秋茄不同部位提取物體外抗菌活性初步研究

秋茄不同部位提取物體外抗菌活性初步研究

紅樹林是一個分布在亞熱帶和亞熱帶海岸地帶的木本植物群落。這些植物在化學(xué)成分和生理活性方面有許多獨特的特點。世界各國對紅樹林植物活性成分的結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明，紅樹林植物包括種子、皺紋、銅硫醚、硫醇、硫醇、鐵線蓮、氨基酸、苯丙烯酸和丁香水域等化學(xué)成分。根據(jù)研究和分散研究，紅樹林植物具有止血、抗毒、抗炎、抗組胺、抗組胺、抗?jié)?、殺蟲等多種藥理和生物學(xué)活性。秋天的茄子是紅樹林科的秋茄子。作為一種海洋藥物，它被《現(xiàn)代本草綱目》納入了人們的體內(nèi)。在人們中間，秋海棠的皮膚用于收斂和止血。根的水煮法用于治療關(guān)節(jié)炎。根據(jù)文獻，對三葉類植物中的假單胞菌、夏枯草和水生百合谷的水提取物具有不同程度的抑制能力，但秋海棠對普通臨床病原體的抗菌效果沒有報道。在本實驗中，我們研究了不同部位的秋海棠抗菌活性，為科學(xué)研究秋海棠植物的利用提供了科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1受試物的篩選秋茄Kandeliacandel,采自于海南省文昌市的東寨港,經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院鮑時翔教授鑒定.本實驗以秋茄根、枝、葉、果4個部位的水和乙醇提取物以及枝水提取物A、B部位,共10個部分作為受試物,用以篩選秋茄不同部位的抗菌活性.1.1.2菌株和菌株臨床分離菌株10個,為產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶(β-lactamases,BLs)的乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、志賀菌、腸球菌和表皮葡萄球菌,產(chǎn)超廣譜酶(extendedspectrumβ-lactamases,ESBLs)陰性的大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌及產(chǎn)ESBLs和BLs均陰性的傷寒桿菌.所有菌株來源于2005或2006年從湖南長沙湘雅醫(yī)院、廣西醫(yī)科大學(xué)一附院、南寧市第二人民醫(yī)院分離的臨床菌株,由海南醫(yī)學(xué)院微生物免疫教研室提供.1.1.3凈化工作臺和高壓滅菌器電熱恒溫培養(yǎng)箱,由滬黃實驗設(shè)備廠生產(chǎn);醫(yī)用凈化工作臺由蘇州凈化設(shè)備公司生產(chǎn);自動高壓滅菌器由日本HIRAYAMA公司生產(chǎn);電熱干燥箱由中國重慶銀河試驗儀器有限公司生產(chǎn).1.1.4mh水固液的制備w=0.5%的羊紅血球懸液,自己制備.MH瓊脂和MH肉湯均由杭州天和微生物試劑有限公司提供,批號分別為:20050404和20041112.1.2方法1.2.1保鮮液和測定用戶質(zhì)量濃度采用常量肉湯稀釋法測定秋茄各部位的最低抑菌濃度(MIC).(1)受試物各部分藥液的制備精確稱取上述各部分受試物各12.5g,分別加蒸餾水稀釋到25mL,制成0.5g·mL-1的溶液.經(jīng)115.6℃20min高壓滅菌后,4℃保存?zhèn)溆?(2)藥物液體培養(yǎng)基的制備在無菌操作臺上,將配制好且已滅菌的秋茄各部位藥液(0.5g·mL-1)用MH肉湯(注:用于接種乙型鏈球菌的藥液用含0.5%羊血球的MH肉湯)分別作二倍遞減濃度稀釋,即將藥液依次按1∶2,1∶4,1∶8,…,1∶256的比例進行稀釋,最終藥液的質(zhì)量濃度依次為0.25,0.125,0.0625,…,0.001953g·mL-1.