病毒感染的檢查方法

病毒感染的檢查方法電鏡技術(shù)血清學(xué)試驗(yàn)分子生物學(xué)技術(shù)病毒的分離鑒定標(biāo)本采集與送檢1整理課件一、標(biāo)本采集與送檢原那么：1.盡早采?。喊l(fā)病初期2.部位適宜：由感染部位采取3.冷藏速送：裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)〔一〕供別離病毒、檢出核酸及抗原的標(biāo)本〔二〕檢測特異性抗體的標(biāo)本采集雙份血清，4-20℃保存2整理課件病毒材料采集與檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系采取標(biāo)本的時(shí)期檢查病毒及其成分測定抗體潛伏期及前驅(qū)期剛發(fā)病或急性期恢復(fù)期及康復(fù)期較難查見最多查見很難查見未增多未增多或增多不明顯明顯增多（常超過4倍）3整理課件病毒別離是診斷病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，一旦陽性，即可確診。不適用于快速診斷，操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)本錢高，陽性檢出率低等有時(shí)不得不別離病毒，例如發(fā)現(xiàn)了一種新的病毒病，必須別離病毒進(jìn)行研究，或者別離株的鑒定對流行病學(xué)有很大作用〔如流感病毒〕，或者需要培育疫苗，或者希望獲得天然弱毒株等。二、常規(guī)別離與鑒定4整理課件〔一〕病毒別離標(biāo)本采集殺滅雜菌（青鏈霉素）接種鑒定病毒種型易感動物出現(xiàn)病狀雞胚病變或死亡細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變?nèi)蠓椒?整理課件〔二〕病毒鑒定1.形態(tài)學(xué)鑒定觀察CPE。常見的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化為細(xì)胞變圓、壞死、溶解、脫落或形成合胞體。有些病毒能形成包涵體。正常細(xì)胞病變細(xì)胞6整理課件感染細(xì)胞具有吸附紅細(xì)胞的能力感染細(xì)胞的培養(yǎng)液中有許多游離病毒存在，具有凝集紅細(xì)胞的作用2.血吸附和血凝作用多見于以出芽方式釋放的病毒。7整理課件紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞〔1〕血吸附作用吸附試驗(yàn)可通過特異抗血清抑制來到達(dá)鑒定具有吸附特性的病毒8整理課件〔2〕血凝作用血凝試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)9整理課件〔3〕病毒成分的直接檢測用免疫學(xué)或分子生物學(xué)技術(shù)直接檢查感染細(xì)胞或其上清液中病毒抗原〔或核酸〕。10整理課件三、電子顯微鏡檢查

病毒的很多特征如大小、形態(tài)、結(jié)構(gòu)等必須借助電子顯微鏡進(jìn)行檢查。對于目前尚難培養(yǎng)而形態(tài)又非常典型的病毒，可直接從感染組織或分泌液，或者接種病料的雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)收獲的材料作電子顯微鏡檢查，直接觀察病毒粒子。11整理課件透射電子顯微鏡

12整理課件1.正染法：超薄切片法取材固定戊二醛四氧化鋨清洗與脫水浸透包埋聚合切片染色鈾染鉛染13整理課件雞痘病毒〔超薄切片〕14整理課件超薄切片法的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：可觀察病毒形態(tài)和形態(tài)發(fā)生過程缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，但標(biāo)本可長時(shí)間保存15整理課件2.負(fù)染技術(shù)負(fù)染是指通過重金屬鹽在樣品四周的堆積而加強(qiáng)樣品外周的電子密度，使樣品顯示負(fù)的反差，襯托出樣品的形態(tài)和大小。銅網(wǎng)樣品

濾紙染液〔常用磷鎢酸〕1-2分鐘后電鏡觀察16整理課件口蹄疫病毒的電鏡負(fù)染17整理課件負(fù)染法的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：快速簡易〔10-20min〕；分辨率高；圖象清晰地病毒結(jié)構(gòu)缺點(diǎn)：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有樣品應(yīng)處于懸浮狀態(tài)18整理課件免疫電鏡技術(shù)是將抗原抗體反響的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結(jié)合，在亞細(xì)胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進(jìn)行定位分析的一種高度精確、靈敏的方法。3.免疫電鏡技術(shù)(Immuneelectronmicroscopy，IEM)19整理課件〔1〕免疫凝集電鏡技術(shù)抗原與抗體凝集反響后，可使標(biāo)本中病毒顆粒聚集成團(tuán)，再經(jīng)負(fù)染直接在電鏡下觀察，提高了敏感性，確定病毒的血清學(xué)性質(zhì)。20整理課件〔2〕免疫電鏡定位技術(shù)特異性抗體用電子致密物質(zhì)，如鐵蛋白、過氧化物酶等標(biāo)記后，使之與組織超薄切片中的抗原結(jié)合，在電鏡下觀察到標(biāo)記物所在位置，即為抗原抗體反響的部位。酶標(biāo)記染色

21整理課件四、血清學(xué)試驗(yàn)

是一種常用的診斷病毒病的方法。可采用ELISA、瓊脂擴(kuò)散、中和試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)等免疫血清學(xué)方法檢查病畜的抗體消長情況和發(fā)病組織中的病毒抗原。22整理課件virus1.中和反響觀察特異性抗體能否保護(hù)易感的試驗(yàn)動物死亡，能否抑制病毒的細(xì)胞病變效應(yīng)。凡能與病毒結(jié)合，使其失去感染力的抗體又稱中和抗體。23整理課件2.補(bǔ)體結(jié)合反響AgAb紅細(xì)胞溶血素補(bǔ)體AbAg紅細(xì)胞補(bǔ)體溶血素溶血〔-〕不溶血〔+〕24整理課件3.免疫擴(kuò)散

25整理課件4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)〔ELISA〕將的抗體或抗原結(jié)合在某種固相裁體上，并保持其免疫活性。測定時(shí)，將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體外表吸附的抗體或抗原發(fā)生反響。然后參加酶的作用底物催化顯色，進(jìn)行定性或定量測定。26整理課件〔1〕間接ELISA27整理課件〔2〕夾心ELISA28整理課件3′3′5′5′3′3′3′3′3′3′5′5′5′5′5′5′3′3′5′5′3′3′5′5′模板DNA雙鏈形成新的雙鏈DNA退火變性五、分子生物學(xué)技術(shù)聚合酶鏈反響〔PCR〕29整理課件2.核酸雜交技術(shù)核酸探針〔probe〕是指能與特定核酸序列發(fā)生特異性互補(bǔ)的核酸片段，可檢測待檢樣品中特定的基因順序。30整理課件六、感染組織的組織學(xué)檢查病毒在光學(xué)顯微鏡下無法看到，但是在某些病毒感