玫瑰花總黃酮類化合物提取工藝研究

玫瑰花總黃酮類化合物提取工藝研究

蝗蟲是指豆科植物的花和花蕾，在中國大部分地區(qū)生長?；被ㄖ泻胸S富的蕓香甙(蘆丁,rutin),三萜皂甙,槐花米甲素、乙素、丙素等多種物質(zhì)?；被准姿厥呛褪|香苷不同的黃酮類物質(zhì),它在花蕾中的含量為14%左右。據(jù)醫(yī)書記載,槐花有多種醫(yī)療保健功能,如《日華子本草》中說槐花“治五痔,心疼,眼疾”;《本草綱目》中說“炒香頻嚼,治失音及喉痹”;《醫(yī)林篡要》中記載其“瀉肺逆,瀉心火,清肝火,堅腎水”?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明,黃酮類物質(zhì)具有降低心肌耗氧量,使冠脈、腦血管流量增加,抗心律、軟化血管,降血糖、血脂,抗氧化,消除抗體內(nèi)自由基、抗衰老作用,增加機體免疫力。有關(guān)文獻報道了從葛根、水芹、苦蕎麥、銀杏葉等中提取黃酮類物質(zhì),而對于槐花中黃酮類物質(zhì)的提取尚未見有文獻報道。本文對槐花中黃酮類物質(zhì)的提取方法(主要研究了水提法和醇提法)進行了研究?；被ㄖ悬S酮類物質(zhì)的提取及含量的測定,有利于更深入地研究槐花的藥理與保健作用,為槐花的開發(fā)評價槐花的質(zhì)量提供了理論依據(jù)和檢測手段。1材料和方法1.1u3000儀器材料:槐花,購于潮州市中藥店;NaNO2、AL(NO3)3、NaOH、95%乙醇(均為A.R級)。儀器:724分光光度計(上海光學儀器廠);光電分析天平TG328B型(上海第二天平儀器廠);干燥箱101A1型(上海市實驗儀器總廠);電熱套;離心機等。1.2黃酮物質(zhì)提取方法和含量測定1.2.1提取蝗蟲中黃酮類物質(zhì)的方法12柔和處理材料→干燥→粉碎→醇回流→抽濾→離心→離心液合并→濃縮→定容→測定吸光度,計算總黃酮類物質(zhì)的含量。2制備玫瑰花干料液分別在50、60、70、80℃和90℃等不同溫度下,各取5g槐花干料進行水浴恒溫,以蒸餾水作溶媒,第一次用10倍溶媒溫浸1h,第二次8倍溶媒溫浸0.5h,合并二次濾液并濃縮,然后于50mL容量瓶定容。3添加0倍溶媒和8倍溶媒取5g槐花干料,以蒸餾水作溶媒,分別用10倍溶媒和8倍溶媒于電熱器直接加熱,保持微沸,第一次加熱1h,第二次0.5h。合并二次濾液并濃縮,然后于50mL容量瓶定容。4水浴溫度的確定各取5g槐花干料,分別以pH值為8、9、10和11的NaOH溶液作溶媒,在80℃水浴恒溫溫浸。第一次用10倍溶媒溫浸1h,第二次用8倍溶媒溫浸0.5h,合并二次濾液并濃縮,然后于50mL容量瓶定容。1.2.2蘆丁濃度測定方法配制一系列不同濃度的蘆丁標準溶液于波長λ=500nm處測定吸光度,依蘆丁濃度——吸光度標準工作曲線,得出回歸方程:Y=0.1026A-0.00195相關(guān)系數(shù)r=0.9999Y—蘆丁溶液的濃度,g/L;A—溶液的吸光度。1.2.3alno33.2用量的測定將提取液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,用與提取時同濃度的乙醇定容,搖勻。取0.4mL定容后的提取液置于10mL容量瓶中,用30%乙醇補充至5mL,加入0.28mLNaNO2(1∶20),搖勻,放置5min后加入0.28mLAL(NO3)3(1∶10),6min后再加入2mL1moL/L的NaOH溶液,混勻,用30%乙醇稀釋至刻度,10min后于500nm處的波長測定吸光度,試劑為空白?？