傳統(tǒng)麻杏石甘湯劑中麻黃堿含量影響因素的研究

傳統(tǒng)麻杏石甘湯劑中麻黃堿含量影響因素的研究

由于傳統(tǒng)中醫(yī)復(fù)合湯劑（傳統(tǒng)湯劑）的使用不方便，近年來(lái)開(kāi)始用于臨床應(yīng)用。傳統(tǒng)湯劑是按處方配藥,加水共煎而得;顆粒湯劑是將批量的單味中藥飲片分別加水煎煮、濃縮、干燥、分裝,使用時(shí)按處方混合,開(kāi)水沖服即得。傳統(tǒng)湯劑與顆粒湯劑的藥效學(xué)、臨床療效方面的比較已經(jīng)有了一些報(bào)道,但有關(guān)其化學(xué)組成方面的報(bào)道較少。麻杏石甘湯一方出自東漢名醫(yī)張仲景《傷寒論》一書(shū),由麻黃6g,苦杏仁9g,甘草6g,石膏24g組成,該方具有辛涼宣肺,清熱平喘之功效,主治表邪未解,肺熱咳喘證?，F(xiàn)代臨床經(jīng)驗(yàn)證明,石膏的用量的大小在麻杏石甘湯治療咳喘癥的療效上起到了關(guān)鍵的作用,重用石膏能夠使該方的療效大大提高,使咳喘諸癥更快得到緩解。在研究麻杏石甘湯傳統(tǒng)湯劑與顆粒湯劑中麻黃堿含量時(shí),作者發(fā)現(xiàn)其麻黃堿的含量有著極顯著性的差異,麻杏石甘湯傳統(tǒng)湯劑中麻黃堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.79mg·g-1,麻杏石甘湯顆粒湯劑中麻黃堿為3.29mg·g-1。這一結(jié)果說(shuō)明傳統(tǒng)湯劑的混煎與顆粒湯劑的單煎的一些有效成分含量有著較大區(qū)別。為了研究麻杏石甘湯中每味藥材對(duì)麻黃堿溶出的影響因素,作者采用了混料均勻設(shè)計(jì)法,對(duì)麻杏石甘湯進(jìn)行了拆方研究,對(duì)各提取液的麻黃堿用HPLC進(jìn)行了含量測(cè)定,并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了分析。1中藥配方顆粒湯劑和傳統(tǒng)復(fù)方湯劑的制備美國(guó)Agilent1100高效液相色譜儀,包括Agilent-G1312A二元泵,G1315B二極管陣列檢測(cè)器,G1313自動(dòng)進(jìn)樣器,G1316A柱溫箱,G1322A真空脫氣機(jī),Agilent-A.08.03化學(xué)工作站;超聲波清洗機(jī)(HS10260D,10L,天津恒奧);800型離心沉淀器(25W,最高轉(zhuǎn)速4000r·min-1,上海手術(shù)器械廠)。藥材經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院董立莎教授鑒定,麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf的干燥草質(zhì)莖、甘草為豆科植物甘草GlycxycrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖、苦杏仁為薔薇科植物杏PrunusarmeniacaL.的干燥成熟種子、石膏為硫酸鹽類(lèi)礦物硬石膏族石膏GypsumFibrosum.。鹽酸麻黃堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所,批號(hào)714-9202);麻杏石甘湯中藥配方顆粒湯劑和傳統(tǒng)復(fù)方湯劑(自制);乙腈為色譜純,磷酸為分析純,水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。2方法和結(jié)果2.1%磷酸3.2%色譜柱:DiamonislC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸(5∶95);檢測(cè)波長(zhǎng)207nm;流速1mL·min-1;柱溫25℃。在上述條件下,麻黃堿與雜質(zhì)峰完全分離,空白樣品無(wú)干擾,見(jiàn)圖1。2.2對(duì)照溶液的制備精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量,加甲醇溶液制成8.0μg·mL-1的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液。2.3照品溶液的制備分別精密吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液,制備6個(gè)不同濃度梯度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液。取10μL注入液相色譜儀,記錄色譜,以峰面積積分值(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸,得線性回歸方程A=2070.63C+7.86,r=0.9995,線性范圍0.0628～0.1884μg。2.4密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液15μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,RSD0.83%。2.5穩(wěn)定性研究精密吸取供試品液各10μL,照上述色譜條件,每2h測(cè)定1次,各測(cè)5次,結(jié)果RSD1.54%,說(shuō)明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定總色譜圖稱(chēng)取各味藥材9份,按表2量精密加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品,按上述條件各制備高、中、低濃度的供試液各3份,并按色譜條件項(xiàng)下進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,記錄色譜圖,計(jì)算,結(jié)果見(jiàn)表1。