生姜中6-姜酚的提取工藝研究

生姜中6-姜酚的提取工藝研究

1生姜—引言生姜是多年生草本植物的一種。它的根是肥沃的，扁平的，芳香的。2005年版藥典一部收載該品種,全國(guó)各地均有分布。生姜味辛性溫,長(zhǎng)于發(fā)散風(fēng)寒、化痰止咳,又能溫中止嘔、解毒,臨床上常用于治療外感風(fēng)寒及胃寒嘔逆等癥,前人稱(chēng)之為“嘔家圣藥”。其主要有效成分為姜辣素,而6-姜酚是姜辣素中的一大類(lèi)成分。因此,本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)合高效液相色譜法(HPLC),以6-姜酚的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)6-姜酚的最佳提取工藝進(jìn)行研究。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器和試劑2.1.1紫外-可見(jiàn)分離器LC-20A型液相色譜儀(日本島津公司);SPD-20A型紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器(日本島津公司);25μL手動(dòng)進(jìn)樣器(日本島津公司);HT-20型柱溫箱(日本島津公司)。2.1.2測(cè)定項(xiàng)目及方法6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品(天津馬克生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20081015,歸一化法測(cè)定含量大于98%);乙腈為色譜純(江蘇漢邦科技有限公司);甲醇色譜純和分析純(江蘇漢邦科技有限公司)。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1正交實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇甲醇提取。影響甲醇提取的主要因素有浸泡時(shí)間、甲醇用量、提取時(shí)間,以上3個(gè)因素,每個(gè)因素選擇3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn),因素水平安排見(jiàn)表1。2.2.26-姜酚的含量測(cè)定2.2.2.流動(dòng)相、柱線(xiàn)色譜柱:迪馬KromasilC18(5μm,250mm×4.6mm);流動(dòng)相:乙腈∶水=44∶56;檢測(cè)波長(zhǎng):280nm;流速:1.0mL/min;柱溫:30℃;理論塔板大于2000;進(jìn)樣量:10μL。色譜圖見(jiàn)圖1。2.2.2.色譜法測(cè)定色液準(zhǔn)確稱(chēng)取6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品3.96mg,用甲醇(色譜純)溶解后,轉(zhuǎn)移至10mL棕色容量瓶中,加甲醇(色譜純)至刻度,搖勻。量取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液5mL,置25mL容量瓶中,加甲醇(色譜純)至刻度,配成濃度為0.0000792g/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,搖勻,即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.2.2.樣品溶液的提取稱(chēng)取生姜末0.5g,根據(jù)已選定提取工藝條件加入甲醇(分析純),浸泡,67℃下水浴回流提取,冷卻,補(bǔ)足失重,即得樣品溶液。進(jìn)樣前用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。2.2.2.線(xiàn)性關(guān)系的考察取同一濃度的6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.000198g/mL),分別準(zhǔn)確吸取1、2、4、6、8mL置于10mL棕色容量瓶中,加甲醇(色譜純)稀釋至刻度,搖勻,即得不同濃度的對(duì)照品溶液。每一濃度分別注入色譜儀10μL,按上述色譜條件測(cè)定峰面積值,以峰面積(y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得回歸方程為:y=571333x-15112(r=0.9999)。表明6-姜酚在進(jìn)樣量0.198—1.584μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。校準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。3結(jié)果與討論3.1精密度實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取上述對(duì)照品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)得峰面積,計(jì)算RSD為0.3052%,表明精密度良好。3.2重復(fù)實(shí)驗(yàn)制備6份供試品溶液,分別測(cè)得峰面積并計(jì)算6-姜酚的含量,其RSD值為0.4015%,表明重現(xiàn)性良好。3.3進(jìn)樣檢測(cè)峰面積值取同一份供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、12、24h進(jìn)樣測(cè)定峰面積值,計(jì)算RSD值為1.8874%。表明樣品含量在24h內(nèi)穩(wěn)定。3.4加標(biāo)回收、測(cè)定分別制備5份同一濃度的供試品溶液,每一樣品中加入相同量的6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品,依法測(cè)定,平均回收率為99.65%,RSD為1.9832%。3.5正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果和離散度分析結(jié)果見(jiàn)表2、表3。3.6試驗(yàn)的結(jié)果稱(chēng)取生姜末3份,每份0.5g,根據(jù)已經(jīng)選擇的工藝提取制備。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,所篩選的提取工藝基本穩(wěn)定。3.7樣品處理方法的確定(1)由表2中R值可知,各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響依次為BCA;由于A因素與空白項(xiàng)的R值相等,這樣可以認(rèn)為A因素的R值是由實(shí)驗(yàn)誤差引起的,所以要將其與空白項(xiàng)一起作為實(shí)驗(yàn)誤差項(xiàng),即SSe。方差分析結(jié)果表明,因素B對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有非常顯著的影響,而A和C的影響不顯著。綜合各種因素,選定6-姜酚的最優(yōu)提取工藝為A1B2C2,即0.5g生姜末,25mL甲醇水浴提取1h。(2)樣品處理方法的確定:本實(shí)驗(yàn)曾采用甲醇為溶劑,分別進(jìn)行超聲提取和水浴回流提取,結(jié)果發(fā)現(xiàn)水浴回流提取的效果較好,提取率大。分別以甲醇和乙醇作為提取溶劑進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇的提取效果要優(yōu)于乙醇。以不同濃度的甲醇為提取溶劑提取6-姜酚,比較后發(fā)現(xiàn),以100%的甲醇為溶劑,其提取率最高。因此,本實(shí)驗(yàn)采用甲醇水浴回流提取生姜中的6-姜酚。(3)色譜條件的選擇:研究比較了乙腈-水(44∶56)、乙腈-水-磷酸(