




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
植物中小分子rna的高通量測序研究進展
0焦磷酸高通量測序技術(shù)小分子rna(小型鈉)是一個非編碼的rona分子,具有20.30%的長度。自從1993年首次在秀麗線蟲(Caenorhadits,elegans)中被發(fā)現(xiàn)后,人們越來越多地意識到小分子RNA的重要作用。相對于小分子RNA的巨大數(shù)量,傳統(tǒng)的Sanger測序法操作復雜,花費大,測序深度有限,效率較低,因此在很大程度上制約了植物小分子RNA的發(fā)現(xiàn)速度。自2005年以來,人們開始采用以大規(guī)模平行標簽測序技術(shù)(massivelyparallelsignaturesequencing,MPSS)、454-FLX(454lifesciences)和Solexa(illumina)測序技術(shù)為代表的新型焦磷酸高通量測序技術(shù)(pyrosequencing)來發(fā)掘植物小分子RNA。這些第2代測序技術(shù)盡管獲得的序列較短,但具有速度快、成本低、覆蓋度深、產(chǎn)出巨大等優(yōu)點,因此非常適合小分子RNA測序,尤其是對那些拷貝數(shù)低的小分子RNA。以最早發(fā)現(xiàn)的microRNA(miRNA)為例,互補鏈的出現(xiàn)已成為衡量其是否為miRNA基因的充分必要條件。而miRNA互補鏈在miRNA形成后即進入降解途徑,因而拷貝數(shù)極低,利用傳統(tǒng)測序技術(shù)一般無法檢測到。因此,高通量測序技術(shù)可大大促進植物小分子RNA基因的發(fā)現(xiàn)過程,為研究小分子RNA的合成機制和生物學功能及其在物種間的進化規(guī)律提供大量信息。鑒于小分子RNA在植物生長、發(fā)育和應答外界脅迫等方面具有重要功能[12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23],有關(guān)其生物合成和功能研究已有多篇綜述。所以,本文在簡單介紹各種植物小分子RNA特點的基礎上,側(cè)重總結(jié)近幾年利用高通量測序技術(shù)挖掘植物小分子RNA的研究成果,以期反映高通量測序技術(shù)在加速植物小分子RNA發(fā)現(xiàn)、促進植物小分子RNA功能研究以及提高人們對植物小分子RNA進化的認識等方面的最新進展。1植物小分子rna的合成根據(jù)植物小分子RNA生物合成途徑的不同,大致上可將其分為微小RNA(microRNA,miRNA)和小干擾RNA(smallinterferingRNA,siRNA)兩大類型。其中siRNA又分為天然反義siRNA(naturalantisensesiRNA,nat-siRNA)、反式作用siRNA(trans-actingsiRNA,ta-siRNA)和異染色質(zhì)小RNA(heterochromaticsmallRNA)。植物小分子RNA的生物合成過程需要多種蛋白和酶的參與。在擬南芥中,III型核糖核酸酶(dicer-like,DCL)、RNA依賴的RNA聚合酶(RNA-dependentRNApolymerase,RDRP)以及Argonaute蛋白(AGO)等都是小分子RNA生物合成路徑的重要成員。1.1mirna的形成miRNA是第一類被發(fā)現(xiàn)并具有重要功能的內(nèi)源單鏈小分子RNA,其長度為20~23核苷酸。每種植物中有上百個編碼miRNA的基因(不同物種中的具體數(shù)目不一樣),它們分別在不同的細胞和植物的不同發(fā)育階段表達。miRNA基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄后形成miRNA的轉(zhuǎn)錄本(pri-miRNA),然后在HYL1(hyponasticleaves1)、DCL1和SE(serrate)的相互作用下形成miRNA前體(miRNAprecursor或premiRNA)。