薏苡仁油對(duì)荷瘤動(dòng)物的抗腫瘤作用

薏苡仁油對(duì)荷瘤動(dòng)物的抗腫瘤作用

1995年，該公司被批準(zhǔn)為兩類中藥和西藥。批準(zhǔn)的適應(yīng)證為原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌及原發(fā)性肝癌。最近我們已對(duì)薏苡仁油治療肺癌和肝癌的作用作了再評(píng)價(jià)。本文綜述其抗肝癌以外的其他消化系腫瘤作用,以擴(kuò)大薏苡仁油抗癌的臨床新適應(yīng)證。1抗癲癇系統(tǒng)腫瘤的基礎(chǔ)研究1.1gc-400細(xì)胞小鼠中癌重生長(zhǎng)、凋亡的檢測(cè)用噻唑藍(lán)還原法(MTT)測(cè)得薏苡仁油對(duì)人胃癌MKN28細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度(IC50)為2.14g/L。給皮下接種小鼠胃癌SGC-790細(xì)胞小鼠腹腔注射薏苡仁油1.25g/kg,qd×10d,瘤重生長(zhǎng)抑制率為47.2%,使胃癌增殖細(xì)胞核抗原陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降(38%)、凋亡指數(shù)由對(duì)照組的1.12%顯著上升到2.11%。薏苡仁油中的活性成分薏苡仁酯(coixenolide)濃度和時(shí)間依賴性抑制胃癌BGC-823細(xì)胞增殖,薏苡仁酯還通過(guò)下調(diào)CD44、CD133表達(dá),降低胃癌細(xì)胞黏附、侵襲及遷移能力。1.2薏養(yǎng)殖3對(duì)colo205細(xì)胞的作用靜脈注射薏苡仁油0.625、1.25g/kg,qd×7d,對(duì)移植于裸鼠的人結(jié)腸癌M7609細(xì)胞有明顯抑制作用,腫瘤生長(zhǎng)抑制率分別為35.7%、57.1%。用MTT法測(cè)得薏苡仁油對(duì)人結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞、WiDr細(xì)胞和Colo205細(xì)胞生長(zhǎng)的IC50分別為4.51、8.59和40.0g/L。末端脫氧酰轉(zhuǎn)移酶法(TUNEL法)檢測(cè)凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),薏苡仁油在低濃度(1g/L)時(shí)可誘導(dǎo)SW1116細(xì)胞發(fā)生凋亡,但隨著濃度增高,凋亡百分比下降而細(xì)胞壞死發(fā)生率增加。盡管Colo205細(xì)胞對(duì)薏苡仁油敏感性低,但經(jīng)低于IC50濃度薏苡仁油預(yù)處理過(guò)的Colo205細(xì)胞對(duì)融合蛋白介導(dǎo)的超抗原依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用更為敏感。由于薏苡仁油并不影響Colo205細(xì)胞表面分子ICAM-1的表達(dá),提示其不干擾免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的識(shí)別黏附過(guò)程。由于薏苡仁油提高Colo205細(xì)胞內(nèi)FasmRNA水平并上調(diào)Fas水平蛋白在細(xì)胞表面的表達(dá),又增強(qiáng)抗Fas抗體殺傷Colo205細(xì)胞的作用。提示薏苡仁油上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面具有功能性的Fas水平,產(chǎn)生生物治療增敏作用。臺(tái)灣學(xué)者從薏苡仁麩的乙酸乙酯可溶部位中分離到5種內(nèi)酰胺類活性成分(coixspirolactamA、B、C,coixlactam,methyldioxindole-3-acetate),它們抗人結(jié)腸癌HT-29和Colo205細(xì)胞增殖的IC50值在28.6~72.6mg/L之間。臺(tái)灣學(xué)者報(bào)告大鼠喂飼含10%、20%和40%的薏苡仁飼料可顯著減少致癌劑氧化偶氮甲烷誘發(fā)結(jié)腸異常隱窩病灶數(shù)(減少26%~32%,無(wú)量效關(guān)系),雖也抑制結(jié)腸腫瘤的誘導(dǎo)型環(huán)氧化酶表達(dá),但不明顯減少氧化偶氮甲烷致結(jié)腸腫瘤發(fā)生,提示薏苡仁抑制化學(xué)性致癌劑的早期結(jié)腸癌發(fā)生,但不抑制腫瘤形成。薏苡仁麩的乙酸乙酯可溶部位抑制1,2-二甲基肼誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸癌發(fā)生作用最好,防止腫瘤發(fā)生前黏蛋白耗竭灶形成,下調(diào)RAS和Ets2癌基因,上調(diào)與細(xì)胞周期有關(guān)的Wee1a基因,抑制結(jié)腸環(huán)氧化酶-2(COX-2)蛋白表達(dá),通過(guò)抑制慢性炎癥,延遲癌發(fā)生。