奶牛日糧及牛奶中克百威的測定

奶牛日糧及牛奶中克百威的測定

食用農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全與人們的身心健康和社會穩(wěn)定密切相關(guān)，也是一個現(xiàn)在的突出問題。近年來,出現(xiàn)的一系列牛奶安全問題,嚴重打擊了消費者對奶制品的信心,而克百威(carbofuran)作為一種常用高效廣譜的殺蟲劑和殺螨劑,其在農(nóng)產(chǎn)品中是否有殘留,已引起人們的高度重視?？税偻r(nóng)藥是氨基甲酸脂類農(nóng)藥的一種,別名呋喃丹或蟲螨威,也叫大扶農(nóng),化學(xué)名2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基甲氨基甲酸脂,具有胃毒、觸殺和內(nèi)吸等殺蟲作用,廣泛用于棉花、水稻、甘蔗、花生、大豆、煙草等作物害蟲的防治。在酸性土壤中克百威不易降解,易污染土壤和水源,殘效期長,尤其在蔬菜和糧食生產(chǎn)中違規(guī)使用克百威,會對公眾的健康構(gòu)成直接威脅。雖然我國近年在蔬菜上已禁用該農(nóng)藥,但由于其對某些作物具生長刺激作用,所以仍有不少違章使用現(xiàn)象。目前,國內(nèi)關(guān)于克百威殘留檢測,只有在果蔬、土壤等相關(guān)樣品的研究,而在奶牛日糧及牛奶中是否有殘留的研究尚未見報道。GC-MS(GasChromatography-MassSpectrometry,氣相色譜質(zhì)譜)法可以同時進行定量測定和陽性確證,具有高靈敏性,是檢測克百威殘留的一種有效方法,本試驗利用GC-MS技術(shù)檢測了克百威在奶牛日糧及牛奶中的殘留量。1材料和方法1.1u3000儀器1200液相色譜(FLD),組織搗碎機(DS-1型),恒溫水浴振蕩機(SHZ-88型),谷物粉碎機(FW-100型),超聲波清洗器(KQ-250DE型),旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器(BUCHIR-200型)。1.2牧草飼料及牛奶樣品處理同一個牛場內(nèi)12頭健康奶牛,分3組,分別采集試驗期間牧草、飼料及牛奶樣品,每組4個樣本。由于牛奶樣品是可被直接飲用食品,本試驗對采集回的牛奶樣品進行早、中、晚跟蹤采樣和測定,采集回樣品置于-20℃保存。1.2.1乙腈的預(yù)處理分別稱取牧草、飼料及牛奶樣品20g放入組織搗碎機中,向其中加入80mL乙腈,組織搗碎約3min,在鋪有助濾劑的布氏漏斗中減壓抽濾,收集的濾液轉(zhuǎn)移到裝有6gNaCl的具塞量筒中,振蕩150下,靜置1min,再振蕩100下靜置60min,使水相和乙腈相充分分層。1.2.2淋洗氨基柱的制備吸取上層清液20mL置于燒瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干,2mL二氯甲烷和甲醇(V/V=95∶5)的混合溶液定容,待凈化。用10mL的淋洗液(二氯甲烷:甲醇=95∶5)淋洗氨基柱,待液面接近上層底部時,加入樣品的溶解液。用二氯甲烷和甲醇(V/V=95∶5)的混合溶液10mL淋洗層析柱,淋洗液全部收集,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上(40℃)減壓濃縮至干,用甲醇定容至2mL,過膜,進行液質(zhì)分析。1.3柱溫、進樣量、激發(fā)波長色譜柱:4.6m×150mm×5μm;柱溫:42℃;進樣量:5μL;流動相:甲醇∶水=20∶80;激發(fā)波長:330nm;發(fā)射波長:465nm。1.4檢測方法1.4.1定性法采用克百威的標準樣品質(zhì)譜圖進行定性分析(圖1)。