護(hù)肝軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

護(hù)肝軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

中國是一個高發(fā)病率和高感染率的國家。肝炎是中國最常見的疾病，嚴(yán)重危害人民健康?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實護(hù)肝片對四氯化碳、D-半乳糖胺所致小鼠肝損傷而引起的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高具有明顯的降低作用;對氫化可的松所致的小鼠免疫功能低下有明顯的對抗作用,可使單核噬細(xì)胞、吞噬指數(shù)和吞噬活性明顯增強(qiáng)。綜上所述,護(hù)肝片具有明顯的保肝降酶、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用,療效確切,無毒副作用,是治療慢性乙型肝炎的理想藥物,值得進(jìn)一步推廣使用。而護(hù)肝軟膠囊是在護(hù)肝片的基礎(chǔ)上改劑型而來,由柴胡、茵陳、板藍(lán)根、五味子、豬膽粉、綠豆等組成,具有疏肝理氣、健脾消食,降低轉(zhuǎn)氨酶作用,用于慢性肝炎及早期肝硬化等疾病的治療。為控制制劑質(zhì)量,本研究建立了薄層色譜及高效液相色譜測定的方法。1材料和方法1.1儀器和試劑盒1.1.1聚酰胺薄膜、超聲波清洗器、水浴鍋紫外線分析儀(天津天分分析儀器廠SB-2A),硅膠GF254薄層板(10cm×20cm青島海洋化工廠),聚酰胺薄膜(浙江臺州市路橋四青生化廠)HP1100高效液相色譜儀(惠普公司),超聲波清洗器(昆山市超聲儀器廠KQ3200),水浴鍋(北京醫(yī)療儀器廠GB11240-89)1.1.2試劑:胡蘿卜干-蘇-木的制備五味子醇甲(中國藥品生物制品檢定所),綠原酸(中國藥品生物制品檢定所),豬膽粉對照藥材(中國藥品生物制品檢定所),柴胡對照藥材(中國藥品生物制品檢定所),顯色劑10%硫酸乙醇溶液,2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液為顯色劑。甲醇(色譜純),水為蒸餾,其他試劑均為分析純,護(hù)肝軟膠囊自制(20031105,20031106;20031107)。1.2實驗方法1.2.1薄標(biāo)記試驗1.2.1.陰性干浸膏的測定取內(nèi)容物4.5g,放于研缽中,加乙醇10ml,研磨5min,過濾,將濾液蒸干,加乙醇1ml溶解,作為供試品溶液。取陰性干浸膏粉末1g及對照藥材3g同法制備陰性對照溶液及對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗,吸取上述溶液各8μl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑,置紫外燈(254nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色斑點,陰性樣品在相應(yīng)位置無干擾。1.2.1.陰性溶液的制備參照文獻(xiàn)方法,取內(nèi)容物2g,加石油醚30ml(60～90℃)超聲30min,棄去石油醚液,殘渣加甲醇20ml超聲提取20min,過濾,濾液蒸干,加甲醇2ml溶解,作為供試品溶液。同法制得陰性溶液。另取綠原酸適量加甲醇配制成每毫升含1mg的綠原酸對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗,吸取上述溶液各1μl,分別點于同一聚酰胺薄膜上,以36%醋酸為展開劑,置紫外燈(365nm)下檢視,結(jié)果供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色斑點,陰性樣品在相應(yīng)位置無干擾。1.2.1.對照藥材溶液取內(nèi)容物3g,加乙醇15ml,在研缽中研磨3min,過濾,將濾液蒸干,殘渣加乙醇1ml溶解作為供試品溶液。同法取制得陰性溶液。取豬膽粉藥材2g制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗,吸取上述溶液各5μl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸-甲醇(20∶25∶3∶2)上層溶液為展開劑,以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑,結(jié)果供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色斑點,陰性樣品在相應(yīng)位置無干擾。1.2.1.對照藥材溶液的制備參照文獻(xiàn),取內(nèi)容物2g,加水30ml溶解,加乙醚振搖提取兩次,每次15ml,合并乙醚液,棄去乙醚液,水液加水飽和正丁醇振搖提取兩次,每次15ml,合并正丁醇液,加入氨試液40ml,分取正丁醇液,蒸干,殘渣加甲醇1ml溶解作為供試品溶液。同法制得陰性溶液。另取柴胡對照藥材1.5g,加水50ml水浴回流1h,放冷,濾過,后同法制備對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗,吸取上述溶液各10μl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開劑,2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液為顯色劑,60℃加熱至斑點顯色清晰,紫外燈(365nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色斑點,陰性樣品無干擾。1.2.2高效液試1.2.2.柱溫和檢測波長色譜柱:迪馬C18(4.6mm×250mm);流動相:甲醇-水(60:40)為;柱溫:室溫;檢測波長:250nm。五味子醇甲分別在215nm和250nm處有最大吸收,因為樣品在低波長215nm處有干擾,因此確定本品的檢測波長為250nm。1.2.2.溶劑的加標(biāo)試驗(1)對照品溶液的制備取五味子醇甲對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液,即得。(2)供試品溶液的制備取本品裝量差異項下的內(nèi)容物,混勻,取約0.7g,精密稱定,加醋酸乙酯25ml,加熱回流30min,放冷,濾過,用適量醋酸乙酯分次洗滌濾渣及容器,洗液與濾液合并,蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。1.2.2.3-測量方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定,即得。2結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取對照品適量,溶解并稀釋成濃度分別為0.0063、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2mg/ml的溶液,精密吸取10μl,注入液相色譜儀,以濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算回歸方程為Y=21920X-6.4148,r=0.9999。表明五味子醇甲在測定濃度范圍內(nèi)呈良好線性(圖1)。2.2積分值精密吸取同一供試品溶液10μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,積分值結(jié)果分別為819.7、816.0、817.2、818.8、813.6,均值為817.1,RSD為0.29%。2.3量計算重復(fù)結(jié)果精密稱取本品內(nèi)容物約0.70g共五份,按照含量測定方法提取制備測定含量計算重復(fù)結(jié)果,結(jié)果分別為,0.6162mg/g、0.6074mg/g、0.6126mg/g、0.6128mg/g、0.5914mg/g,均值為(0.6081±0.0984)mg/g,RSD為1.60%。2.4持續(xù)加樣回收率測定精密稱定已知含量的樣品(0.6162mg/g)約0.35g5份,精密加入五味子醇甲對照品,依法提取測定,計算回收率,結(jié)果見表1,回收率平均值為100.40%,RSD為1.4%。2.5%是測定結(jié)果本文采用試驗方法對5批樣品進(jìn)行了五味子醇甲的含量測定,測定結(jié)果分別為0.390mg/粒、0.370mg/粒、0.380mg/粒、0.390mg/粒、0.395mg/粒,平均含量為0.385mg/粒,RSD為2.3%。3藥料中藥物提取條件的優(yōu)化本文采用薄層色譜法對處方中主藥五味子、柴胡、茵陳、豬膽粉進(jìn)行鑒別,經(jīng)多次實驗驗證,方法簡便,專屬性強(qiáng),重現(xiàn)性好,為護(hù)肝軟膠囊提供專屬性強(qiáng)的鑒別方法,有效地控制了制劑的質(zhì)量。本研究參考中國藥典2000年版一部護(hù)肝片和五味子藥材的含量測定方法,我們選用高效液相色譜法作為本