中藥炮制機(jī)制研究的思路與方法

中藥炮制機(jī)制研究的思路與方法

1中藥制劑前后療效及毒性作用的比較“益增少毒”是中藥加工的主要目的之一。因此，對(duì)中藥前后化學(xué)成分的變化，以及中藥前后療效和毒性作用的變化（強(qiáng)與弱、或改變）是中醫(yī)藥生產(chǎn)機(jī)制研究的主流觀點(diǎn)。歸納總結(jié)可分為三類,一類是從化學(xué)成分變化角度研究中藥炮制機(jī)制,一類是從藥理作用變化角度研究中藥炮制機(jī)制,最后一類是從成分與藥效變化關(guān)聯(lián)性角度研究中藥炮制機(jī)制。1.1從化學(xué)成分變化的角度來看，中醫(yī)藥的生產(chǎn)機(jī)制1.1.1主要成分的變化中藥的有效(毒性)成分或部位在一定程度可代表此中藥的功效或毒性,中藥在炮制過程中主要藥效/毒性成分的轉(zhuǎn)變或含量的變化可部分顯示中藥炮制作用的趨向或轉(zhuǎn)變,進(jìn)而揭示中藥炮制的部分作用機(jī)制。容穗華等利用HPLC技術(shù),比較了生白術(shù)及其不同炮制品中蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯,發(fā)現(xiàn)炮制品中的蒼術(shù)酮含量均有不同程度的降低,白術(shù)內(nèi)酯含量升高,進(jìn)而推斷其炮制機(jī)制可能是蒼術(shù)酮在一定溫度下,暴露在空氣中可轉(zhuǎn)化為白術(shù)內(nèi)酯等成分,使蒼術(shù)酮的含量降低,燥性緩和;李向日等采用苯酚-硫酸分光光度法測(cè)定南方菟絲子及其炮制品多糖的含量,結(jié)果顯示南方菟絲子經(jīng)過炮制后多糖含量明顯增加,這可能與其炮制后補(bǔ)益作用增強(qiáng)密切相關(guān)。在炮制減毒方面,學(xué)者常把焦點(diǎn)放在中藥中的有毒成分或部位的含量和轉(zhuǎn)變上,如附子在炮制過程中其有毒成分雙酯型生物堿含量降低等;近年來有學(xué)者還將炮制減毒的機(jī)制研究放在黃曲霉素、重金屬等有害成分的研究方面,陸兔林等采用ICP-AES法測(cè)定白硇砂和紫硇砂經(jīng)醋制后重金屬含量的變化,結(jié)果顯示經(jīng)加醋煮或加醋撈制后,白硇砂和紫硇砂中As,Cd,Cr,Pb等有害元素的量降低,降低其對(duì)人體的傷害。1.1.2姜、姜炭的指紋圖譜中藥指紋圖譜技術(shù)是符合中醫(yī)理論及現(xiàn)狀的較好的質(zhì)量控制技術(shù),可以較為完善的表述中藥的整體性特征,將其運(yùn)用于中藥炮制前后的成分對(duì)比,較單一成分的對(duì)比更具有代表性和科學(xué)性。王維皓等利用HPLC技術(shù)建立了生姜、干姜、炮姜、姜炭的特征指紋圖譜,結(jié)果發(fā)現(xiàn)生姜到干姜、炮姜、姜炭的炮制過程中,6-姜辣素逐漸降低,6-姜酚逐漸增高,姜酮僅在炮姜中存在,且含量高,可見生姜隨著炮制火候和條件的逐步劇烈,干姜、炮姜、姜炭中酚類成分在質(zhì)和量的比例上發(fā)生了顯著變化,這些變化與其功效的改變更是息息相關(guān);華永麗等采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)(GC-MS)的化學(xué)指紋圖譜,以發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸及其不同炮制品潛在標(biāo)志物,通過正交校正偏最小二乘法模式識(shí)別方法對(duì)樣品進(jìn)行模式識(shí)別,根據(jù)模型的變量重要性因子和非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果篩選出12個(gè)潛在標(biāo)志物。