分子分型在醫(yī)院感染控制中的作用the Role of Molecular

分子分型在醫(yī)院感染控制中的作用

（theRoleofMolecularTypingin

NosocomialInfectionControl）瑞金醫(yī)院臨床微生物科瑞金醫(yī)院醫(yī)院感染辦公室楊莉1分子分型（分子流行病學(xué)研究）從核酸分子水平上分析醫(yī)院感染的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及機(jī)理，更加準(zhǔn)確有效地進(jìn)行醫(yī)院感染管理控制，已成為當(dāng)前國際醫(yī)院感染管理研究中的重要方向。從患者分離株到病區(qū)周圍環(huán)境株的比較分析；從外源性感染到內(nèi)源性感染從某一醫(yī)院的醫(yī)院感染暴發(fā)到大范圍甚至世界范圍的感染菌株流行變遷；基因多態(tài)性分析技術(shù)已成為醫(yī)院感染監(jiān)測控制的高水平研究領(lǐng)域。2微生物室在醫(yī)院感染中的作用accuratelyidentifyingnosocomialpathogensdetectingunexpectedantimicrobial-drugresistanceepidemiologictypingPfallerMAetal.Theclinicalmicrobiologylaboratoryandinfectioncontrol:emergingpathogens,antimicrobialresistance,andnewtechnology.ClinInfectDis1997;25:858-70.鑒定特殊耐藥菌的檢出流行病學(xué)分型3PFGE(脈沖場凝膠電泳)RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性)REA(限制性酶切)ribotyping(核糖體分型)分子分型基因分型分子流行病學(xué)研究41、脈沖場凝膠電泳(PFGE)制備瓊脂糖栓塊消化酶切脈沖電泳結(jié)果解釋5消化、釋放出DNAPFGE原理6Enzyme酶切PFGE原理約5～20個(gè)、長度10～800kb的大片段DNA7TenoverFC.etal.JClinMicrobiol,1995;33(9):2233～2239

8脈沖電泳PFGE原理9原理：DNA常規(guī)凝膠電泳脈沖場凝膠電泳10時(shí)間消耗從分離菌株到出結(jié)果平均2.5天標(biāo)本準(zhǔn)備、細(xì)胞裂解－－第一天酶切－－第二天染色、拍照－－第三天PFGE原理染色、拍照1112PFGE結(jié)果判讀目測法：按美國疾病控制和預(yù)防中心(CDC)Tenover等人推薦的方法判讀。圖譜完全相同的定為一個(gè)型，彼此之間相差一個(gè)帶的定為同一型的不同亞型，相差2－3個(gè)帶的認(rèn)為親緣關(guān)系密切，相差4－6個(gè)帶的認(rèn)為可能相關(guān)，條帶相差7個(gè)以上的認(rèn)為無親緣關(guān)系。并隨機(jī)地選擇不同的字母如A、B、C、D等的字母順序分型。聚類分析計(jì)算機(jī)輸入SPSS，做樹狀圖13PFGE同源性分析14PFGE特點(diǎn)：DNA原位提取法，減少了斷裂利用細(xì)菌全基因組信息細(xì)菌分型金標(biāo)準(zhǔn)152、RAPD（隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性）1990年Williams：RAPDWelsh：AP-PCR本質(zhì)上相同引物：“短”、“單一”和“非特異性”，一般9～10bp

擴(kuò)增條件：“非嚴(yán)格性”

退火溫度一般較低,25～35℃

16ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

17ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

18ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

19分子分型在醫(yī)院感染控制中的作用20SpecialIssue

NewTechnologyforDetectingMultidrug-ResistantPathogensintheClinicalMicrobiologyLaboratoryLanceR.Peterson*?andGaryA.Noskin*?