2.7麻杏石甘湯配方考察為考察處方組合對(duì)鹽酸麻黃堿含量的影響,固定各組合中麻黃處方量為6g,對(duì)處方中其余三味藥材采用混料均勻設(shè)計(jì)的方法進(jìn)行設(shè)計(jì)中心配伍組合。按文獻(xiàn)選用混料均勻設(shè)計(jì)表Un(nS-1)來(lái)安排實(shí)驗(yàn),其中n為實(shí)驗(yàn)次數(shù)和水平數(shù),s為待考察的因素?cái)?shù),在此選表U9(93)。即對(duì)復(fù)方中3個(gè)因素各取9個(gè)不同水平并設(shè)計(jì)成9種不同配方進(jìn)行考察。具體算法如下:設(shè)Un(nS-1)為一個(gè)均勻設(shè)計(jì)表,其中第i行第j列的元素記為Uij;令Cij=(Uij-0.5)n,i=1,2,…,n,j=1,2…,n。則本列中各組分配比為:X1=1-Ci112,Xi2=(1-Ck2)Ci112,Xi3=Ci2Ci112。i=1,2,…,n。X1,X2,X3分別為麻杏石甘湯處方中的3個(gè)成分,即炙甘草、苦杏仁、石膏,每類(lèi)中藥在方中配比(表3)的前列,組成了9個(gè)X1+X2+X3=1但配比不同的中藥組方。麻杏石甘湯整個(gè)處方總量為45g,由于麻黃稱(chēng)樣量為6g,則其余三味藥材的藥材量為39g。根據(jù)不同配比組方稱(chēng)取藥材,按照麻杏石甘湯傳統(tǒng)復(fù)方湯劑的制備方法分別對(duì)9個(gè)組合進(jìn)行制備。具體組方配比見(jiàn)表2。2.8藥渣添加量的確定按照各組合的不同組方配比稱(chēng)取藥材,加10倍量水常溫浸30min,煎煮保持微沸30min,趁熱過(guò)濾,濾渣加7倍量水煎煮保持微沸20min,趁熱濾過(guò),合并2次濾液,藥渣水洗3次,與濾液合并,減壓濃縮,定容至50mL量瓶中,即得。2.9甲醇的用量精密吸取各組方藥液各5mL,置錐形瓶中,精密加入甲醇25mL密塞,稱(chēng)定質(zhì)量,超聲處理(功率160W,頻率50kHz)20min,放冷,用甲醇補(bǔ)足質(zhì)量,搖勻,濾過(guò)。精密吸取濾液1mL,置中性氧化鋁柱(1cm,100～200目中性氧化鋁1.5g,干法裝柱)上,用50%甲醇9mL洗脫,收集洗脫液,滴加1滴磷酸,再用50%甲醇定容至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),即得。2.10重量測(cè)定取各組供試液進(jìn)樣,在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定不同組方配伍中鹽酸麻黃堿含量,結(jié)果見(jiàn)表3。2.11回歸分析結(jié)果采用Excel統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行逐步回歸處理分析,得回歸方程Y=4.36719347+7.752707437X2+1.2557197041X3,r=0.85664,n=6,F=8.2712、顯著水平P=0.0189。對(duì)回歸方程的各項(xiàng)系數(shù)進(jìn)行偏相關(guān)分析,X2項(xiàng)的P值為0.00543,對(duì)Y值的貢獻(xiàn)達(dá)極顯著水平,X3的P值為0.02596,對(duì)Y值的貢獻(xiàn)達(dá)顯著水平。由回歸方程和偏相關(guān)分析結(jié)果可看出:X2,X3(苦杏仁、石膏)對(duì)整個(gè)處方中麻黃堿的含量是有顯著性影響,并且該關(guān)系是正相關(guān),即二味藥材在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),它們的使用量越大,整個(gè)處方煎煮溶出的麻黃堿含量也就越高。其中,X2(苦杏仁)對(duì)麻黃堿含量的影響起主要作用,X3(石膏)的影響次之。3不同用量條件下麻黃堿含量的測(cè)定由回歸方程及偏相關(guān)檢驗(yàn)可知,麻杏石甘湯中苦杏仁及石膏用量對(duì)麻黃堿含量有顯著性影響。因此,在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)選擇苦杏仁、石膏的最高用量分別為28.7937,27.6198g,最低用量分別為1.3494,1.6926g及中間用量分別為15.0716,14.6562g,分別與6g麻黃、6g炙甘草組成3個(gè)復(fù)方。分別按上述方法制備3個(gè)復(fù)方的供試液,定容至50mL量瓶中。同上操作,分別注入液相色譜儀,測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表4。將驗(yàn)證試驗(yàn)組成的3個(gè)復(fù)方的藥材量分別代入上述回歸方程中,得到高、中、低3個(gè)不同用量條件下麻杏石甘湯中麻黃堿含量的理論值(其中麻黃的稱(chēng)樣量以6.000g計(jì)),見(jiàn)表5。由上表可看出,隨著處方中苦杏仁、石膏的用量越大,麻黃堿的理論含量越高。從驗(yàn)證試驗(yàn)可看出麻黃堿的含量隨著苦杏仁、石膏用量的增大,麻黃堿的含量隨之增高。這與理論值的基本趨勢(shì)相同,即麻黃堿的含量在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)隨著苦杏仁、石膏用量的加大而增高。由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性以及多樣性,實(shí)際煎煮過(guò)程中麻黃堿的含量與回歸方程得出的理論值在數(shù)值上有一定的差異,但其總體趨勢(shì)是相同的。因此可認(rèn)為苦杏仁、石膏對(duì)整個(gè)處方中麻黃堿的含量是有著顯著的影響的,回歸方程Y=4.36719347+7.752707437X2+1.2557197041X3有意義,可用。4不同配方中苦杏仁及石膏的用量對(duì)麻黃堿含量的影響通過(guò)使用混料均勻設(shè)計(jì)對(duì)麻杏石甘湯的組方進(jìn)行設(shè)計(jì)以及