牛黃解毒片的綜合質量檢測（中藥制劑檢測課件）

牛黃解毒片的綜合質量檢測【實訓目的】1.能依據(jù)《中國藥典》對六味地黃丸進行全面檢驗。2.能判斷六味地黃丸的質量狀況，能正確填寫相關檢驗原始記錄及檢驗報告單?！緦嵱杻热荨浚ㄒ唬嵱栍闷?.儀器：高效液相色譜儀（紫外檢測器）、超聲波提取器、C18色譜柱、微量注射器（10μl）、電子天平、水浴鍋、分液漏斗、蒸發(fā)皿、乳缽、硅膠G薄層板、展開缸、古蔡法測砷裝置等。試劑：標準砷試液（lμgAs/ml）、碘化鉀試液、酸性氯化亞錫試液、醋酸鉛棉花、鋅粒、溴化滎試紙、正己烷、乙酸乙酯、甲醇、醋酸、1%香草醛硫酸、三氯甲烷、乙醇、10%硫酸乙醇、乙醚、石油醚、甲酸乙酯、甲酸丁酮、甲酸、甲醇（色譜純）、磷酸等。3.材料：牛黃解毒片、膽酸對照品、大黃對照藥材、黃芩苷對照品、大黃素對照品。（二）實訓方法牛黃解毒片由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草八味中藥制成的素片、糖衣片或薄膜衣片。本實訓依據(jù)《中國藥典》利用顯微鑒別方法觀察大黃、雄黃的顯微特征；利用冰片的升華特性進行鑒別；使用膽酸對照品、大黃對照藥材、大黃素對照品、黃芩苷對照品進行薄層色譜鑒別；牛黃解毒片中含有雄黃，主要成分As2S2，為保證制劑的安全性，要對制劑進行砷鹽檢。依據(jù)制劑通則中有關片劑項下的規(guī)定，進行重量差異、崩解時限等檢查；利用高效液相色譜法測定黃芩苷的含量。（三）實訓步驟1.查閱資料，設計方案查閱《中國藥典》正文566-567頁及相應附錄部分，設計檢驗方案。2.取樣按檢驗要求取樣，并記錄品名、批號、規(guī)格、數(shù)量、來源等內容。然后根據(jù)需要進行適宜處理。一般片劑成品取樣量200片，未成片前可取已制成的顆粒100g。3.性狀素片或除去包衣后的包衣片顯棕黃色；有冰片香氣，味微苦、辛。4.鑒別（1）顯微鑒別：取本品2~3片，刮去包衣，置乳缽中研細；或用刀片直接從藥片斷面刮取少量粉末，按粉末制片法裝片觀察，應有以下特征：草酸鈣簇晶大，直徑60~140μm（檢大黃）。不規(guī)則碎塊金黃色或橙黃色，有光澤（檢雄黃）。（2）冰片的升華鑒別：取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。（2）牡丹皮中丹皮酚的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品水蜜丸6g，研細；或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研。加乙醚40ml，回流1小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，即得。②對照品溶液的制備：取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1ml含lmg的溶液，即得。③薄層色譜：吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。④結果判斷：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍褐色斑點。5.常規(guī)檢查（1）水分：取六味地黃丸25g，破碎成碎片，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定，打開瓶蓋在100~105℃干燥5小時，將瓶蓋蓋好，移置于干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計算六味地黃丸中含水量（％），不得過12.0%（水蜜丸）或15.0%（小蜜丸或大蜜丸）。（2）重量差異：①大蜜丸：以本品1丸為1份，取供試品10份，分別稱定重量，再與標示重量相比較（9g），超出±6%的不得多于2份，并不得有1份超出±12%。②水蜜丸或小蜜丸：以本品10丸為1份，取10份，分別稱定重量，再與每份標示重量相比較，超出±6%不得多于2份，并不得有1份超出±12%。（3）裝量：取六味地黃丸5個完整包裝，除去外蓋和標簽，容器外壁用適宜的方法清潔并干燥，分別稱定重量，除去內容物，容器用適宜的溶劑洗凈并干燥，再分別稱定空容器的重量，求出每個容器內容物的裝量與平均裝量。平均裝量不得少于標示裝量，且每個容器裝量不得少于標示裝量的97%。如有1個容器裝量不符合規(guī)定，則另取3個復試，均應符合規(guī)定。（4）溶散時限：取六味地黃丸6丸，分別置于升降崩解儀吊籃的玻璃管中，加擋板，啟動崩解儀進行檢，應在1小時內全部溶散且通過篩網。如有1丸不能完全溶散，應另取6丸復試，均應符合規(guī)定。如果供試品黏附擋板，應另取6丸，不加擋板按上述方法檢，應符合規(guī)定。（5）微生物限度：按微生物限度檢法依法檢查，應符合下列規(guī)定：①細菌數(shù)：每lg不得過30000cfu。②霉菌和酵母菌數(shù)：每lg不得過100cfu。③大腸埃希菌：每lg不得檢出。④大腸菌群：每lg應小于100個。⑤霉變、長螨者以不合格論。6.含量測定按高效液相色譜法測定。（1）山茱萸1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）為流動相；檢測波長為236nm；柱溫40℃。理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應不低于4000

2）對照品溶液的制備：取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。（3）雄黃的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品2片，研細，加三氯甲烷10ml研細，濾過，濾液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解。②對照品溶液的制備：取膽酸對照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述二種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20：25：3：2）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈（365nm）下檢視。