用陰道栓劑,前1d起禁止性生活。標本4℃冰箱保存,兩周內(nèi)檢測;宮頸病變程度的判定標準采用文獻。1.3hp基因分類檢測過程(1)DNA提取;(2)PCR擴增;(3)雜交過程;(4)顯色結(jié)果判斷肉眼觀察結(jié)果,檢測結(jié)果陽性點為清晰可見的藍紫色圓點。1.4統(tǒng)計處理采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,不同宮頸病變HPV陽性率的比較均采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。2結(jié)果2.1認識不同活檢時間pv陽性率437例標本中,共檢出HPV感染180例,HPV總陽性率為41.19%。由表1可見,HPV陽性率隨著宮頸病變的逐漸加重呈趨勢性增高。慢性宮頸炎(15.51%)、宮頸癌前病變(CINⅠ+Ⅱ+Ⅲ)(54.71%)和宮頸癌(64.52%)3組的HPV感染率差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=81.052,P<0.05)。2.2pv亞型感染率與妊娠合并心臟病的關(guān)系研究檢測到了所有HPV-DNA中的15種基因亞型。本組HPV亞型感染率最高的HPV-16與宮頸病變嚴重程度有明顯關(guān)系,其在宮頸癌的感染率明顯高于其他組,差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=107.908,P<0.05),見表2。2.3多重感染的比例各病變組在HPV單一感染和多重感染的比例及分布比上差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=16.224,P<0.05)。本組資料中多重感染的比例為11.11%,主要是二重感染,最常見的為HPV16合并的感染,占二重感染總數(shù)的1/2多,其次為含HPV58的感染。最常見類型為HPV16、58及HPV16、18二重感染,見表3。3認識到患者中多亞型感染率,是造成pv感染的重要因素之一,是強調(diào)三、三是兩隨著分子流行病學的發(fā)展,HPV與宮頸癌變的關(guān)系越來越明確。對子宮頸癌發(fā)病的生物學危險因素主要集中在HPV感染上,99.8%的宮頸癌患者中可以發(fā)現(xiàn)HPV感染。本研究應用的HybrMax基因芯片導流雜交技術(shù),可同時檢測21種型別HPVDNA(高危13型,低危5型及3型中國常見類型),既可用于石蠟組織標本,也可用于液基標本。其主要原理采用基因信號放大技術(shù)、導流雜交法并結(jié)合基因芯片技術(shù)。與先前所用方法比較,基因芯片導流雜交法可對HPVDNA進行分型診斷,還可判斷多重感染,對HPV亞型相關(guān)問題的深入研究及對宮頸病變處理方案的指導具有明顯優(yōu)勢。本研究結(jié)果顯示,437例宮頸病變中180例為陽性感染,HPV感染率為41.19%,與文獻的報道一致。本研究通過基因芯片導流雜交法檢測慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌患者的HPV感染率,結(jié)果顯示陽性率分別為15.52%、31.67%、50.00%、73.17%、64.52%,各組間比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。從CINⅠ到CINⅢ是一隨時間而發(fā)展的過程,本研究發(fā)現(xiàn)從宮頸炎到CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌,隨著宮頸病變的加重,HPV陽性率逐漸增高,說明宮頸癌前病變與HPV感染有關(guān)。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個緩慢、漸進的過程。它的發(fā)生、發(fā)展是由量變到質(zhì)變、漸變到突變,通常是由子宮頸不典型增生(輕→中→重)→原位癌→早期浸潤癌→浸潤癌的連續(xù)發(fā)展過程。由于存在著復合感染,本組180例HPV感染的宮頸病變標本中檢出亞型次數(shù)為205例次,檢出15種HPV亞型,其中包括3種低危型(HPV6、11、42),9種高危型(HPV16、18、31、33、39、45、52、56、58)和中國人特有亞型(66、53、CP8304)。隨著病變程度的增加HPV亞型分布有所變化,在CIN病變組中高危型HPV檢出率有所增加,而低危型HPV檢出率逐漸下降,93例浸潤癌共檢出5種高危亞型HPV,它們分別是HPV16、HPV31、HPV33、HPV39和HPV52。其中檢出2種低危型分別是HPV6、HPV11型。本研究在檢出的15種HPV亞型中,HPV16亞型與病變程度明顯相關(guān),其檢出率隨著宮頸病變級別的增加而逐漸上升。所檢出的高危型中以HPV16型最多見。本研究中結(jié)果顯示,HPV感染以單一感染為主,180例陽性感染者中,160例為單一感染,單一型感染率為88.89%(160/180),與國內(nèi)王維鵬報道的HPV單一型感染率一致。多重感染是指合并兩種或兩種以上不同的HPV亞型感染。本組資料結(jié)果表明,多重感染率為11.11%(20/180)。人群中多亞型感染率可達4%～40%,多重感染以兩種HPV亞型多見,其中至少有一種為高危型HPV。HPV的多重感染是否增加或促進宮頸病變的發(fā)生一直是研究者們關(guān)注的問題。Munoz等2003年總結(jié)了對1985～1997年9個國家的11項進行病例對照研究后認為,HPV多重感染與單純感染在發(fā)生宮頸癌的風險方面沒有顯著差異。Kay等對南非宮頸癌和CINⅡ～Ⅲ患者進行的研究發(fā)現(xiàn),CINⅡ～Ⅲ中HPV雙重感染為12.4%,宮頸癌中為16%。該學者認為多重感染與宮頸癌的級別無關(guān),多重感染并不增加宮頸癌的發(fā)生率。國內(nèi)烏蘭娜等2005年對356例宮頸HPV感染的患者,應用HC-Ⅱ技術(shù)檢測13種高危型HPV及核酸分子快速雜交基因分型技術(shù)進行21種HPV-DNA亞型分析,結(jié)果表明多種高危型HPV混合感染者所致宮頸病變更趨嚴重。本資料結(jié)果顯示,多重感染主要是二重感染,最常見的為HPV16合并的感染占二重感染總數(shù)的1/2以上,其次為HPV58和HPV33的感染