此外,李麗、陸麗等建立了決明子、丹參、當(dāng)歸、白芍、澤瀉等中藥炮制前后的的指紋圖,通過分析確定了炮制前后的差異,并根據(jù)功效的轉(zhuǎn)變對(duì)炮制機(jī)制進(jìn)行推測(cè)。1.2從藥理學(xué)變化的角度來看，中醫(yī)藥的生產(chǎn)機(jī)制1.2.1克氏原螯蝦對(duì)小鼠的免疫作用從中藥本身藥效出發(fā),比較中藥炮制前后藥效的增強(qiáng)、減弱或轉(zhuǎn)變,是一種比較直觀的炮制機(jī)制研究思路,其研究結(jié)果可從整體動(dòng)物、離體器官、細(xì)胞、分子等不同水平進(jìn)行表征。孫佳強(qiáng)等比較了隔山消生品及2種炮制品對(duì)荷S180肉瘤小鼠的抑瘤率,發(fā)現(xiàn)生品與炮制品之間無明顯差異,其水提物對(duì)小鼠S180肉瘤均表現(xiàn)出明顯的抑制作用;張培芳等通過觀察巴豆不同炮制品對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響,發(fā)現(xiàn)小劑量的巴豆霜對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)無抑制作用,巴豆炭對(duì)小鼠胃腸平滑肌既具有興奮作用,又具有抑制作用,且其作用的發(fā)揮隨機(jī)體狀態(tài)及劑量不同而異;杜偉峰等研究發(fā)現(xiàn)山茱萸生品與炮制品多糖對(duì)免疫力低下小鼠的非特異性免疫、體液免疫以及細(xì)胞免疫功能均有明顯促進(jìn)作用,且山茱萸經(jīng)酒蒸制后,其多糖的藥效顯著增強(qiáng);牛玉秋發(fā)現(xiàn)肉豆蔻不同炮制品對(duì)體外培養(yǎng)的人黑色素瘤細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人肝癌細(xì)胞HePG和人肺癌細(xì)胞H460均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用,作用強(qiáng)度為面煨>麩煨>生品;周靈君等發(fā)現(xiàn)爐甘石經(jīng)高溫煅燒水飛后,抑菌活性增強(qiáng)。1.2.2藥物質(zhì)量濃度對(duì)大鼠肝腎功能及藥物代謝的影響中藥的毒副作用常常通過炮制予以減弱或消除,如何通過炮制達(dá)到毒減而效不減目的,則需要通過探索炮制機(jī)制予以回答。李會(huì)芳等基于四膜蟲生物熱活性對(duì)大黃炮制減毒作用進(jìn)行研究,結(jié)果顯示大黃不同炮制品對(duì)四膜蟲生長(zhǎng)有不同程度的抑制作用,其作用強(qiáng)度順序?yàn)樯簏S>酒大黃>熟大黃>大黃炭,表明大黃經(jīng)炮制后有明顯的減毒作用;潘金火等研究發(fā)現(xiàn)石灰水煮、石灰水蒸、甘草汁煮、黑豆汁煮、小蘇打水煮及滑石粉炒6種炮制方法制得的關(guān)木通中馬兜鈴酸A含量降低幅度最大,均能顯著減輕對(duì)大鼠腎功能的損害;張金娟等比較了了哥王生品及2種炮制品的急性毒性大小,發(fā)現(xiàn)2種炮制品的LD50均大于生品,說明2種炮制方法均能降低了哥王的毒性;顏曉靜等研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)藥物質(zhì)量濃度在9.5~4750g·L-1時(shí),甘遂清炒品、醋潤品和醋制品均能降低甘遂的致炎毒性,其順序?yàn)榇字破?gt;醋潤品>清炒品,且降低毒性作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系;張曉風(fēng)等發(fā)現(xiàn)吳茱萸生品揮發(fā)油的LD50為2.82mL·kg-1,95%可信限為2.48~3.21mL·kg-1,制品揮發(fā)油LD50為2.91mL·kg-1,95%可信限為2.49~3.41mL·kg-1;蔡寶昌等研究發(fā)現(xiàn)馬錢子各炮制品的毒性只占馬錢子生品的15.5%~51.5%。