不同產(chǎn)地半夏總生物堿含量測定

不同產(chǎn)地半夏總生物堿含量測定

半夏來自天南星科植物半夏屬（thunb.）的干燥塊根。其作為一味常用中藥,不僅供中醫(yī)臨床配方使用,也是多種中成藥的原料,其綜合利用價值高,開發(fā)前景廣闊。而且近幾年來,隨著世界各國對半夏研究的不斷深入,以半夏為主原料的產(chǎn)品源源不斷地推入國際市場,故半夏具有巨大的市場潛力。我國半夏資源分布廣泛,國內(nèi)除內(nèi)蒙、吉林、黑龍江、新疆、青海、西藏外,其余省區(qū)均有分布。而半夏種莖的質(zhì)量是半夏藥材品質(zhì)及質(zhì)量控制研究的關(guān)鍵,為了評價全國不同產(chǎn)地半夏尤其是四川片區(qū)半夏種莖的質(zhì)量,本研究收集川產(chǎn)半夏與其他產(chǎn)區(qū)的野生和栽培半夏,對其進行了化學成分的比較研究。半夏總生物堿具有止嘔、抗炎作用,這些藥理作用反映了半夏止嘔、鎮(zhèn)咳的功能與主治,故以半夏總生物堿成分為檢測指標,采用紫外分光光度法對其進行含量測定?，F(xiàn)報道如下。1實驗材料和設(shè)備1.1地研究對象本研究共收集了全國不同產(chǎn)地半夏8省22地共22個種質(zhì)資源樣品作為研究對象,樣品均系成都中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室李敏教授鑒定。材料來源詳見表1。1.2試劑的配制鹽酸麻黃堿購自中國藥品生物制品檢定所;檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH5.4)、溴麝香草酚藍標準液均在臨用前配制,其余所用試劑均為分析純。7530G紫外可見分光光度計(安捷倫上海分析儀器有限公司)。2方法和結(jié)果2.1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10.0mg,置50mL容量瓶中,加蒸餾水制成每1mL含0.2mg鹽酸麻黃堿溶液,即得對照品溶液。2.2聲、氯的提取精密稱取半夏樣品粉末0.5g,置50mL三角瓶中,加濃氨水1mL,濕潤后,加氯仿10mL,稱定重量。冷浸3h后分別超聲提取60min,加氯仿補足減失的重量,過濾,殘渣以10mL氯仿分3次洗滌,合并濾液與洗液,40℃以下回收氯仿至干。加入8mL氯仿使溶解并轉(zhuǎn)移至25mL分液漏斗中,再依次加入10mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液和1mL溴麝香草酚藍標準液,充分振搖后,靜置15min,分取氯仿層,水層再用氯仿同法萃取兩次,每次8mL。合并氯仿層,用氯仿定容于25mL容量瓶內(nèi),即得供試品溶液。2.3界定波長的確定按供試品溶液的制備方法,不稱取半夏樣品粉末制備空白對照液。將對照品溶液、樣品供試液和空白對照液在200～800nm波長范圍內(nèi)進行全波長光譜掃描。以對照品溶液和樣品供試液均有最大吸收,而空白對照液無干擾處作為測定波長。結(jié)果半夏樣品供試液和對照品溶液在418nm處都有最大吸收,故本含量測定最終確定418nm波長作為半夏總生物堿含量的測定波長。見圖1、圖2。2.4制備空白的制備分別精密吸取一定量的鹽酸麻黃堿對照品溶液至分液漏斗中,加蒸餾水至2.0mL,加入8mL氯仿,再依次加入10mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液和1mL溴麝香草酚藍標準液,充分振搖后,靜置15min,分取氯仿層,水層再用氯仿同法萃取兩次,每次8mL。合并氯仿層,用氯仿定容于25mL容量瓶內(nèi),即得。以相應的試劑同法制作空白。照紫外-分光光度法,在418nm波長處測定吸光度,以吸光度A為縱坐標,對照品濃度C為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程:A=25.853C+0.0767,r=0.9982。結(jié)果表明鹽酸麻黃堿在0.0016mg/mL～0.0160mg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖3。2.5樣品溶液的制備精密稱取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對照液。在418nm處測定其吸收度,重復測定5次,測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明:儀器精密度良好。2.6樣品溶液的制備精密稱取取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項下確定的方法平行制備供試品溶液5份。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對照液。在418nm處測定其吸收度,重復測定5次,測定結(jié)果見表3。結(jié)果表明:該方法重現(xiàn)性良好。2.7樣品溶液的制備精密稱取取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對照液。于不同時間在418nm處測定其吸收度,測定結(jié)果見表4。結(jié)果表明:供試品溶液在3h內(nèi)保持穩(wěn)定。2.8空白對照液制備照2.2項下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對照液。在418nm處測定其吸收度,并計算其含量,不同產(chǎn)地半夏總生物堿測定結(jié)果見表5。3川、川產(chǎn)夏的總生物含量3.122個不同產(chǎn)地半夏種莖的總生物堿平均含量為0.03891%,其中最高為0.07270%,最低為0.01194%,相差約4倍,不同產(chǎn)地半夏種莖總生物含量差異較大。說明雖然半夏是一種分布很廣的植物,但是其質(zhì)量各地差異極大,急需建立半夏的種子種苗質(zhì)量標準,提供半夏高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種子,從源頭上控制半夏的質(zhì)量。3.2四川半夏種莖中總生物堿含量在0.03028%～0.06843%,平均值為0.0489%;省外半夏種莖的總生物堿含量范圍在0.01194%～0.0727%,平均值為0.0342%。川產(chǎn)半夏的總生物堿含量較省外半夏高,并且省外半夏中以重慶半夏的總生物堿含量最高,而重慶的氣候、地理環(huán)境與四川極其相近,說明環(huán)境因素對半夏總生物堿含量影響較大,并且半夏作為川產(chǎn)道地藥材是有其依據(jù)的。3.3通過全國范圍收集半夏,發(fā)現(xiàn)栽培半夏直徑遠遠超過藥典規(guī)定,外形與天南星極為相似,與傳統(tǒng)的野生半夏經(jīng)驗鑒別大相徑庭,急需一種全面評價栽培和野生半夏內(nèi)在品質(zhì)差異的方法以控制半夏的質(zhì)量,保證臨床用藥