④結果判斷：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（4）大黃的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品1片，研細，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，放冷，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解。②對照品溶液的制備：取大黃對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述三種溶液各40，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。④結果判斷：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光主斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點，置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。（5）黃芩的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品4片，研細，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，棄去乙醚，濾渣揮盡乙醚，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml，加熱使溶解，滴加鹽酸調節(jié)pH至2~3，加乙酸乙酯30ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解。②對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。④結果判斷：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。5.檢查（1）砷鹽檢查：測試前，先于導氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為60~80mm）；再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面為宜），蓋上旋塞正并旋緊，即得。1）標準砷斑的制備：精密量取標準砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置25~40℃水浴中反應45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。2）供試品的制備：取本品適量（包衣片除去包衣），研細，精密稱取1.52g，加稀鹽酸20ml，時時攪拌1小時，濾過，殘渣用稀鹽酸洗滌2次，每次10ml，攪拌10分鐘。洗液與濾液合并，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2ml，加鹽酸5ml與水21ml，照標準砷斑的制備，自“再加化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。（2）重量差異檢查：按重量差異法操作，標示片重（或平均片重）在0.3g以下的片劑，重量差異限度為±7.5%，標示片重（或平均片重）在0.3g或0.3g以上的片劑，重量差異限度為±5%；超出重量差異限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度一倍。（3）崩解時限檢查：照崩解時限檢查法檢，藥材原粉片各片均應在30分鐘內全部崩解；浸膏（半浸膏）片、糖衣片各片均應在1小時內全部崩解。微生物限度檢查：按微生物限度檢查法依法檢，應符合下列規(guī)定：①細菌數(shù)：lg不得過30000cfu。②霉菌和酵母菌數(shù)：每lg不得過100cfu。③大腸菌群：每lg不超過100個。④大腸埃希菌、沙門菌不得檢出。6.黃芩苷的含量測定用高效液相色譜法測定。（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）為流動相；檢測波長為315nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于3000。（2）對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含30網的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品20片（包衣片除去包衣），精密稱定，研細，混勻，取6g，精密稱定，置錐形瓶中，加70%乙醇30ml，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）20分鐘，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得?！緦嵱栕⒁狻?.升華法鑒別時，樣品粉末一般為0.5g，過少不易產生足夠的升華物。2.砷鹽檢查時，反應溫度一般控制在25℃之間，時間為45分鐘。冬季氣溫低，可置溫水浴中進行反應。如反應太快，則宜適當降低反應溫度，使砷化氫氣體能被均勻吸收。制備標準砷斑或標準砷對照液，應與供試品檢查同時進行。因砷斑不穩(wěn)定，反應中應保持干燥及避光，并立即比較。標準砷溶液應于實訓當天配制，標準砷貯備液存放時間不宜超過一年。砷鹽檢查時，浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質量，對生成砷斑的色澤有影。必須選用質量較好、組織疏松的中速定量濾紙，以使所顯砷斑色調鮮明，梯度規(guī)律。不宜使用定性濾紙，否則所顯砷斑色暗，深淺梯度無規(guī)律；溴化汞試紙宜新鮮制備。砷鹽檢查時，《中國藥典》規(guī)定標準砷斑為2ml標準砷溶液（相當于2μg的砷）所形成的色斑。供試品規(guī)定含砷限量不同時，采用改變供試品取用量的方法來適應要求，而不采用改變標準砷溶液取量的方法。1.HPLC中常用的定量方法有幾種？外標法、內標法定量時有何優(yōu)缺點？2.砷鹽檢的原理是什么？加入KI、SnCl2、Pb(Ac)2棉花的作用是什么？【實訓思考】記錄實訓現(xiàn)象及檢驗結果，分析實訓現(xiàn)象并將檢驗結果與藥品標準相比較，判斷供試品是否符合規(guī)定?！緦嵱枅蟾妗俊緦嵱栐u價】考核內容