(3)菌株接種及培養(yǎng)取1000支滅菌帶棉塞的試管,每支試管內(nèi)分別加入上述藥液培養(yǎng)基各1mL,然后每管再分別加入相應(yīng)的菌液0.1ml(第9號試管只加最低稀釋倍數(shù)的藥液,不加菌液,作為陰性對照,觀察肉湯或藥液是否被污染;第10號管只加菌液和肉湯,不加藥液,作為陽性對照,觀察細菌是否正常生長).然后,將各試驗管和對照管置37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~20h,試驗菌為乙型鏈球菌的試驗管培養(yǎng)時間為20~24h,觀察并判定秋茄各部分對每種菌株的MIC.(4)最低抑菌濃度(MIC)的確定經(jīng)培養(yǎng)后,肉眼觀察,如試驗管呈現(xiàn)混濁,表明有菌生長,藥液無抑菌作用;如試驗管呈現(xiàn)澄明,搖勻后仍澄明者,則表明無菌生長,藥液有抑菌作用.從無菌生長的各管中找出最低藥物濃度的試驗管,該管的藥物濃度即為該藥的最低抑菌濃度(MIC).1.2.3最低細菌濃度mc的測量2結(jié)果2.1化學(xué)成分試驗的結(jié)果2.2秋帕各部分的最低抗菌濃度2.3秋茄子各部分的最低殺菌濃度3其他部位的提取物抗菌活性試驗結(jié)果顯示:除根乙醇提取物、枝水提取物A部位對產(chǎn)BLs乙型鏈球菌沒有抗菌活性外,秋茄根、枝、葉、果4個部位的水和乙醇提取物及枝水提取物A、B部位對大部分臨床分離菌株均顯示有體外抑菌和殺菌活性.其中,秋茄枝水提取物B部位對10種菌株的MIC均為1.953g·L-1l,除對產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶乙型鏈球菌的MBC為15.625g·L-1外,對其他9種菌株的MBC均為3.90625g·L-1,這說明秋茄枝水提取物的體外抗菌活性最強.另外,根、葉、枝、果的水提取物及果乙醇提取物對產(chǎn)BLs的乙型鏈球菌,葉、果、枝的水提取物及枝水提取物A部位對產(chǎn)ESBLs陰性的大腸埃希菌,果水提取物、枝水提取物A部位對產(chǎn)ESBLs陰性的產(chǎn)氣腸桿菌,果、枝的水提取物及枝水提取物A部位對產(chǎn)BLs的志賀菌,果乙醇提取物、枝水提取物、枝水提取物A部位對腸球菌的MIC均大于等于62.5g·L-1,這說明秋茄上述各部位與其他各部位相比,對相應(yīng)細菌的抗菌活性相對較弱.MelchorGleiby等通過體外抗菌試驗,發(fā)現(xiàn)與秋茄同屬于紅樹科的Rhizophoramangle樹皮的水提取物對Escherichiacoli(大腸桿菌)ATCC25922、Klebsiellapneumoniae(肺炎克雷伯桿菌)ATCC13883等7種感染傷口常見細菌具有明顯的抗菌活性,該試驗與秋茄體外抗菌試驗結(jié)果存在一致性.綜上所述,秋茄不同部位的提取物均呈現(xiàn)廣譜抗菌活性,對多種臨床常見病原菌均表現(xiàn)出較強的抗菌作用,表明秋茄是一種很有開發(fā)前景的海洋藥用植物.本文所涉及的工作只是秋茄藥用成分研究的開端,抗菌活性物質(zhì)的進一步分離純化及其結(jié)構(gòu)解析,將有助于人們對抗菌作用的進一步深入研究的借鑒.秋茄根、枝、葉、果4個部位經(jīng)曬干、粉碎后,分別經(jīng)φ=95%的乙醇和蒸餾水回流提取、真空干燥,得4部位的水和乙醇提取物;其枝水提取物又經(jīng)大孔吸附樹脂分離、干燥后得到A、B兩部分顆粒.然后,采用試管法、紙片法和薄層層析法分別對秋茄根、枝、葉、果的水及乙醇提取物的各種化學(xué)成分進行定性檢驗.1.2.2秋茄人工林的抗菌活性取上述MIC及以上各濃度澄清透明液0.1mL轉(zhuǎn)種涂布于合適的瓊脂平皿上,置37℃恒溫箱中培養(yǎng)18~24h(其中鏈球菌需培養(yǎng)20~24h,其余各菌培養(yǎng)18~20h即可),觀察記錄菌落數(shù),菌落數(shù)少于5個或未見細菌生長的最低藥液濃度為該藥液的最低殺菌濃度(