牛血清蛋白拉曼分析報(bào)告

PAGEPAGE1分析結(jié)果報(bào)告儀器LABRAMHR800型激光拉曼譜儀（法國(guó)JOBINYVON公司）。樣品牛血清白蛋白（Albuminbovine），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，上海寧波路52號(hào)，批號(hào)：F20041020。外觀為白色粉末。檢測(cè)方法直接將牛血清白蛋白樣品攝取微量置于蓋玻片上，聚集后直接測(cè)定。檢測(cè)參數(shù)激光波長(zhǎng)：514.5nm；激光出射功率：10毫瓦（照到樣品上約4毫瓦）；顯微物鏡：50倍長(zhǎng)焦距；光柵：600；狹縫（Hole）：200μm；積分時(shí)間：60秒；重復(fù)三次累加得譜。檢測(cè)國(guó)產(chǎn)牛血清白蛋白生物試劑的拉曼譜圖見(jiàn)圖3。根據(jù)圖譜可以得出牛血清白蛋白的構(gòu)象和部分氨基酸成分結(jié)構(gòu)。圖3國(guó)產(chǎn)牛血清白蛋白生物試劑的拉曼譜圖主鏈構(gòu)象在各種不同的物理?xiàng)l件下，蛋白質(zhì)可生成不同的構(gòu)象。蛋白質(zhì)主鏈的構(gòu)象主要由酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ的拉曼特征峰確定。酰胺Ⅰ拉曼特征峰位置為：α－螺旋結(jié)構(gòu)：1645－1660cm-1；β－折疊結(jié)構(gòu)：1665－1680cm-1；β－回轉(zhuǎn)結(jié)構(gòu)：1640-1645cm-1和1663－1678cm-1；無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)：1660－1670cm-1。酰胺Ⅲ的拉曼特征峰位置是：α－螺旋結(jié)構(gòu)：1265－1300cm-1；β－折疊結(jié)構(gòu)：1230－1240cm-1；β－回轉(zhuǎn)結(jié)構(gòu)：1305cm-1；無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)：1240－1260cm-1。本牛血清白蛋白生物試劑的酰胺Ⅰ拉曼特征峰在1655cm-1，很明顯是屬于α－螺旋結(jié)構(gòu)。從酰胺Ⅲ拉曼譜帶可以驗(yàn)證這個(gè)結(jié)論。牛血清白蛋白生物試劑的酰胺Ⅲ拉曼特征峰出現(xiàn)在1272cm-1。在酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ的拉曼譜帶區(qū)域中，都僅僅見(jiàn)到1655cm-1和1272cm-1，沒(méi)有別的峰出現(xiàn)，可見(jiàn)該牛血清白蛋白生物試劑主鏈構(gòu)象基本全為α－螺旋結(jié)構(gòu)。表征多肽鏈C－C骨架伸縮振動(dòng)的譜線應(yīng)出現(xiàn)在870～950cm-1之間。圖3中上述譜線對(duì)應(yīng)出現(xiàn)在898和940cm-1處，也出現(xiàn)在α－螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域，更加驗(yàn)證本牛血清白蛋白生物試劑的二級(jí)結(jié)構(gòu)基本全為α－螺旋結(jié)構(gòu)。CH2彎曲振動(dòng)的譜線出現(xiàn)在1448cm-1。側(cè)鏈構(gòu)象牛血清白蛋白的側(cè)鏈構(gòu)象主要由氨基酸及其微環(huán)境來(lái)表征。二硫鍵使蛋白質(zhì)分子更加穩(wěn)定，二硫鍵的對(duì)稱伸縮振動(dòng)頻率與二硫鏈C-C-S-S-C-C中碳原子的構(gòu)象有關(guān)。二硫鍵在500－550cm-1范圍內(nèi)有三種構(gòu)象，在510cm-1附近是扭曲－扭曲－扭曲（g―g―g）構(gòu)象，在525cm-1附近是反式－扭曲－扭曲（t―g―g）構(gòu)象，在540cm-1附近是反式－扭曲－反式（t―g―t）構(gòu)象。圖3僅見(jiàn)一明顯的506cm-1峰，可見(jiàn)牛血清白蛋白固體二硫鍵基本上都是扭曲－扭曲－扭曲（g―g―g）構(gòu)象。酪氨酸殘基在圖3中出現(xiàn)在827和852cm-1，這對(duì)雙峰是對(duì)構(gòu)象敏感的，它們的強(qiáng)度比與分子的微環(huán)境有關(guān)，即苯環(huán)上的OH基團(tuán)是與溶劑水分子生成氫鍵（暴露式）還是與蛋白質(zhì)分子其他殘基的－COOH基團(tuán)生成氫鍵（埋藏式）有關(guān)。該雙峰強(qiáng)度I852/I827的比值為10：7，通過(guò)公式計(jì)算出酪氨酸殘基處于暴露式。屬于色氨酸的吲哚環(huán)的拉曼譜線圖3中出現(xiàn)在1340cm-1，這條譜線對(duì)于環(huán)境和聚集狀態(tài)的改變是敏感的。由于該譜線呈較尖銳的突出峰，說(shuō)明色氨酸殘基此時(shí)處于埋藏式。表征苯丙氨酸殘基的特征譜帶在圖3中出現(xiàn)在621、1002、1031和1208cm-1，而且1002cm-1峰較高、較尖銳。碳－硫鍵（S-S）有兩種構(gòu)象，在630－670cm-1出現(xiàn)的譜線屬于扭曲構(gòu)象（