1.3黃精制劑對(duì)小鼠碳粒廓清指數(shù)的影響將化學(xué)成分研究與藥效相關(guān)聯(lián),則是一種更為具體、更為整體化的研究思路。鐘凌云等比較了黃精生品與炮制品中不同溶劑提取部位的HPLC圖譜,并對(duì)炮制前后差異較大的二氯甲烷部位進(jìn)行成分分析和藥效實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃精炮制前后二氯甲烷部位主要變化之一為5-羥甲基糠醛,經(jīng)炮制后其含量顯著增加,與生品組相比,制黃精二氯甲烷部位能顯著提高小鼠碳粒廓清指數(shù)和吞噬系數(shù)(P<0.05),推測(cè)制黃精增強(qiáng)免疫功能可能與炮制后5-羥甲基糠醛變化相關(guān);許枬等研究結(jié)果表明狗脊砂燙后新增多種糠醛和γ-吡喃酮類成分,對(duì)狗脊炮制前后化學(xué)成分發(fā)生顯著變化的正丁醇提取部位進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)生狗脊和燙狗脊均具有清楚自由基能力,但燙狗脊清楚自由基作用強(qiáng)于生狗脊,推測(cè)燙狗脊清楚自由基能力增強(qiáng)是炮制過程中化學(xué)成分變化引起的。2中國食品機(jī)制的發(fā)展趨勢(shì)2.1中藥質(zhì)量整體差異的分析方法中藥炮制前后化學(xué)成分整體的差異性研究現(xiàn)階段主要采用中藥指紋圖譜技術(shù),此技術(shù)被認(rèn)為是一種可綜合的、可量化的色譜手段,可測(cè)定一種或者多種藥效成分的含量,建立多種樣品的共有模式。然而,中藥炮制前后化學(xué)成分研究的核心卻不僅僅是分析中藥生品與炮制品的相似度,而是敏感直觀地表征各種成分的微小變化及其導(dǎo)致的整體差異,即中藥炮制前后的化學(xué)成分整體差異性分析,這就需要結(jié)合更先進(jìn)的色譜分離方法和更精細(xì)的統(tǒng)計(jì)分析手段進(jìn)行研究和拓展。隨著20世紀(jì)末新興學(xué)科代謝組學(xué)的誕生,不僅彌補(bǔ)了傳統(tǒng)中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量差異及其原因分析能力不足的不足,其核心更是一種分析復(fù)雜系統(tǒng)的技術(shù),即無偏差地對(duì)樣品中的全部小分子物質(zhì)進(jìn)行定性與定量分析,據(jù)此通過強(qiáng)大的多變量數(shù)據(jù)分析方法研究各種因素對(duì)樣品中物質(zhì)的整體影響,結(jié)合UPLC-TOP-Q-MS,GC-MS,HPCE等先進(jìn)分離技術(shù),則可比較全面的了解中藥炮制前后化學(xué)成分的整體變化。已有學(xué)者成功運(yùn)用此技術(shù)來分析中藥不同炮制品的質(zhì)量差異性,如基于UPLC-TOF的該技術(shù)可快速分析生三七與蒸三七的質(zhì)量差異,并闡明炮制工藝對(duì)蒸三七質(zhì)量的影響。因此,中藥炮制機(jī)制的探討,首先應(yīng)當(dāng)重視中藥炮制前后化學(xué)成分整體差異性分析。2.2中藥藥動(dòng)學(xué)活性成分的吸收目前,中藥炮制機(jī)制的研究多停留在化學(xué)成分的改變或者藥理藥效的變化層面上,而對(duì)闡明炮制機(jī)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)———炮制前后藥效成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程研究的報(bào)道較少?？诜o藥是中醫(yī)藥治療疾病的主要給藥途徑,而藥效成分的吸收是ADME過程的第一環(huán)節(jié),也是中藥發(fā)揮療效的前提和關(guān)鍵。