雞球蟲(chóng)疫苗的研究進(jìn)展

雞球蟲(chóng)疫苗的研究進(jìn)展

雞球病是一種嚴(yán)重的性原生病。這是一種高度發(fā)病率和很難控制的疾病之一。雞球蟲(chóng)屬于單宿主型,即不需要中間宿主,易于傳播,凡是規(guī)模化養(yǎng)雞的地方,就有雞球蟲(chóng)的存在。集約化養(yǎng)殖場(chǎng)是球蟲(chóng)病暴發(fā)的最適宜場(chǎng)所,其病死率有時(shí)高達(dá)40%。全世界每年因球蟲(chóng)病造成的損失達(dá)10多億美元,其中抗球蟲(chóng)藥的年消費(fèi)約3.2億美元。該病已被美國(guó)農(nóng)業(yè)部列為對(duì)禽類(lèi)危害最嚴(yán)重的五大疾病之一。傳統(tǒng)藥物防治存在著藥物殘留、耐藥性、環(huán)境污染及新藥開(kāi)發(fā)費(fèi)用高等缺點(diǎn),而免疫預(yù)防能克服上述藥物防治的缺點(diǎn)。2008年8月7日,國(guó)內(nèi)第一個(gè)由佛山市正典生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的“雞球蟲(chóng)活疫苗”正式獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的生產(chǎn)許可證和產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào),至此我國(guó)球蟲(chóng)疫苗的研制、生產(chǎn)和使用也進(jìn)入了一個(gè)新的時(shí)期。1雞的循環(huán)重復(fù)免疫法球蟲(chóng)活疫苗的免疫機(jī)理是球蟲(chóng)在低水平感染時(shí)不會(huì)使雞只發(fā)病,但球蟲(chóng)卵囊能循環(huán)地在雞只體內(nèi)繁殖,并排出新的卵囊于墊料中,雞只從墊料中可獲得再次免疫,如此經(jīng)過(guò)幾次生活史循環(huán),雞只就可以產(chǎn)生很好的保護(hù)性免疫,即雞只在低劑量球蟲(chóng)感染狀況下,逐步建立免疫力,以抵抗現(xiàn)場(chǎng)強(qiáng)毒蟲(chóng)株的侵襲。2疫苗類(lèi)型2.1流行病苗2.1.1疫苗接種安全性強(qiáng)毒疫苗的研制是疫苗預(yù)防球蟲(chóng)病的開(kāi)始,強(qiáng)毒疫苗的蟲(chóng)株是直接從自然發(fā)病的雞體內(nèi)或糞便中分離出來(lái)的,致病力強(qiáng),而且是藥物敏感蟲(chóng)株。加拿大的李榮豐提出了獨(dú)創(chuàng)性的凝膠接種體系,即將疫苗均勻分布于凝膠后接種雞,他隨后又研究出藻酸鹽顆粒強(qiáng)毒疫苗。但強(qiáng)毒疫苗因其毒力較強(qiáng),容易引發(fā)球蟲(chóng)病;球蟲(chóng)卵囊在水中沉降較快,易造成免疫不均勻,必須有較好的懸浮劑才能使用;此外,也可能將強(qiáng)毒球蟲(chóng)引入新雞場(chǎng)。2.1.2致弱株的選育基于強(qiáng)毒疫苗的弱點(diǎn),人們開(kāi)始轉(zhuǎn)向用致弱疫苗來(lái)預(yù)防雞球蟲(chóng)病。雞球蟲(chóng)弱毒疫苗有雞胚傳代致弱株、選育的早熟弱毒株、理化處理的致弱株等多種。國(guó)內(nèi)王江清、秦建華等分別選育出巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)的早熟株,并成功研制了三價(jià)早熟弱毒疫苗。吳兆敏等用化學(xué)誘變劑NTG處理柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在毒力下降的同時(shí)卵囊繁殖力也下降。2.2利用生物技術(shù)手段由于活疫苗存在著致病力恢復(fù),理化處理蟲(chóng)株存在卵囊產(chǎn)量低、容易返祖等問(wèn)題,因此隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展,科研人員也在不斷利用生物技術(shù)手段尋求現(xiàn)代生物技術(shù)疫苗。2.2.1基于蛋白免疫的e.teella-pca將寄生蟲(chóng)抗原基因轉(zhuǎn)入表達(dá)載體直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi),誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫力。核酸疫苗是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型疫苗,因其安全、穩(wěn)定、高效和易于制備而得到廣泛研究,被稱(chēng)為第三代疫苗。