Pre-miRNA能夠形成具有莖環(huán)特征的二級結(jié)構(gòu)。miRNA則位于莖環(huán)結(jié)構(gòu)的莖上。一般來講,pre-miRNA被DCL1切割形成miRNA/miRNA*寡核苷酸二聚體。這些二聚體經(jīng)甲基轉(zhuǎn)移酶HEN1(HUAenhancer1)對其3′末端堿基進行甲基化修飾后成為成熟miRNA。然后成熟的單鏈miRNA被組裝到含有AGO蛋白的RISC(RNAinducedsilencingcomplex)中。而miRNA*則被逐步降解。miRNA在RISC的引導下通過切割靶基因轉(zhuǎn)錄本或抑制其翻譯來行使基因沉默的功能。1.2ta-sirna靶基因的結(jié)構(gòu)siRNA是一類由長的雙鏈RNA(doublestrandRNA,dsRNA)產(chǎn)生的小分子RNA?;蚪M上的許多位點都可以產(chǎn)生siRNA。在植物中,內(nèi)源siRNA可以直接來源于轉(zhuǎn)錄本、轉(zhuǎn)基因的反向重復序列以及轉(zhuǎn)座子等。到目前為止,3類siRNA的生物合成已比較清楚。第1類叫做nat-siRNA,它們產(chǎn)生于同一基因組位點上序列部分重疊的雙向轉(zhuǎn)錄本,其生物合成需要RDR6及1個或2個DCL蛋白的參與。目前研究最清楚的2個nat-siRNA分別產(chǎn)生于生物脅迫和非生物脅迫條件下,通過下調(diào)參與產(chǎn)生nat-siRNA的2個基因中的1個基因的表達來實現(xiàn)其功能。第2類siRNA叫做ta-siRNA,它是1類反式作用的內(nèi)源siRNA。ta-siRNA調(diào)控的靶基因序列和產(chǎn)生ta-siRNA的序列分別位于基因組的不同位點。在擬南芥中,TAS(ta-siRNA)家族的4個基因(TAS1~4)自身都是miRNA的靶基因,其轉(zhuǎn)錄本在特定位點被相應的miRISC剪切,切割的片段被SGS3穩(wěn)定后,在RDR6的作用下合成dsRNA,再由DCL4將dsRNA切割成21nt長的ta-siRNA,最后ta-siRNA在AGO1或AGO7的參與下行使其功能。已報道的ta-siRNA靶基因包括生長素應答因子ARF3(auxinresponsefactor3)和ARF4。第3類siRNA為hcRNA,它們大多數(shù)產(chǎn)生于基因組中的轉(zhuǎn)座子、反轉(zhuǎn)錄元件以及重復序列轉(zhuǎn)錄來的dsRNA前體,并傾向于分布在被甲基化修飾的基因組區(qū)域。在生物合成時,首先在RDR2的作用下形成dsRNA,然后由DCL3將其剪切、HEN1對剪切產(chǎn)物進行甲基化修飾,最終形成長度為24nt的成熟siRNA,接著siRNA與AGO4或AGO6結(jié)合,形成AGO-siRNA復合體,在DRD1(defectiveinRNA-directedDNAmethylation1)和聚合酶Ⅳb(polymeraseⅣb)的協(xié)作下,由甲基轉(zhuǎn)移酶DRM2(domainrearrangedmethyltransferase)在相應的基因組位點上進行胞嘧啶(cytosine,C)或組蛋白H3第9位賴氨酸的甲基化[31,54,55,56,57,58,59]。其它類型的小分子RNA,如在哺乳動物中由于與piwi蛋白互作而得名的長度為25~31nt的piRNA(piwi-interactingRNA),在植物中尚未有報道[31,60,61,62,63,64]。2小分子rna的測序結(jié)果利用高通量測序技術(shù)進行植物小分子RNA研究的最早發(fā)現(xiàn)是小分子RNA數(shù)量巨大和種類繁多。起初人們認為這些非miRNA的小分子RNA可能來自目標基因的隨機斷片。