近年來,已有學(xué)者開始著手研究中藥炮制前后藥效成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)變化,如有學(xué)者提出淫羊藿炮制后能被機(jī)體吸收的黃酮含量相對(duì)增加;中藥經(jīng)過炮制,可提高活性成分的吸收,從而達(dá)到增強(qiáng)其藥效之目的;有學(xué)者提出川木香煨制前后功效的改變與藥效成分胃腸吸收和部位差異性有關(guān)。因此,系統(tǒng)揭示中藥炮制前后藥效成分的吸收機(jī)制,明確吸收過程中轉(zhuǎn)運(yùn)體的作用、作用機(jī)制及作用程度,以及中藥多種藥效成分在吸收過程中的相互作用,不僅有利于從藥動(dòng)學(xué)角度闡明中藥炮制機(jī)制,更有利于構(gòu)架炮制前后化學(xué)成分與藥理作用的橋梁。3中藥制劑研究的意義總之,中藥炮制機(jī)制亟待研究的內(nèi)容還有很多,全面闡明中藥炮制的科學(xué)內(nèi)涵勢(shì)在必行。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,不斷涌現(xiàn)的新理論、新方法和新技術(shù)為揭開中藥炮制的神秘面紗提供了重要的條件。為了緊跟中醫(yī)藥現(xiàn)代化發(fā)展的步伐,作為當(dāng)代的藥學(xué)工作者,有關(guān)中藥炮制機(jī)制研究工作的開展,都應(yīng)在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,以傳統(tǒng)炮制經(jīng)驗(yàn)的繼承為基礎(chǔ),緊密結(jié)合中醫(yī)的用藥實(shí)際,多學(xué)科、多層次、全方位地構(gòu)建中藥炮制機(jī)制創(chuàng)新研究模式,才有利于挖掘中藥炮制的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵,豐富中藥炮制理論,促進(jìn)中藥炮制學(xué)科的快速發(fā)展。中藥炮制是我國獨(dú)有的中藥制藥技術(shù),經(jīng)過上千年的發(fā)展已形成了獨(dú)特的中醫(yī)藥炮制理論,積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)技術(shù)和方法,是歷代中醫(yī)用藥的精華和特色。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,近年來,在探討中藥炮制科學(xué)性的問題上,許多學(xué)者將炮制機(jī)制的研究作為炮制學(xué)研究的核心問題,目的是想從各個(gè)方面解釋中藥炮制的科學(xué)性和必要性,但相對(duì)于中藥炮制的工藝和質(zhì)量控制研究方面,炮制機(jī)制研究顯得深度不夠、范圍不廣、創(chuàng)新性不足且常常忽略中藥炮制前后的配伍等關(guān)鍵問題。本文在文獻(xiàn)查閱的基礎(chǔ)上,結(jié)合自身實(shí)踐體會(huì),對(duì)中藥炮制機(jī)制研究的現(xiàn)狀和發(fā)展方向進(jìn)行了較為深入的分析,旨在為中藥炮制機(jī)制的研究提供一些可以參考的思路。2.3藥須中藥品配伍制劑的選擇目前,中藥炮制機(jī)制的研究多停步在單味中藥炮制前后化學(xué)成分或者藥理作用的研究上,而對(duì)中藥炮制前后配伍或復(fù)方中藥物炮制作用機(jī)制的研究較少。然復(fù)方配伍是中醫(yī)用藥的一大特點(diǎn),因?yàn)椤八幱袀€(gè)性之特產(chǎn),方有合群之妙用”,許多中藥須經(jīng)過炮制配伍后才能入藥,況且單味中藥炮制機(jī)制的研究成果可能與在復(fù)方中的研究結(jié)果不一致,有的甚至截然相反,如神曲、麥芽傳統(tǒng)炮制方法為炒焦,但現(xiàn)代研究認(rèn)為神曲、麥芽所含消化酶受高溫易破壞,生用才