腎康注射液對高血壓腎病大鼠腎臟的影響

腎康注射液對高血壓腎病大鼠腎臟的影響

高血壓的發(fā)生與腎臟密切相關(guān)。腎臟既是血壓調(diào)節(jié)的重要器官,同時也是高血壓損害的主要靶器官之一。一方面,腎臟通過改變對水鈉代謝的調(diào)節(jié)以及分泌加壓和降壓物質(zhì),從多方面影響血壓;另一方面,高血壓也可造成腎臟功能受損,若高血壓一旦對腎臟造成損害,又可以因腎臟對體液平衡調(diào)節(jié)以及血管活性物質(zhì)等代謝障礙,加劇高血壓的嚴(yán)重程度,最終導(dǎo)致腎功能不全［１－２］。腎康注射液的組方藥材為大黃、丹參、黃芪、紅花,是具有降逆泄?jié)?、益氣活血作用的中藥?fù)方制劑。目前的藥理實驗研究表明,腎康注射液具有顯著降低5/6腎切除大鼠的血壓、尿蛋白的排泄、高血脂及改善腎功能的作用［３］,可降低慢性腎衰患者尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、內(nèi)皮素(ET)、24h尿蛋白,提高一氧化氮(NO)水平,改善臨床癥狀,延緩慢性腎衰的進展［４］。此外,文獻報道,腎康注射液在慢性阻塞性肺疾病緩解期使用可以顯著改善患者肺功能,提高患者生活質(zhì)量［５］?；谝陨涎芯勘尘?本實驗主要研究腎康注射液對高血壓腎病大鼠腎功能的影響。1儀器、動物和動物1.1儀器低速離心機(GENIUS5K-R,長沙鑫奧儀器儀表有限公司);高速勻漿器(IKA-T10,德國IKA集團);電子天平(AY120,日本島津SHIMAD-ZU)。全自動生化分析儀(7600,日本HITACHI),測定腎功能所用試劑盒購買于南京建成生物研究所。1.3動物30周齡SPF級雄性SHR大鼠;同周齡WKY大鼠10只。所有大鼠均購于上海斯萊克實驗動物有限公司,動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(滬)2007-0005。動物常規(guī)飼養(yǎng),保持室溫20~25℃,12h光照與黑暗交替(光照8∶00~20∶00),自由飲水和攝食。飼養(yǎng)1周后,測定SHR大鼠尿微量白蛋白的含量,達到腎損傷標(biāo)準(zhǔn)20~200mg·L－１［６］即為高血壓腎病模型大鼠。2尿蛋白的檢測2.1分組與給藥方法將32只高血壓腎病模型大鼠隨機分為4組:模型對照組(即SHR組)、陽性對照組、腎康注射液大劑量組、腎康注射液小劑量組;WKY大鼠作為陰性對照組。陽性對照組腹腔注射給予福辛普利鈉1.6mg·kg－１,腎康注射液大小劑量組腹腔分別注射給予腎康注射液,相當(dāng)于生藥劑量為4,2g·kg－１,陰性對照組和模型組腹腔分別注射等體積生理鹽水,1d1次,連續(xù)給藥30d。2.224h尿蛋白與尿β２微球蛋白的定量測定第0,2,4周將大鼠分別單獨放入金屬代謝籠,收集24h尿液并記錄尿量。留尿期間禁食,不禁水。尿液部分送于西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科檢測尿蛋白,剩余部分用尿β２微球蛋白試劑盒(免疫酶聯(lián)法)測定尿β２-MG含量。2.3腎功能5項的測定腎功能:腹主動脈抽血1mL迅速注入干燥離心管,4℃過夜,3000r·min－１離心15min,分離上清液,用自動生化分析儀測定腎功能5項即血漿中血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、C胱抑素(CYS)和尿酸(UA)的含量。2.4炎癥因子白介素-6、白介素-1β的檢測取液氮凍存的腎臟皮質(zhì)0.5g,加入生理鹽水,在冰浴中用組織勻漿器制成10%勻漿,以3000r·min－１4℃離心15min,分別用IL-6、IL-1β試劑盒(免疫酶聯(lián)法)檢測IL-6和IL-1β。2.5對高血壓腎損害大鼠腎質(zhì)量/體質(zhì)量的影響腎質(zhì)量/體質(zhì)量比:稱量體質(zhì)量后打開腹腔取出右側(cè)腎臟,以預(yù)冷的Hanks液充分灌洗,濾紙吸干稱量腎臟質(zhì)量。計算腎臟質(zhì)量與體質(zhì)量的比值(g/100g體質(zhì)量)。2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)以ue0af±s表示。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,其中尿蛋白的數(shù)據(jù)處理采用重復(fù)測量設(shè)計的方差分析,均數(shù)間多重比較用LSD法;腎功能、炎癥因子及其他指標(biāo)采用單因素方差分析進行比較,結(jié)果均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3腎康注射液對大鼠尿蛋白、腎炎癥因子及腎質(zhì)量比的影響3.1腎康注射液對大鼠24h尿蛋白的影響給藥前測定各組尿微量白蛋白含量,各高血壓大鼠尿微量白蛋白均在20~200mg·L－１,達到高血壓腎損害標(biāo)準(zhǔn);測定24h尿蛋白質(zhì)量濃度及24h尿蛋白量。