*NorthwesternMemorialHospitaland?NorthwesternUniversityMedicalSchool,Chicago,Illinois,USAEID,2001,7:30621NorthwesternMemorialHospital,Chicago700-bed,university-affiliatedmedicalcenter出院：>39,000/年急診：56,000例/年門診量：260,000/年

22分型確認(rèn)后及干預(yù)效果P=0.002LRPetersonetal,EID,2001,7:3065.7923指標(biāo)thetotalnumberofnosocomialinfectionsper1,000patientdays每千住院日醫(yī)院感染數(shù)thenumberofpatientswithnosocomialinfectionsper100patientdischarges每100出院病人醫(yī)院感染病人數(shù)(percentageofpatientswithnosocomialinfection)（醫(yī)院感染病人百分比）24感染控制工作小組成員：Weformedapermanent,integratedinfectioncontrolandpreventionprogramthatfullyincorporatesHacekDMetal.AmJClinPathol1999;111:647-54.infectioncontrolpersonnel,infectiousdiseasepersonnel,pharmacypersonnel,clinicalmicrobiologypersonnelintoasingleworkinggrouptominimizehospitalinfections.感染控制感染性疾病藥學(xué)臨床微生物25資料收集方法（Methodsfordatacollection）：reviewofmicrobiologyreportsreviewofpatients'medicalrecords,directobservationofmedicalandnursingpractice,activesurveillanceofrectalculturesofpatientsinnursingunitsforhigh-riskpatients,evaluationofsuspectednosocomialinfectionsreportedbyhealth-careproviders.查閱微生物報(bào)告查閱病史記錄對醫(yī)護(hù)人員操作的直接觀察高危病人直腸培養(yǎng)的動(dòng)態(tài)連續(xù)觀察對上報(bào)的可疑醫(yī)院感染的評估鑒定由三位專職感染控制人員對資料進(jìn)行匯總分析，并制定出相應(yīng)控制措施，并在醫(yī)院感染控制和預(yù)防部門主管的指導(dǎo)下實(shí)施。26Twointerventions：amoleculartypinglaboratoryaweeklyplanningmeetinginfectioncontroldiagnosticmedicalmicrobiology(molecularepidemiology)Pharmacyandinfectiousdiseases兩個(gè)主要的干預(yù)措施：分子分型周會(huì)包括以下方面的代表：感染控制微生物診斷（分子流行病學(xué)）藥學(xué)感染性疾病27周會(huì)內(nèi)容：醫(yī)院感染動(dòng)向（短期、長期）感染控制專職人員和微生物實(shí)驗(yàn)室的工作決定需要做的調(diào)整需分型的病原體與主管討論決定weeklymeetings：theongoingshort-andlong-termtrendsinnosocomialinfectionswithinthecenteractivitiesoftheinfectioncontrolprofessionalsandmicrobiologylaboratorypersonnel;anyneededchangesweredetermined.Theorganizationalstructureforselectingmicrobesfortypingwassharedbythemedicaldirectorsofinfectioncontrolandclinicalmicrobiology28需基因分型的微生物：routinelygenomicallytyped：VREPeriodicroutinetyping：fluoroquinolone-resistantP.aeruginosa,methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA),

Enterobactercloacae,

Clostridiumdifficile

Additionalorganismsfortyping：selectedthroughsurveillanceofmicrobiologyculturereportsdiscussedattheweeklymeeting.常規(guī)基因分型：VRE周期性分型：氟喹諾酮耐藥的銅綠MRSA陰溝腸桿菌難辨梭菌其他：根據(jù)微生物報(bào)告并在周會(huì)上討論后決定需基因分型的病原體

任何時(shí)候工作小組要求進(jìn)行基因分型，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室即將菌株提供給分子分型部門并執(zhí)行29實(shí)驗(yàn)方法REAanalysisrestrictionofgenomicDNAwithconventionalelectrophoresisDNA限制性酶切30基因分型相關(guān)費(fèi)用thecostofequipment,remodeling,reagentandothersupplies,salariesandbenefitsforthreete