1.3薏養(yǎng)殖3細(xì)胞凋亡,活性成分變化;上海瑞金醫(yī)院消化科采用一系列體外實(shí)驗(yàn)手段探討了薏苡仁油誘導(dǎo)人胰腺癌PaTu-8988細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。他們用MTT法證明薏苡仁油濃度依賴性(0.1~2g/L)和時(shí)間依賴性地抑制PaTu-8988細(xì)胞增殖。在薏苡仁油作用下,胰腺癌細(xì)胞呈凋亡特征改變:光鏡觀察顯示凋亡細(xì)胞變圓、體積縮小、Hoechst33285熒光強(qiáng)染、TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性、DNA凝膠電泳呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡的特征性梯狀DNA條帶。2g/L薏苡仁油作用24、48和72h后,流式細(xì)胞儀DNA直方圖上出現(xiàn)亞二倍體凋亡峰,細(xì)胞凋亡率呈時(shí)間依賴性提高,分別為(7.1±0.6)%、(11.3±0.3)%和(15.1±2.9)%,均顯著高于對(duì)照組的(2.4±1.1)%。透射電鏡觀察顯示,凋亡早期主要是線粒體嵴斷裂等結(jié)構(gòu)改變,后期則出現(xiàn)典型的凋亡征象,如核固縮、染色質(zhì)凝集靠近核膜和凋亡小體形成。他們又用凋亡基因芯片試劑盒、RT-PCR和蛋白印跡檢測(cè)技術(shù)作了進(jìn)一步深入研究,發(fā)現(xiàn)薏苡仁油2g/L濃度作用于PaTu-8988細(xì)胞24h后,在96條有關(guān)凋亡的目的基因中,共有17條基因表達(dá)發(fā)生大于3倍的顯著變化,其中表達(dá)上調(diào)基因12條,下調(diào)基因5條,這些轉(zhuǎn)錄差異基因主要為Bcl-2家族、p53家族、半胱氨酸蛋白酶家族和腫瘤壞死因子受體超家族基因。蛋白印跡檢測(cè)表明在薏苡仁油作用下,PaTu-8988細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)最先明顯減少,而B(niǎo)as蛋白表達(dá)明顯增多,p53和磷酸化p53蛋白及具有酶活性的半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表達(dá)都隨著藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加,這些基因蛋白水平的表達(dá)與基因芯片檢測(cè)結(jié)果基本一致,使促凋亡基因表達(dá)增加,抑凋亡基因表達(dá)減少。王偉等給荷人胰腺癌PC-3細(xì)胞裸鼠靜脈注射薏苡仁油2.5g/kg,qd×14d,共4個(gè)療程。不僅顯著減小PC-3移植瘤體積,與5-氟尿嘧啶聯(lián)用還可對(duì)縮小腫瘤體積產(chǎn)生協(xié)同作用。流式細(xì)胞儀測(cè)得薏苡仁油組裸鼠體內(nèi)的胰腺癌細(xì)胞凋亡率為(12.9±2.0)%,明顯高于對(duì)照組的(3.4±0.6)%,與5-氟尿嘧啶聯(lián)用,凋亡率進(jìn)一步提高,且明顯高于二藥的單用組。免疫組化染色觀察到薏苡仁油組明顯抑制PC-3細(xì)胞的Bcl-2蛋白和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的陽(yáng)性表達(dá)率,不影響B(tài)as蛋白陽(yáng)性表達(dá)率。薏苡仁油與5-氟尿嘧啶聯(lián)用僅對(duì)Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)抑制產(chǎn)生協(xié)同作用。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),薏苡仁油濃度依賴性抑制人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞增殖,2g/L濃度組作用最佳,有效作用最佳時(shí)間段在36h左右,并顯著上調(diào)白細(xì)胞介素-18(IL-18)表達(dá)。腹腔注射薏苡仁油0.625~2.5g/kg,在劑量依賴性地抑制S180肉瘤增殖的同時(shí),也劑量依賴性地減少肉瘤內(nèi)微血管數(shù)及瘤體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)。體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1g/L濃度薏苡仁油也抑制正常大鼠離體主動(dòng)脈中新生微血管數(shù)量增加。推測(cè)抑制腫瘤內(nèi)血管形成可能也是薏苡仁油抗消化系腫瘤的作用機(jī)制之一。1.4薏養(yǎng)殖細(xì)胞的作用除上述直接針對(duì)消化系腫瘤的作用機(jī)制外,薏苡仁油也通過(guò)提高機(jī)體免疫功能扼殺腫瘤細(xì)胞。薏苡仁油在體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用,對(duì)小鼠自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)有激活作用。