1.4.2定性法2試驗結(jié)果2.1標準曲線及檢出限向不含農(nóng)殘的奶牛日糧及牛奶中,添加0.5μg/mL的克百威標準溶液,根據(jù)克百威的最小進樣量峰高為噪聲3倍量計算,最小檢出限為1.5×10-11g。2.2克百威在牧草、飼料和牛奶上的最低檢測濃度樣品取20g,定容至80mL,進樣5L,克百威在牧草上的最低檢測濃度為1.21×10-3mg/kg,飼料最低檢測濃度為1.22×10-3mg/kg,牛奶上的最低檢測濃度為1.20×10-3mg/kg。2.3相對保留時間即雜質(zhì)峰的保留時間與主峰保留時間的比值,是一種化合物在規(guī)定條件下在層析系統(tǒng)中的運行時間?？税偻?8.0~18.2min。2.4檢測物品與標準品色譜圖的分析采用氣象色譜圖(圖3~6),將實際檢測物品與標準品色譜圖進行對比分析。在相對保留時間之內(nèi),通過比較峰值高度來判定,若峰值未超過標準品峰值,則無農(nóng)藥殘留。3克百威在牛牛日糧及牛奶中的殘留檢測殘留農(nóng)藥嚴重超標并危害人體,常用的氨基甲酸酯類農(nóng)藥,能通過呼吸道、消化道及皮膚進入人體后,其分子全部與膽堿酯酶的陰離子部位相結(jié)合,通過可逆性與競爭性相互作用,兩者形成同一中間產(chǎn)物,在適當(dāng)條件下又分解為膽堿酯酶與氨基甲酸酯,但在整個反應(yīng)過程中,膽堿酯酶與氨基甲酸酯并未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。氨基甲酸酯類農(nóng)藥重度中毒者會出現(xiàn)胸悶、肌肉顫抖等,嚴重的可出現(xiàn)脈搏、呼吸加快,甚至昏迷癥狀。而慢性中毒沒有上述明顯癥狀,反而更加深了人們對殘留農(nóng)藥的麻痹大意?？税偻侔被姿狨ヮ愞r(nóng)藥,原是我國生產(chǎn)和應(yīng)用的氨基甲酸酯類殺蟲劑主要品種之一,殘留克百威長期作用于人體,可能導(dǎo)致基因突變,由于克百威與膽堿酯酶結(jié)合不可逆,因此毒性較高。本實驗室采用氣象色譜法,建立一套適應(yīng)當(dāng)前畜牧業(yè)發(fā)展的快速檢測方法,也為克百威在牛牛日糧及牛奶中的殘留量檢測提供理論依據(jù)。目前,有關(guān)克百威在農(nóng)藥中的殘留檢測,在奶牛日糧及牛奶中的研究未見報道。本試驗采用具有高靈敏性及特異性的高效氣相色譜質(zhì)譜法,通過將克百威水解或衍生化反應(yīng),以提高克百威及其代謝物的熱穩(wěn)定性后進行測定。曹殿潔等用氣象色譜法檢測常見果蔬中克百威的殘留;王建等運用氣相色譜法檢測克百威的殘留;譚頭云等用氣相色譜法測定大豆中克百威及其代謝物的殘留量。陽海等研究發(fā)現(xiàn),在弱堿性條件下,克百威降解速率最快,在酸性條件下不易降解,水溶液中的K+、Na+等金屬陽離子對克百威降解起抑制作用,推測牛瘤胃的酸性環(huán)境不利于含克百威農(nóng)藥的日糧降解,食用此類牛肉或乳制品,易對人體健康造成危害。另外,克百威的超標殘留能否通過日糧的飼喂造成乳制品的安全問題,目前還不清楚,我們將在下一步實驗進行更深一步的研究。本試驗通過比較色譜圖中可疑峰是否為克百威殘留,采用SCAN對可疑峰進行定性分析,將標準圖與色譜圖進行比較,對18min6.5質(zhì)量數(shù)處特征離子組進行離子掃描(SIM)、定性分析,結(jié)果未檢測到克百威殘留。研究結(jié)果表明,克百威在牛奶中無殘留,在牧草和飼料中有殘留,但殘留量遠遠小于最低殘留限量(0.1mg/kg)要求,綜上奶牛日糧及牛奶中克百威的殘留量符合《GB2763-2005食品中最大農(nóng)藥殘留限量》標準,對食品安全無不利影響。采用標準曲線法進行定量分析。準確稱取克百威標準品0.0100g,用丙酮定容至10mL,配制成1000μg/mL