但大量siRNA的反復出現(xiàn)及其在基因組上廣泛而規(guī)律性的分布逐漸使人們意識到它們可能是由細胞內(nèi)特定的機制所產(chǎn)生的。現(xiàn)在,人們已經(jīng)知道植物小分子RNA直接參與染色體修飾和基因表達調(diào)控。2005年,Meyers實驗室第1次應用大規(guī)模平行測序技術(shù)(MPSS)對4個擬南芥小分子RNA文庫進行了測序。對2.21×106條長度7~11nt的序列標簽進行分析之后,結(jié)果令人吃驚地發(fā)現(xiàn)有1/2以上的擬南芥小分子RNA來自于基因組的重復序列或基因間的非編碼序列,尤其是那些原來認為沒有任何轉(zhuǎn)錄特征的區(qū)域居然也有大量的小分子RNA產(chǎn)生。這一結(jié)果恰好解釋了在以前研究中所觀察到的現(xiàn)象,即:染色體上富含轉(zhuǎn)座子的異染色質(zhì)區(qū)的甲基化和乙?;csiRNA經(jīng)常同時出現(xiàn),說明植物染色體的DNA甲基化或組蛋白乙?;揎椧蕾囉谛》肿覴NA的介導作用。Sunkar等也系統(tǒng)分析了擬南芥基因組上產(chǎn)生siRNA位點的甲基化和乙酰化的情況,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)產(chǎn)生siRNA的位點與該位點DNA或組氨酸的甲基化和乙?;潭染o密相關(guān),尤其是重復序列富集的異染色質(zhì)區(qū)域。這一研究結(jié)果后來在擬南芥的相關(guān)研究中也得到了進一步證實。最近,Tanurdzic等綜合基因芯片、染色體重疊芯片、甲基化、乙?;旧|(zhì)免疫沉淀DNA芯片分析及小分子RNA測序等多種高通量技術(shù),研究了擬南芥第4染色體在野生型和懸浮細胞中染色質(zhì)的表觀遺傳學修飾的變化情況。結(jié)果表明,在懸浮細胞的形成過程中,染色質(zhì)上基因編碼區(qū)和啟動子區(qū)的甲基化程度增加,而大部分富含重復序列和轉(zhuǎn)座子的異染色質(zhì)區(qū)甲基化程度下降,同時伴有部分轉(zhuǎn)座子的激活表達。從小分子RNA角度來看,轉(zhuǎn)錄激活的轉(zhuǎn)座子位置上長度21nt小分子RNA的數(shù)量大大增加。由于長度24nt小分子RNA的絕對數(shù)量并未變化,作者推測長度21nt小分子RNA的數(shù)量增加可能與上述部位甲基化程度下降有關(guān),進而導致轉(zhuǎn)座子的激活??傊?迄今為止的研究表明,小分子RNA隨著許多生物學過程的變化而發(fā)生變化,但對其工作的機理卻仍然知之甚少。規(guī)?;》肿覴NA的克隆和測序分析將為全面、深入研究植物小分子RNA的生物學功能提供最基本的素材。3小分子rna在細胞發(fā)育中的作用通過建立基因的表達模式來幫助確定其功能是現(xiàn)代分子生物學研究的常用方法。已有研究表明,與蛋白編碼基因一樣,植物在不同發(fā)育階段、不同組織和應答不同環(huán)境脅迫條件時均有不同的小分子RNA群體在起作用,因而表現(xiàn)出不同的小分子RNA組成及其表達模式。因此,利用高通量測序技術(shù)對特定發(fā)育階段或特定脅迫處理的植物材料進行全面地小分子RNA表達分析,對發(fā)現(xiàn)參與上述過程的重要小分子RNA是非常有效的方法。在單子葉植物如小麥中,Yao等用454-FLX測序法大規(guī)模測序分析了1個由小麥葉片、根和果穗等組織組成的混合小分子RNA文庫(表)。通過對超過2.6×104個小分子RNA序列進行分析,得到58個小麥miRNA基因,包括35個種間保守的miRNA和23個小麥特有的miRNA。Northern分析表明小麥miR512和miR513分別在小麥的幼穗和根中特異表達,說明它們可能特異參與了小麥幼穗和根的發(fā)育。