給小鼠連續(xù)7d腹腔注射薏苡仁油0.625、1.25g/kg,都可明顯提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的功能。給荷瘤(小鼠白血病L1210細(xì)胞)小鼠靜脈注射7d薏苡仁油0.625、1.25、2.5g/kg,都能劑量依賴性地促進(jìn)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、NK細(xì)胞活性和刀豆球蛋白A誘導(dǎo)脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2。無(wú)論有無(wú)脂多糖誘導(dǎo),薏苡仁油都可濃度依賴性地促進(jìn)體外小鼠巨噬細(xì)胞合成和分泌IL-1。給小鼠靜脈注射或灌胃7d薏苡仁油2.5g/kg也都能促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞合成和分泌IL-1,對(duì)抗腹腔注射環(huán)磷酰胺抑制巨噬細(xì)胞合成和分泌白介素-1的作用,對(duì)三尖杉酯堿和環(huán)磷酰胺引起的白細(xì)胞減少都有升高作用。灌胃薏苡仁油2.5、5、10mL/kg,7或10d,劑量依賴性地促進(jìn)荷瘤(肺癌Lewis細(xì)胞)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、NK細(xì)胞活性和刀豆球蛋白A誘導(dǎo)脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2,升高被環(huán)磷酰胺減少的荷瘤(肉瘤S180細(xì)胞)小鼠白細(xì)胞數(shù)。當(dāng)荷瘤(小鼠肺腺癌LA795細(xì)胞)小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)時(shí)腹腔注射薏苡仁油5g/kg×7d,能明顯阻止癌癥惡病質(zhì)小鼠體重下降、增加攝食量、延長(zhǎng)生存期、延緩腫瘤生長(zhǎng)、下降被進(jìn)一步升高的血清腫瘤壞死因子和IL-1水平,但升高IL-6水平,明顯升高被進(jìn)一步抑制的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和NK細(xì)胞的活性.從癌癥病人惡性胸水中分離出自體瘤細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞(即腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞)并傳代培養(yǎng)。腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)液內(nèi)7d左右相繼死亡,而薏苡仁油(最適濃度為24g/L)可使腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞體外長(zhǎng)期存活(>17d),在10d內(nèi)使此T淋巴細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)增,并在11~15d保持較高水平,擴(kuò)增后的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞對(duì)體外病人自體瘤細(xì)胞和人紅白血病K562細(xì)胞的殺傷活性顯著高于新鮮采集的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞。給每只腹腔內(nèi)荷小鼠肝癌腹水型Hepa細(xì)胞小鼠,隔天腹腔注射106個(gè)用薏苡仁油擴(kuò)增后的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(共3次),此組荷瘤小鼠生長(zhǎng)期明顯延長(zhǎng),生命延長(zhǎng)率為17.3%。作用類似于重組IL-2,具有生物反應(yīng)調(diào)節(jié)功能。說(shuō)明薏苡仁油提高機(jī)體免疫功能也是其抗腫瘤的機(jī)制之一。2同時(shí)給藥治療腫瘤2.1臨床表現(xiàn)及臨床效果評(píng)價(jià)12例Ⅲ~Ⅳ期晚期胰腺癌,均已失去手術(shù)根治機(jī)會(huì),靜脈注射薏苡仁油10g(即10%康萊特注射液100mL),qd×20d,間隔10d重復(fù),并聯(lián)用生長(zhǎng)抑素奧曲肽0.1mg,ih,bid,用至腫瘤有進(jìn)展證據(jù)時(shí)停藥。癌灶緩解率僅1例(8%),中位數(shù)生長(zhǎng)期為6個(gè)月,有1例已存活2年。用藥2個(gè)月、4個(gè)月的臨床受益評(píng)價(jià):疼痛緩解率為58.3%(7/12),卡氏行為狀況評(píng)分提高20分者占41.7%(5/12),體重增加者占33.3%(4/12),75%(9/12)病人全身狀況得以改善。治療后病人的T淋巴細(xì)胞亞群CD4和CD4/CD8值明顯提高。