月季花藥培養(yǎng)(公開課)

課題2月季的花藥培養(yǎng)

花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

月季的花藥培養(yǎng)課前預(yù)習(xí)：1被子植物的花粉的發(fā)育過程？2產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑是什么？3影響花藥培養(yǎng)的主要因素有哪些？4實(shí)驗(yàn)操作的基本過程？知識(shí)回顧單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體翻倍純合子正常植株（2N）特點(diǎn)：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）花的結(jié)構(gòu)花托花萼花瓣雄蕊花藥花絲雌蕊柱頭花柱子房花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)2花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.被子植物花粉的發(fā)育過程小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂4個(gè)小孢子(小孢子四分體時(shí)期)小孢子細(xì)胞核生殖細(xì)胞核+花粉管細(xì)胞核有絲分裂（花粉粒的雙核期）小孢子(單核居中期)小孢子(單核靠邊期)核移動(dòng)生殖細(xì)胞核形成兩個(gè)精子有絲分裂4個(gè)小孢子減數(shù)分裂1花粉母細(xì)胞③例題1：兩個(gè)精子和花粉管細(xì)胞核的基因型相同？AaBbABAB有絲分裂1個(gè)花粉管細(xì)胞核1個(gè)生殖細(xì)胞核有絲分裂2個(gè)精子一個(gè)小孢子ABABABABababAbAbaBaB或1、關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是（）A、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結(jié)果C、被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)歷四分體時(shí)期、單核期、雙核期等階段D、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細(xì)胞一側(cè)，再移到細(xì)胞中央BD（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化

叢芽再分化

叢芽誘導(dǎo)生根

胚狀體：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似

原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比不同。部分花藥通過胚狀體途徑形成小植株煙草花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑脫分化分化愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥脫分化再分化

不同植物的誘導(dǎo)成功率不同.

同一植物的不同生理狀況也對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接的影響.（一般選月季的初花期）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等也能影響花藥的培養(yǎng)。(三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素1、材料的選擇2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的植物生長調(diào)節(jié)激素）注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期:單核期①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動(dòng)，給材料消毒帶來困難

實(shí)驗(yàn)操作一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)（一）材料選取2、通過鏡檢來確定花粉是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥發(fā)育程度看：月季的初花期從花粉發(fā)育程度看：單核期

從花蕾看：完全未開放的

花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）

花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）

月季花藥培養(yǎng)時(shí)的花粉粒最好是（）

A、四分體時(shí)期B、花粉粒的雙核期

C、單核期C（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？

答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？討論：（三）接種和培養(yǎng)

1滅菌后花蕾，要在

下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。3通常每瓶接種花藥

，溫度控制在

左右，

。幼小植株形成后才

。2在剝離花藥時(shí)，要盡量

（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹底

，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。

一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。

4進(jìn)一步鑒定和篩選：常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化？無菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個(gè)25℃不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的練習(xí)：小麥高桿（D）對(duì)矮桿（d）為顯性，抗銹病（T）對(duì)不抗銹?。╰）為顯性，現(xiàn)有高桿抗銹病和矮桿不抗病的兩種純合體，要獲得矮桿抗銹病的良種，可用雜交育種和單倍體育種法，步驟如下：

高桿抗銹病（DDTT）×矮稈不抗銹?。╠dtt）

F1：的基因型和表現(xiàn)型

a

各種配子的種類

a

↓符合要求的單倍體的基因型

良種的基因型表現(xiàn)型

單倍體育種方法的主要優(yōu)點(diǎn)是

。1可以明顯縮短育種年限2后代為純合子↓P：DdTt，高稈抗銹病DT，Dt,dT,dtddTT矮稈抗銹病雜交育種花藥離體培養(yǎng)DT，Dt,dT,dt↓秋水仙素處理植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點(diǎn)1培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。2都經(jīng)過了脫分化的過程不同點(diǎn)1離體培養(yǎng)的外植體為體細(xì)胞