球蟲(chóng)DNA疫苗是利用編碼致病菌抗原的基因,加上適當(dāng)?shù)恼{(diào)控元件(啟動(dòng)子、增強(qiáng)子)直接注射宿主,在宿主體內(nèi)表達(dá)天然蛋白,然后遞呈給MHCⅠ和MHCⅡ,因此能被宿主的免疫系統(tǒng)識(shí)別。Du等用含E.tenella5401抗原基因通過(guò)減毒沙門(mén)氏菌(Salmonellaenterica)制備口服DNA疫苗,含pcDNA3-5401的減毒沙門(mén)氏菌口服免疫后誘導(dǎo)了很強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫,對(duì)E.tenella卵囊的攻擊提供了部分保護(hù)。Konjufca等將編碼E.acervulina子孢子抗原EASZ240和裂殖子抗原EAMZ250的減毒沙門(mén)氏菌分別于1周齡和2周齡2次免疫雞,對(duì)E.acervulina卵囊的攻擊在增重和腸道病變記分方面有明顯的差異,可誘導(dǎo)一定的保護(hù)作用。2.2.2《重組卡介苗的制備和高效表達(dá)的卡介苗疫苗》2008年8月6日,由吉林大學(xué)李建華等人獲得的發(fā)明專(zhuān)利《球蟲(chóng)重組卡介苗及制備方法》,此專(zhuān)利包括穿梭表達(dá)載體球蟲(chóng)重組卡介苗和整合表達(dá)載體球蟲(chóng)重組卡介苗疫苗,能高效表達(dá)球蟲(chóng)蛋白,使表達(dá)的蛋白發(fā)揮很好的免疫保護(hù)作用,可對(duì)雞球蟲(chóng)病的預(yù)防起到較好的作用。2.2.3e.upra檢測(cè)e.ma感染是指除去不能激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)或?qū)C(jī)體有害的成分,利用其具有免疫原性的部分制得的疫苗。Wallach等采用親和柱純化的56ku、82ku和230ku配子體抗原加入弗氏佐劑免疫產(chǎn)蛋雞,發(fā)現(xiàn)后代雞群對(duì)E.maxima感染具有明顯保護(hù)作用,3次免疫后卵囊排出量下降49.2%。鄭明學(xué)等研究顯示雛雞體內(nèi)母源抗體水平與雛雞抗球蟲(chóng)水平具有明顯正相關(guān)性。以色列雅貝克公司出品的亞單位疫苗CoxAbic中主要含有3種從巨型艾美耳球蟲(chóng)的配子體中分離而得的抗原,這種疫苗可對(duì)種雞或蛋雞進(jìn)行肌肉注射,誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體進(jìn)入卵黃,對(duì)雛雞產(chǎn)生被動(dòng)保護(hù),臨床應(yīng)用表明,球蟲(chóng)卵囊產(chǎn)量下降50%~80%,可用于控制生產(chǎn)中的球蟲(chóng)病。2.2.4球蟲(chóng)基因的篩選單克隆抗體在疾病的診斷、治療、預(yù)防領(lǐng)域顯示出重要作用。國(guó)內(nèi)外已經(jīng)建立了多株針對(duì)堆型艾美耳球蟲(chóng)的單克隆抗體細(xì)胞株,并用單克隆抗體對(duì)已建立的表達(dá)性DNA文庫(kù)或cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選球蟲(chóng)基因,利用這種方法已經(jīng)篩選出很多基因,如堆型艾美耳球蟲(chóng)的9S4、6S2、Eala、MAⅠ、EAMZp30-40和MA16等。但單克隆抗體在體內(nèi)代謝快、特異性較差,許多特異性抗體在體內(nèi)并不完全發(fā)揮其中和活性,用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)篩選的單克隆抗體存在一般只能保持其天然抗體的部分活性、制備工作異常繁瑣和費(fèi)時(shí)等缺點(diǎn)。2.2.5寄生蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白定位分析Hao在柔嫩艾美耳球蟲(chóng)體內(nèi)成功地瞬時(shí)轉(zhuǎn)染并表達(dá)了黃色和紅色熒光蛋白,為了解體內(nèi)蛋白定位,分析寄生蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞有關(guān)的分子功能提供了技術(shù)支持。Yan等利用重組E.tenella建立的一個(gè)體內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體系,為E.tenella和禽類(lèi)其他主要細(xì)胞內(nèi)病原的活疫苗投遞系統(tǒng)及寄生蟲(chóng)的生化和細(xì)胞生物學(xué)研究提供有效的途徑。3接種方法的選擇目前,雞球蟲(chóng)病疫苗的免疫接種方法有噴羽毛、噴眼睛、胚蛋注射、拌(噴)料、混飲和滴口等方法,養(yǎng)殖者可根據(jù)自身?xiàng)l件選擇適宜的接種方法。正確使用疫苗進(jìn)行免