薏苡仁油聯(lián)合低劑量順鉑和5-氟尿嘧啶治療12例晚期胰腺癌也獲得類似結(jié)果:癌灶緩解率16.7%(2/12),7例疼痛減輕、行為狀況評(píng)分提高和體重增加,臨床受益率為58.3%,治療后NK細(xì)胞活性、CD3、CD4和CD4/CD8值均較治療前明顯提高。單獨(dú)應(yīng)用薏苡仁油的晚期胰腺癌病人的疼痛緩解率僅為33.3%(5/15)。2.2薏養(yǎng)殖3周卡氏張壓t臨床療效試驗(yàn)31例Ⅲ~Ⅳ期晚期食管癌對(duì)照組行放化療方案治療:化療用亞葉酸鈣+5-氟尿嘧啶+順鉑,化療開(kāi)始后5~7d開(kāi)始放療。33例Ⅲ~Ⅳ期晚期食管癌治療組:在對(duì)照組放化療基礎(chǔ)上加用薏苡仁油10g,ivgtt,qd×21d,共3個(gè)療程。加用薏苡仁油組癌灶緩解率為51.5%(17/33),高于對(duì)照組的41.9%(13/31),但無(wú)顯著性差異,而卡氏生存質(zhì)量提高和疼痛緩解例數(shù)百分率都明顯高于放化療對(duì)照組。薏苡仁油可顯著對(duì)抗放化療引起的病人外周血白細(xì)胞數(shù)和肝功能下降的毒副作用。蘭立群等也報(bào)道了類似結(jié)果。單獨(dú)應(yīng)用薏苡仁油的晚期食管癌病人的疼痛緩解率為84.6%(22/26)。2.3不同化療方案的免疫功能檢測(cè)22例胃癌(Ⅱ~Ⅲ期占77.3%)術(shù)前選擇性動(dòng)脈灌注FMD化療方案及薏苡仁油20g后,75%以上病人的臨床癥狀得到緩解,部分病人出現(xiàn)惡心嘔吐、食欲減退,多在5d內(nèi)恢復(fù),但T淋巴細(xì)胞亞群值仍明顯降低,80%病人出現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)暫時(shí)降低,1周內(nèi)恢復(fù)正常。動(dòng)脈灌注后7~10d內(nèi)手術(shù),對(duì)手術(shù)、手術(shù)后恢復(fù)、切口愈合等均無(wú)直接影響。如在動(dòng)脈灌注后每日靜脈滴注薏苡仁油10g×7d,則能糾正化療引起的免疫功能低下。姜祖光等報(bào)告薏苡仁油加化療(FAM方案)治療胃癌的總有效率為87%,明顯高于單純化療對(duì)照組的69%。單獨(dú)應(yīng)用薏苡仁油的晚期胃癌病人的疼痛緩解率為89.6%(43/48)。37例中、晚期胃癌或結(jié)直腸癌接受化療作為對(duì)照組(其中行根治性手術(shù)26例,不能手術(shù)或復(fù)發(fā)11例)。43例中、晚期胃癌或結(jié)直腸癌(其中行根治性手術(shù)29例,不能手術(shù)或復(fù)發(fā)14例)除接受化療外還靜脈滴注薏苡仁油20g,qd×21d。加用薏苡仁油組的癌灶緩解率為35.7%(5/14),高于單純化療對(duì)照組的27.3%(3/11),但兩組間無(wú)顯著性差異。而卡氏評(píng)分提高的例數(shù)和疼痛緩解例數(shù)百分率分別為88.4%(38/43)和83.7%(36/43),均明顯高于對(duì)照組的54.0%(20/37)和59.4%(22/37)。50例胃癌和結(jié)直腸癌病人手術(shù)前外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD4/CD8值都明顯低于正常人對(duì)照組,而血清可溶性白介素-2受體顯著高于正常人對(duì)照組。手術(shù)3周后病人(28例)的CD3、CD4、CD4/CD8水平顯著升高,而可溶性白介素-2受體水平顯著下降。22例手術(shù)后1d開(kāi)始靜脈滴注薏苡仁油10g,qd×20d的病人CD3、CD4、CD4/CD8水平又明顯高于單純手術(shù)組,可溶性白介素-2受體水平又明顯低于單純手術(shù)對(duì)照組,使這些免疫指標(biāo)恢復(fù)接近正常人水平。在大腸癌手術(shù)后病人中再次觀察到薏苡仁油提高上述免疫功能作用。單獨(dú)應(yīng)用薏苡仁油的晚期大腸癌病人的疼痛緩解率為87.0%(20/23),使病人外周血NK細(xì)胞活性明顯提高并持續(xù)在高水平狀態(tài)。3薏養(yǎng)殖細(xì)胞活性體內(nèi)外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)薏苡仁油誘導(dǎo)消化系腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤細(xì)胞增殖;抑制腫瘤組織內(nèi)血管形成,減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。與化療藥相反,薏苡仁油可提高荷瘤動(dòng)物的免疫功能。在臨床上,薏苡仁油與化療藥聯(lián)合應(yīng)用治療食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌和肝癌,均可提高病人卡氏生命質(zhì)量評(píng)分和疼痛緩解率,提高病人低下的免疫功能,使外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD4/CD8水平及NK細(xì)胞活性顯著提高,具有良好的開(kāi)發(fā)前景。活化過(guò)氧化物酶體增殖因子激