植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)五 丙二醛含量測(cè)定

植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)五丙二醛含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理植物在衰老或逆境下遭受傷害，在活性氧積累誘發(fā)下發(fā)生膜脂過(guò)氧化作用，產(chǎn)生丙二醛、二烯軛合物、脂類過(guò)氧化物、乙烷等。其中丙二醛（MDA）是膜脂過(guò)氧化最重要的產(chǎn)物之一，通常利用它作為膜脂過(guò)氧化指標(biāo)，因此可通過(guò)測(cè)定MDA了解膜脂過(guò)氧化的程度，以間接測(cè)定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的對(duì)逆境條件反應(yīng)的強(qiáng)弱。實(shí)驗(yàn)原理丙二醛在高溫及酸性環(huán)境下可與2-硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)產(chǎn)生紅棕色的三甲基復(fù)合物（3,5,5′-三甲基惡唑2,4-二酮），該物質(zhì)的吸光系數(shù)為155mmol/(L·cm)，在532nm處有最大吸收峰，并且在600nm處有最小光吸收。硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5′-三甲基惡唑2,4-二酮（三甲川）實(shí)驗(yàn)原理可溶性糖對(duì)此反應(yīng)有干擾，為消除這種干擾可使用以下公式算出MDA濃度（μmol/L），并進(jìn)一步算出單位質(zhì)量組織中MDA含量（μmol/g）。C（μmol/L）=6.45（A532-A600）-0.56A450

A450、A532和A600分別表示在三種波長(zhǎng)處的吸光度值實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?shí)驗(yàn)材料、儀器設(shè)備與試劑目的：學(xué)習(xí)和掌握丙二醛法測(cè)定植物葉片中過(guò)氧化脂質(zhì)含量的原理和方法。儀器

分光光度計(jì)、離心機(jī)、電爐；研缽、天平、試管架、離心管、移液管、濾紙等。試劑5%三氯乙酸（TCA）；0.67%硫代巴比妥酸（用10%TCA配制）；石英砂。材料：白蘭葉片實(shí)驗(yàn)步驟1.取0.5g葉片材料，加2mL5%TCA研磨后將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，再用3mL5%TCA洗滌研缽后轉(zhuǎn)入離心管。將勻漿在3000r/min下離心10min。2.取上清液2mL，加0.67%TBA2mL，混合后在100℃水浴上煮沸30min，冷卻后再離心一次。3.分別測(cè)定上清液在450nm，532nm和600nm處的吸光度值（以0.67%硫代巴比妥酸溶液為空白），按公式計(jì)算MDA濃度注意事項(xiàng)反應(yīng)之后濃度改變離心時(shí)要注意配平問(wèn)題如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間作業(yè)與思考題得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，代入公式計(jì)