結(jié)果表明,模型對照組、腎康注射液組、陽性對照組的24h尿蛋白質(zhì)量濃度均明顯高于陰性對照組(P<0.05),而其各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)過30d治療后,陽性對照組、腎康注射液小劑量組和大劑量組的尿蛋白質(zhì)量濃度均明顯低于模型對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),各組尿蛋白含量與模型組差異顯著(P<0.01),說明腎康注射液可以降低大鼠24h尿蛋白量。見表1。3.2腎康注射液對大鼠腎功能的影響與模型對照組比較,陽性對照組、腎康注射液小劑量組和大劑量組的尿酸(UA)、BUN、SCr含量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中模型對照組的UA顯著高于其他各組;BUN的含量高于陰性對照組,但各組間差異不明顯;模型組的SCr含量高于其他組,而對GLU和CYS的影響不明顯。見表2。3.3腎康注射液對腎臟炎癥因子的影響與模型對照組比較,腎康注射液可以降低大鼠腎臟中IL-6及IL-1β的含量,陽性對照組、腎康小劑量組和大劑量組的值都低于模型對照組,其中IL-1β的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而對尿液中β２-MG的影響不顯著。見表3。3.4腎康注射液對大鼠腎質(zhì)量/體質(zhì)量的影響各組大鼠腎臟臟器系數(shù)均明顯高于陰性對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。但模型組與實驗組差異不大。4腎康注射液治療高血壓腎病的作用機制原發(fā)性高血壓是嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病,它可以引起全身多個器官的功能損害。腎損害是原發(fā)性高血壓的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,兩者關(guān)系密切,互為因果,常形成惡性循環(huán)。原發(fā)性高血壓患者早期腎損害常因缺乏明顯臨床表現(xiàn)而難以被發(fā)現(xiàn)。目前,尿微量蛋白檢測已被公認(rèn)為診斷早期腎損害的靈敏指標(biāo)［７］,本實驗通過尿微量白蛋白的含量來判斷是否造成高血壓腎損害,在腎臟未嚴(yán)重?fù)p傷的情況下,可以更早地對大鼠腎臟的損傷情況進行治療,能更好地研究腎康注射液對大鼠高血壓腎病的作用。在臨床上,治療高血壓腎病,首先要選擇降低血壓的藥物,逐漸使血壓正常,避免腎損害的繼續(xù)發(fā)展。故選擇的藥物應(yīng)具有降壓和保腎雙重功能,故治療高血壓腎病常采用降壓藥和利尿藥等聯(lián)合用藥［８］。本實驗設(shè)計選擇福辛普利鈉作為陽性藥,因其為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑,可以起到一定的降壓作用,同時還具有一定的腎保護作用。腎康注射液可以降低高血壓腎病大鼠尿液中的蛋白量及尿蛋白質(zhì)量濃度,說明腎康注射液可以改變腎小球濾過功能,改善高血壓腎病大鼠對蛋白類物質(zhì)的代謝。腎康注射液對大鼠腎功能的影響主要體現(xiàn)在尿素氮和肌酐水平上,肌酐和尿素氮是衡量腎臟濾過能力的重要指標(biāo),其他幾個指標(biāo)未見明顯改善,由于腎康注射液屬于復(fù)方中藥,作用機制尚不太明確,可以通過后續(xù)的物質(zhì)基礎(chǔ)分析來研究產(chǎn)生如此結(jié)果的原因。實驗中測定了腎組織中的變化,數(shù)據(jù)表明降低大鼠腎臟中IL-6及IL-1β的含量,腎臟固有細(xì)胞在病理狀態(tài)下可以產(chǎn)生TNF-α、IL-1、IL-6、NO等多種炎癥因子,這些因子又通過自分泌和旁分泌的方式使炎癥效應(yīng)不斷擴大,引起炎癥級聯(lián)反應(yīng)。炎癥參與了整個疾病的發(fā)生、發(fā)展過程,但它不是孤立的,與其他機制一起加快腎病進展［９－１０］。腎康注射液對尿液中β２-MG的影響不顯著,尿液β２-MG也是高血壓早期腎損害的監(jiān)測指標(biāo)之一,β２-MG產(chǎn)生于淋巴細(xì)胞,其分子能自由通過腎小球濾過膜,如果β２-MG升高,則提示近端小管的重吸收功能受到了損傷［１１］,而在本實驗中該指標(biāo)未發(fā)生明顯變化,可能近端小管還未受到高血壓對其的損害作用。本實驗中腎康注射液對大鼠腎質(zhì)量和腎臟指數(shù)的影響不明顯,可能由于實驗是在腎損傷的早期進行的,在此階段內(nèi)大鼠的腎臟尚未發(fā)生明顯的病變和病理性改變。腎康注射液是一種中藥注射液,組方藥物為大黃、黃芪、丹參、紅花。研究表明,大黃具有促進尿素及肌酐排泄的作用,并具有抑制系膜細(xì)胞增殖的作用［１２－１４］,另外丹參是心血管疾病的常用中藥,可以緩解大鼠的腎衰竭,具有防止腎小球的硬化和保護腎功能的作用［１５］;紅花具有活血化瘀、抗血凝、調(diào)經(jīng)等功效［１６］。近代中藥藥理學(xué)研究表明:紅花具有使緊張度增高的動物離體血管擴張的作用,對于延緩腎臟病損傷具有明顯的作用［１７］。由于中藥成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜,腎康注射液的藥理作用機制有待進一步明確,根據(jù)中藥現(xiàn)代化的要求,我們下一步將采用