另外作者還發(fā)現(xiàn)了4個單子葉植物特有的miRNA:miR506、miR510、miR514和miR516,表明這些小分子RNA可能參與了單子葉植物特有的發(fā)育過程。同樣,為了分離參與水稻不同組織發(fā)育過程特有的小分子RNA,Nobuta等用MPSS方法分別測序分析了來自水稻花序、莖稈和幼苗3個組織的小分子RNA。對3個文庫的比較分析表明,幼葉和莖稈中的小分子RNA在基因組上的分布規(guī)律很相似,而它們與花序中小分子RNA在基因組上的分布情況存在較大差異,說明在營養(yǎng)生長和生殖生長2個特定階段有不同的小分子RNA群體發(fā)揮作用。這一結(jié)果與本實驗室在短柄草中的研究結(jié)果類似,即在短柄草營養(yǎng)生長和生殖生長2個階段數(shù)百萬的小分子RNA群體中,只有極少部分相同,說明植物不同器官的生長發(fā)育有著不同的小分子RNA參與。在雙子葉植物中,Moxon等利用454-FLX法分析了番茄葉片和果實中的小分子RNA表達情況。結(jié)果表明,番茄miR390和miR1917在果實中的表達量遠高于在葉片中,而且miR1917的靶基因LeCTR1在番茄成熟過程中應答乙烯時表達量顯著下調(diào),因此認為這2個miRNA可能參與了番茄果實的發(fā)育過程。miRNA的表達情況隨著各種生物和非生物脅迫的發(fā)生而發(fā)生變化。如Sunkar等為了獲得水稻應答鹽和干旱脅迫相關(guān)的小分子RNA,采用454-FLX法對來自鹽和干旱處理條件下生長四周的水稻幼苗的小分子RNA進行了深度測序。在所獲得的3.3×105個小分子RNA序列中,作者不僅發(fā)現(xiàn)了已知的46個水稻miRNA家族,同時還獲得了23個新的低拷貝miRNA和40個候選miRNA。對這些特定處理條件下獲得的miRNA的進一步研究,有望揭示小分子RNA在植物組織發(fā)育和應答環(huán)境脅迫中的作用,為徹底認識植物抗寒抗鹽的分子機理提供重要的線索。又如Subramanian等對經(jīng)慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)侵染3h后的大豆根的小分子RNA文庫進行測序分析之后,獲得了3.5×105個小分子RNA序列。他們發(fā)現(xiàn)的小分子RNA涵蓋了50%以上的大豆miRNA,其中miR159在慢生根瘤菌侵染大豆3h后表達量急劇上升,表明它可能參與了大豆對該菌侵染過程的應答。楊樹是目前植物中第3個具有全基因組序列的物種。早在2005年,Lu等就用傳統(tǒng)的Sanger測序法系統(tǒng)分析了楊樹在木質(zhì)部發(fā)育過程中的小分子RNA情況。鑒定出10個與楊樹應答機械脅迫有關(guān)并且是木質(zhì)莖稈所特有的小分子RNA。在這些小分子RNA中,有些在楊樹受到拉伸和壓縮時表達量下降,如miR156、miR162、miR164、miR475、miR480和miR481。而miR408的表達量則在楊樹受到上述脅迫時表現(xiàn)為上調(diào)。另外,miR159、miR476和miR479特異響應楊樹的壓縮脅迫。有關(guān)木質(zhì)部特異表達和機械應答miRNA的研究,為人們從小分子RNA的角度解釋楊樹應答機械脅迫的現(xiàn)象提供了重要依據(jù)。同時,利用高通量測序的方法,比較分析野生型植物和小分子RNA合成途徑中的一些重要基因突變體中小分子RNA的表達差異是研究這些基因影響小分子RNA組成的有效手段。Lu等用MPSS和454-FLX方法分別對野生型擬南芥和rdr2突變體中的小分子RNA進行測序分析之后發(fā)現(xiàn):在rdr2突變體中,ta-siRNAs和部分長度21nt的miRNA大量富集,而那些長度為24nt、來源于基因組上異染色質(zhì)區(qū)的siRNAs的數(shù)量顯著降低,說明RDR2在內(nèi)源24nt長siRNA的生物合成中發(fā)揮重要作用。