糖化血紅蛋白檢測標準化進程

糖化血紅蛋白檢測標準化進程糖化血紅蛋白檢測標準化進程會議匯報會議簡介舉辦方：上海臨床檢驗中心會議主題：糖化血紅蛋白標準化進程糖化血紅蛋白糖化血紅蛋白在糖尿病篩查、診斷、治療效果評價上，有優(yōu)越的特性和重要的意義，甚至可以稱為金標準。一、糖化血紅蛋白的形成GHb：顧名思義即糖基化的血紅蛋白。是葡萄糖分子和HbA某些特殊部位分子經(jīng)緩慢而不可逆的糖基化而形成的產(chǎn)物GHb包括HbA1和HbA0.糖基化：非酶促反應(yīng)將糖基加到蛋白質(zhì)氨基酸基團上，不可逆的。血紅蛋白有四個亞基，成人內(nèi)絕大多數(shù)為α2β2，這兩種亞基都可被糖基化。血紅蛋白血紅蛋白屬色蛋白,由血紅素與珠蛋白組成。珠蛋白含四條肽鏈。成人血中,珠蛋白肽鏈主要有四種即α、β、γ和δ,構(gòu)成三種血紅蛋白。其中主要是HbA(α_2β_2),HbA_2(α_2δ_2),HbF(α_2γ_2)。血紅蛋白Hb的蛋白質(zhì)部分叫珠蛋白，它是由兩對肽鏈組成的四聚體。每條肽鏈各結(jié)合一個血紅素，故每分子Hb均含有4條肽鏈和4個血紅素。HbA1c的形成過程葡萄糖與HbA的β鏈-N端的纈氨酸殘基發(fā)生氨基反應(yīng)，形成醛亞胺化物（前HbA1c），其性質(zhì)不穩(wěn)定。醛亞胺經(jīng)脫水，分子重新排列，通過酮氨基和葡萄糖連接，成為氨基酮化合物，其性質(zhì)穩(wěn)定，此反應(yīng)不可逆。葡萄糖+血紅蛋白

前HbA1c

穩(wěn)定HbA1c（醛亞胺）（氨基酮）Hemoglobin糖化反應(yīng)Hemoglobinβchain-NH2+glucose快速慢速＋HCOIHCOHIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHHCN-βchainIHCOHIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHCH2NH-βchainICOIHOCHIHCOHIHCOHICH2OHAldimine（Schiff堿)(LabileHbA1c)不穩(wěn)定型A1cKetoamine（酮胺化合物）(StableHbA1c)穩(wěn)定型A1cHbA1的組成HbA1:HbA的組成

HbA1：HbA1a，HbA1b，HbA1c。HbA1a：1.HbA1a1----β鏈-N端的纈氨酸殘基與1，6二磷酸果糖發(fā)生氨基反應(yīng)生成。2.HbA1a2----β鏈-N端的纈氨酸殘基與6磷酸葡萄糖發(fā)生氨基反應(yīng)生成HbA1b----β鏈-N端的纈氨酸殘基與丙酮酸發(fā)生氨基反應(yīng)生成HbA1c----β鏈-N端的纈氨酸殘基與葡萄糖發(fā)生氨基反應(yīng)生成HbA0----糖基化反應(yīng)發(fā)生在β鏈末端以外位點時，如發(fā)生在賴氨酸殘基或者α、γ和δ鏈。Hemoglobin

Hbstructureβ-N %HbA0α2β2- >90%HbA2α2δ2- 2.5%*HbFα2γ2- <1.0%*HbA1a1α2β2F-1.6-DP<1.0%HbA1a2α2β2G-6-DP<1.0%HbA1bα2β2?<1.0%HbA1cα2β2Glucose4-6%*HbA1dα2β2?-HbA1的形成過程總結(jié)葡萄糖分子和血紅蛋白A組分的β鏈-N端的纈氨酸殘基經(jīng)緩慢而不可逆的非酶促反應(yīng)所形成的產(chǎn)物稱為糖化血紅蛋白（HbA1c）。特點：HbA1c的多少與葡萄糖的含量高低呈正相關(guān)系,間接反映一段時間內(nèi)血糖濃度的改變,及機體糖代謝的狀態(tài).HbA1c的特點HbA1c的形成是不可逆的，其濃度與紅細胞壽命、血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和該時期內(nèi)血糖平均濃度有關(guān)。不受每天葡萄糖波動影響，作為實驗室指標是優(yōu)于血糖的。不受運動與飲食的影響半衰期為35天反映過去6-8周平均血糖濃度評價血糖控制情況的可靠實驗室指標參考值HbA1c正常參考值4～6%糖尿病患者HbA1c≦7%時，說明血糖水平控制較好HbA1C是血糖監(jiān)測的重要標準4%~6%：正常值糖尿病人：6%~7%：控制理想。7%~8%：可以接受。8%~9%：控制不好＞9%：控制很差，慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的危險因素很大。HbA1C是血糖監(jiān)測的重要標準血糖控制目標——達標！IDF2005:

HbA1cFPSPBS<6.5%

<6.0<7.0mmol/L二HbA1c的臨床意義1、增高：過去一段時間血糖高于正常范圍，測定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3個月的血糖控制情況。

2、降低：溶血性及失血性貧血，慢性腎衰，慢性持續(xù)性低血糖癥等。

HbA1c的臨床意義3.作為糖尿病的病情監(jiān)測指標HbA1c＞9％時，說明患者存在著持續(xù)性高血糖，可以出現(xiàn)糖尿病腎病、動脈硬化、白內(nèi)障等并發(fā)癥。4.妊娠期糖尿?。簩︻A(yù)防糖尿病孕婦的巨大胎兒、畸形胎、死胎，以及急、慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的監(jiān)督具有重要意義。5、對于病因尚未明確的昏迷或正在輸注葡萄糖（測血糖當然增高）搶救者，急查糖化血紅蛋白具有鑒別診斷的價值。6、對于糖化血紅蛋白特別增高的糖尿病患者，＞10％甚至更高的情況，應(yīng)警惕如酮癥酸中毒等急性合并癥的發(fā)生。HbA1c的臨床意義總結(jié)總結(jié)：糖化血紅蛋白是不受偶爾一次血糖升高或降低的影響。能反應(yīng)患者過去2-3個月的糖代謝狀況，同時與糖尿病并發(fā)癥尤其是微血管病變關(guān)系密切，在糖尿病學上有重要的臨床參考價值。是糖尿病診斷及治療效果監(jiān)測評價的金指標。三HbA1c的檢測原理GHb與非GHb的電荷差異:

離子交換色譜(HPLC)電泳

血紅蛋白糖化基團的結(jié)構(gòu)差異：

親和層析免疫法HbA1c的檢測方法HPLC(1)離子交換層析(2)硼酸親和層析◆免疫分析(1)放射免疫法、酶免疫法(2)乳膠免疫凝集法◆電泳法離子交換高效液相色譜HPLC原理：用高效微粒離子交換劑作固定相（層析柱），以具有一定pH值的緩沖溶液（洗脫液）作流動相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團進行可逆性離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。在中性pH條件下,HbA1c攜帶的正電荷相對較少,因此可通過HPLC法將其與其它組分(HbA1b,HbA1a,HbF,HbA0)區(qū)分開,得到分離。Sysmex的G7應(yīng)用HPLC原理，結(jié)果準確可靠。HbA1c的檢測方法免疫法

HbH1c的單克隆抗體與膠乳顆粒交聯(lián)，形成致敏顆粒，遇HbH1c發(fā)生結(jié)合而進行凝集反應(yīng)，其濁度與HbH1c量成正比，通過測定吸光度（透射比濁）計算HbA1c量。主要應(yīng)用在大型生化分析儀。HbA1c的檢測方法電泳瓊脂糖凝膠電泳等電聚焦電泳膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷，帶有電荷的膠體顆粒可以借靜電吸引力在電場中泳行，帶正電荷者泳向負極，帶負電荷者泳向正極，此種現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)都有它特有的等電點，各種蛋白質(zhì)在各自的等電點時呈中性狀態(tài)，它的分子所帶正電荷與所帶負電荷量相等。糖化和非糖化的血紅蛋白所帶電荷不同四HbA1c標準化的必要性1.HbA1c檢測有多種方法2.不同的方法可能應(yīng)用的不同原理3.對糖尿病人而言，HbA1c值差1%就很大了4.同一個患者到一家醫(yī)療機構(gòu)測定和到另一家醫(yī)療機構(gòu)測定所得到的結(jié)果完全不同，這是一個嚴重的問題。達不到檢驗報告檢驗報告互認要求。標準化的目的目的：實現(xiàn)各實驗室間結(jié)果的一致可比，即互認。意義（益處）：可以建立起普遍接受（可用）的參考區(qū)間可以合并分析、比較不同醫(yī)學中心的研究資料，促進醫(yī)學研究和研究成果的轉(zhuǎn)化有效提高病人的診療效率，減輕經(jīng)濟負擔。節(jié)約醫(yī)療資源方法（手段）：溯源標準化的途徑明確定義HbA1c建立一個特異測定HbA1c的參考方法制備高度純化的一級標準物質(zhì)建立國際參考實驗室網(wǎng)絡(luò)五影響糖化血紅蛋白測定結(jié)果的因素儀器狀態(tài)，操作規(guī)范性。一些血紅蛋白亞型，如HbS、HbC、HbF和HbE，導致假性的