傸S酮類物質(zhì)含量(%)=[(Y×10×100)/(0.4×5×1000)]×100=Y×50Y:根據(jù)所測定溶液的吸光度值,用回歸方程計算出的相對應的總黃酮類物質(zhì)含量。1.3提取工藝的影響在材料粉碎度以及所用溶劑一定條件下,溶劑的濃度、回流的時間、提取溫度以及溶媒量等因素都會對提取率產(chǎn)生影響,試驗選用乙醇為提取劑,由于在回流時的溫度難以控制,因此本試驗只討論了乙醇濃度、乙醇用量和回流時間對提取率的影響。2結(jié)果與分析2.1提取效果及分析分別用20%、40%、60%、80%的乙醇,以60mL為1倍量對槐花10g進行回流提取1h,提取液按照1.2.3試驗步驟操作。結(jié)果如表1。試驗表明:槐花在濃度為40%的乙醇回流時所測得的吸光度最高。2.2不同溶劑對醇提取效果的影響分別用1、2、3倍量的乙醇對槐花中黃酮類物質(zhì)進行提取1h,試驗結(jié)果如表2。試驗結(jié)果表明:槐花在2倍量溶媒時吸光度較高。2.3結(jié)果槐花以溶媒量為2倍量40%的乙醇從中提取總黃酮類物質(zhì)。試驗結(jié)果如表3。試驗結(jié)果表明:物料回流2h的提取效果最好,往后隨著時間增加,吸光度反而降低,這可能是回流時間太長,有部分乙醇被揮發(fā),而導致沸點逐漸增大,從而破壞某些黃酮類化合物。2.4提取水的提取效果2.4.1黃酮類物質(zhì)提取由圖1可知,各取5g干槐花5份,各加蒸餾水50mL和30mL于50℃、60℃、70℃、80℃和90℃進行溫浸提取兩次時,隨著溫度的升高,提取液中的總黃酮類物質(zhì)也增加,即溫度提高溫浸效果較好,主要是由于黃酮類物質(zhì)易溶于熱水。2.4.2不同ph值對提取液總黃酮類物質(zhì)的影響由圖2可知,各取5g干槐花4份,在80℃恒溫水浴分別以pH值為8、9、10、11的NaOH溶液分兩次溫浸1h和0.5h。pH值降低時,由于提取不完全,提取液中的總黃酮類物質(zhì)含量較低;pH值為11時雖然黃酮含量較高,但含有的NaOH溶質(zhì)較多而造成分析結(jié)果出現(xiàn)干擾,因此pH值為10時的加堿溫浸法效果最好。2.4.3乙醇回流法與水浴溫浸法比較由圖3可知,取干槐花5g3份,分別以蒸餾水作溶媒于90℃恒溫水浴、以蒸餾水作溶媒于電熱器上直接加熱、以pH值為10的NaOH溶液于80℃恒溫水浴各提取1h和0.5h。以80℃恒溫水浴,pH值為10的加堿溫浸法提取效果最好;90℃水浴溫浸法的效果次之,煎煮法最差。這主要是煎煮法的過程中,溶劑比較容易蒸發(fā),損失較多,造成用煎煮法提取液中總黃酮類物質(zhì)含量最低。比較了水提方法與醇提法,醇提法效果較好。為全面考查醇提法影響因素,設計了溶媒量、溶媒濃度和提取次數(shù)的3因素3水平正交試驗,結(jié)果見表4。試驗結(jié)果及方差分析表明:乙醇回流法從槐花中提取總黃酮類化合物的最佳條件為B2C3A2,即用2倍量40%乙醇回流3次(每次2h),影響因素的大小依次為:乙醇濃度、提取次數(shù)、溶媒量;此法提取的槐花中總黃酮類物質(zhì)含量為13.04%。3黃酮類物質(zhì)的提取對槐花中黃酮類物質(zhì)的提取,水提法以80℃的恒溫水浴,pH值為10的氫氧化鈉液提取效果最好。醇提法的正交試驗的結(jié)果表明:槐花中黃酮類物質(zhì)的最佳提取條件是:B2C3A2,即用2倍量40%乙醇回流3次(每次2h)。醇提法提取總黃酮類物質(zhì)的含量是13.04%,而堿提法只有6.06%。所以,槐花中黃酮類物質(zhì)的最佳提取