在玉米中,Nobuta等利用Solexa測序技術(shù)比較分析了野生型玉米和mop1(mediatorofparamutation1,擬南芥rdr2的同源基因)突變體的小分子RNA情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),mop1中長度24nt的siRNA顯著減少,而miRNA和ta-siRNA明顯富集。另外,在玉米mop1突變體中出現(xiàn)了大量長度22nt的siRNA。這種現(xiàn)象在擬南芥rdr2突變體中則沒有發(fā)現(xiàn),說明在擬南芥和玉米小分子RNA的合成過程中,RDR2的功能有所不同。正如組織特異表達的蛋白編碼基因一樣,組織或發(fā)育階段特異表達小分子RNA可能預示著它們在植物的重要生物過程中起著舉足輕重的作用,因此對小分子RNA表達譜的分析將會大大促進相關(guān)基因功能的研究。4擬南東南角的mirna基因家族在種子測序中的表達miRNA作為基因組中一類數(shù)目眾多的重要負調(diào)控因子,它們的出現(xiàn)是自然選擇的結(jié)果,其進化過程在遵循類似蛋白編碼基因共同規(guī)律的同時,又遵循作為非編碼RNA基因的特有規(guī)律。目標基因反向復制機制(invertedduplication)是目前大家比較傾向的一種miRNA起源機制:即1個蛋白編碼基因通過反向重復過程形成“頭對頭”或“尾對尾”部分或完全重疊的反向重復結(jié)構(gòu),這一結(jié)構(gòu)可能被同一個啟動子或不同啟動子所啟動轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并作為DCL蛋白的底物從而產(chǎn)生miRNA,使得原來那個蛋白編碼基因成為這個miRNA的靶基因。而所產(chǎn)生miRNA的多樣性則來源于所形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)的不同和DCL蛋白的識別差異。Fahlgren和Allen等利用454-FLX方法對野生型擬南芥和dcl1-7、dcl2-1、dcl3-1、dcl4-2、rdr1-1、rdr2-1、rdr6-15這7個擬南芥小分子RNA生物合成所需基因突變體的花序、野生型擬南芥和rdr6-15的幼苗以及經(jīng)植物病原細菌(P.syringaepv.tomato)侵染和未經(jīng)其侵染的擬南芥葉片為材料的共12個小分子RNA文庫進行測序分析,發(fā)現(xiàn)了16個新的miRNA。同時,作者還發(fā)現(xiàn)這些新miRNA和miRNA*以及它們的側(cè)翼序列與某些蛋白編碼基因序列具有高度的同源性。更有趣的是,其中7個miRNA的靶基因就是與其同源的蛋白編碼基因,而另外9個miRNA的靶基因則是其它基因。因此研究認為,有些新的miRNA來源于與其互作的靶基因家族的轉(zhuǎn)錄本,而另外一些則來源于與其沒有互作關(guān)系的基因家族轉(zhuǎn)錄本。這一研究結(jié)果為植物miRNA起源的目標基因反向復制假說提供了有力證據(jù),同時也說明miRNA基因的進化正經(jīng)歷著頻繁的“誕生和死亡”(birthanddeath)過程,而在這一過程中,只有一部分miRNA基因能夠最終穩(wěn)定整合于基因組復雜的調(diào)控系統(tǒng)中。物種特異的miRNA或其在特定物種中拷貝數(shù)的擴增,表明這些小分子RNA在物種進化或應對環(huán)境脅迫過程中起著重要作用。植物miRNA的進化過程頻繁而快速。高通量測序技術(shù)的出現(xiàn)尤其加速了擬南芥中低拷貝和新型miRNA的克隆,不斷有拷貝數(shù)極低的miRNA被發(fā)現(xiàn)。有意思的是,在這些小分子RNA中有些衍生成員仍始終保持著較低的表達量,而另外一些的表達量則顯著增加。這暗示著這些衍生的miRNA在功能上已逐漸發(fā)生了分化。2007年,Barakat等用454-FLX法分別對楊樹葉片和花蕾2個組織中的小分子RNA進行了測序分析。對楊樹、擬南芥和水稻中的miRNA的系統(tǒng)比較分析發(fā)現(xiàn),90%以上的擬南芥miRNA在楊樹小分子RNA文庫中沒有出現(xiàn)。同樣,33個水稻miRNA家族在擬南芥或楊樹的miRNA中也找不到對應的成員,表明楊樹中新發(fā)現(xiàn)的miRNA大多數(shù)可能是楊樹特有的。楊樹特有的miRNA可能與楊樹基因組經(jīng)歷了多次復制有關(guān)。在這些過程中,楊樹miRNA拷貝數(shù)的顯著增加為不同家族成員的功能演化提供了前提條件,使楊樹能更好地適應環(huán)境變化,為其成為地球上比較成功的樹種之一做出貢獻。5mirna的發(fā)現(xiàn)和演化非編碼RNA的核酸本質(zhì)決定了它們具有與蛋白質(zhì)調(diào)控因子完全不同的調(diào)控模式。單鏈RNA與其同源RNA或DNA的互補性以及它們在基因組中與鄰近基因的相對位置等,都可以影響其基因的調(diào)控模式。前人的研究結(jié)果表明,基因組中位置重疊的兩個基因可能被小分子RNA調(diào)控,叫做順式自然反義轉(zhuǎn)錄本(cis-NATs,cis-naturalantisensetranscripts)。在擬南芥中,當兩個重疊基因同時轉(zhuǎn)錄時,重疊部分可形成雙鏈RNA(dsRNA),進而形成小分子RNA。這些由蛋白質(zhì)編碼基因即cis-NATs的外顯子區(qū)域形成的siRNA叫做nat-siRNA。它們一般用于調(diào)控形成cis-NATs的2個基因中的1個基因。參與cis-NATs形成的2個基因的時空表達組合與隨之產(chǎn)生的nat-siRNA形成“三重調(diào)控(tripleregulation)”模式。這一模式使NAT基因的調(diào)控機制變得異常精巧。nat-siRNA的功能在擬南芥中首先被發(fā)現(xiàn),并的確參與了擬南芥的生物學過程。但以往發(fā)現(xiàn)的cis-NATs多由蛋白質(zhì)編碼基因組成。2008年,Lu等用MPSS方法對水稻日本晴未成熟花序、莖稈等6個小分子RNA文庫進行測序分析后,發(fā)現(xiàn)miRNA也可以作為cis-NATs的成員,形成所謂的nat-miRNA。nat-miRNA位于與其靶基因重疊位點的反義鏈。與一般miRNA的區(qū)別在于:一方面在它們的基因序列中都存在內(nèi)含子,因此莖環(huán)結(jié)構(gòu)(pre-miRNA)須在內(nèi)含子被剪輯后方能形成,然后經(jīng)DCL1切割形成成熟miRNA;另一方面,nat-miRNA的前體與所調(diào)控的基因(都是MADS-box基因)在序列上有長約65nt的重疊,而成熟miRNA恰
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 出租充氣皮艇合同范本
- 幾人共同購房合同范本
- 電纜外貿(mào)合同范本
- 包裝合同范本8篇
- 公司合同范本梳理審核
- 倉庫流轉(zhuǎn)合同范本
- 單位集資建房轉(zhuǎn)讓合同范本
- 勞防用品采購合同范本
- 出售立軸制砂機合同范本
- 出售玻璃蓋板合同范本
- 幼兒系列故事繪本課件達芬奇想飛-
- 連鎖藥店運營管理
- (中職)中職生禮儀實用教材完整版PPT最全教程課件整套教程電子講義(最新)
- 出納收入支出日記賬Excel模板
- 給水排水用格柵除污機通用技術(shù)條件
- DBJ61_T 179-2021 房屋建筑與市政基礎設施工程專業(yè)人員配備標準
- 渝價〔2013〕430號
- 一年級下冊綜合實踐活動課件-身邊的水果和蔬菜全國通用16張
- 市政工程主要施工機械設備
- 書香里的童年
- 三周滾動進度計劃
評論
0/150
提交評論