液相懸浮芯片(Bio-Plex)PPT-培訓(xùn)

液相懸浮芯片技術(shù)生物芯片液相芯片技術(shù)生物芯片概況生物芯片種類生物芯片基質(zhì)液相芯片技術(shù)概述液相芯片前處理Bio-Plex光路系統(tǒng)Bio-Plex操作流程同類比較與總結(jié)液相芯片技術(shù)應(yīng)用生物芯片概況綜合應(yīng)用多種高技術(shù)在微小的載體表面上同時(shí)分析檢測多種目標(biāo)生物分子的技術(shù).更少樣品、更多信息、更高效率、數(shù)據(jù)相關(guān)性更好.生物樣品分析檢測技術(shù)的主導(dǎo)發(fā)展趨勢.探針分子：蛋白質(zhì)（抗體或抗原）、糖類、核酸或多肽等.生物檢測芯片

生物功能芯片

生物芯片種類PoetzOet.al,MechanismsofgeneandDevelopment,2005,126,161–170.生物芯片基質(zhì)濾膜、尼龍、凝膠膜玻璃片、石英玻璃片特殊結(jié)構(gòu)：標(biāo)準(zhǔn)玻璃片制備表面開放的微孔結(jié)構(gòu)，并使用金粒子包被微孔，提高檢測靈敏度。微球系統(tǒng)：即液相芯片，靈敏度，活性，效率，成本片膜芯片的問題…表面張力、空間位阻影響反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)片膜的反射和偏光影響熒光檢測以一個(gè)點(diǎn)計(jì)數(shù)，系統(tǒng)誤差較高可以幾個(gè)重復(fù)點(diǎn)計(jì)平均數(shù)，但效率受影響每一個(gè)芯片必須獨(dú)立點(diǎn)樣或光刻，大規(guī)模樣品篩查時(shí)芯片制作成本較高檢測大分子受到限制液相芯片克服了這些問題…開拓了生物芯片新的應(yīng)用領(lǐng)域成本問題數(shù)據(jù)精度重復(fù)性問題液相芯片技術(shù)20世紀(jì)90年代興起，集流式細(xì)胞、激光、數(shù)字信號(hào)處理等技術(shù)為一體的多功能液相分析平臺(tái)。基本原理探針分子待測分子標(biāo)記的檢測分子捕獲微球微球特點(diǎn)不同濃度的兩種顏色熒光分類染料

FluorescentClassification

Dyes

紅色和紅外

RedandInfrared10種比例可以對(duì)100種微球進(jìn)行編碼5.5μmpolystyrenemicrospheres/magneticmicrospheres微球制備RedInfrared100%0%100%0%IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2XMAP色標(biāo)編碼微球100色標(biāo)

colorcodes=100simultaneoustests

同時(shí)檢測UnknownMulti-Analytes-ProfilingTechnology微球標(biāo)記探針共價(jià)結(jié)合在微球表面每個(gè)小球通常結(jié)合幾千個(gè)探針探針：抗原、酶、核酸、糖蛋白、其它配體等.液相芯片前處理多種微球混合一種微球?qū)?yīng)一種抗體多種微球?qū)?yīng)多種目標(biāo)分子樣品孵育混合好的微球與樣品反應(yīng)樣品中的目標(biāo)分子（抗原）與微球上的第一抗體結(jié)合標(biāo)記檢測分子孵育標(biāo)記有生物素的二抗用第二抗體檢測可以增加特異性熒光檢測利于定量分析Bio-Plex系統(tǒng)檢測微球小球進(jìn)入石英毛細(xì)管一次一個(gè)通過綠、紅激光Bio-Plex光路系統(tǒng)532nmGreenLASER635nmREDLASERFiltersDetectorsDetectorFlowcell紅色激光(635nm)激發(fā)微球的標(biāo)碼熒光熒光密度對(duì)應(yīng)紅色和紅外的比例與預(yù)先存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)比較確定微球的身份激發(fā)二抗標(biāo)記的熒光采集熒光密度數(shù)據(jù)，F(xiàn)I(FluorescentIntensity)FI對(duì)應(yīng)樣品中特定抗原的量綠色激光(532nm)DATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1Em3Em2DD

Read100eachcolorbeadinassay

1-100beadsetsavail.液相芯片檢測過程5PL對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性標(biāo)準(zhǔn)曲線→標(biāo)準(zhǔn)曲線定量液相芯片的優(yōu)點(diǎn)表面張力、空間位阻不再影響反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)微球不易發(fā)生反射，同時(shí)熒光偏光的影響降低以多個(gè)微球計(jì)數(shù)，系統(tǒng)誤差降低多個(gè)微球檢測計(jì)平均數(shù)，效率不受影響大規(guī)模樣品篩查時(shí)芯片制作成本大大降低利于檢測大分子液相芯片開拓了生物芯片新的應(yīng)用領(lǐng)域成本降低提高了數(shù)據(jù)精度重復(fù)性Bio-Plex液相懸浮系統(tǒng)開機(jī)、校正（校驗(yàn)）選擇檢測項(xiàng)目、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照、設(shè)置96孔板格局～40分鐘完成96樣品的讀板生成和優(yōu)化數(shù)據(jù)報(bào)告打印、輸出數(shù)據(jù)自動(dòng)關(guān)機(jī)Bio-Plex操作流程開機(jī)校正、校驗(yàn)MCVPlate自動(dòng)清洗、校正、校驗(yàn)校正所有檢測器通道重置DD,CL1,CL2,RP1標(biāo)準(zhǔn)信號(hào)輸出RP1低電壓、高電壓校正以調(diào)整靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍校正Kit標(biāo)有各項(xiàng)目標(biāo)值，輸入對(duì)話框自動(dòng)完成校正校正程序校驗(yàn)工具和作用保證儀器性能符合設(shè)定的參數(shù)保證世界上任意兩個(gè)地方的儀器的數(shù)據(jù)可以比較用作維修時(shí)故障測試和問題解決可以作為IQ/OQ4套試劑OpticsBeads2bottlesReporterBeads6bottlesClassificationBeads5bottlesFluidicsBeads2bottles

校驗(yàn)參數(shù)光學(xué)部分校正（光學(xué)部件位置精度）液流系統(tǒng)校正（液流精度和消除交叉污染）報(bào)告激光校正（線性、靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍、斜率、精確度等）分類檢測校正（微球色標(biāo)編碼的正確性）protocol編制Bio-Plex

總結(jié)Bio-Plex是一個(gè)定量檢測系統(tǒng)，每孔可檢測150種不同的指標(biāo)靈敏----可檢測2～4pg/ml蛋白快速----全部反應(yīng)及數(shù)據(jù)處理只需2小時(shí)微量----樣品只需12ul血清方便----樣品無需復(fù)雜處理,可直接上樣微球標(biāo)記反應(yīng)類型決定應(yīng)用范圍B-抗體-抗原-抗體-FB-抗原-抗體-抗體-FB-蛋白1-蛋白2-FB-配體-受體-FB-DNA-糖蛋白-FB-底物-酶-FB-DNA-DNA-F液相芯片應(yīng)用基因診斷SNP基因分型疾病相關(guān)突變檢測HLA測試或組織配型免疫診斷血庫篩查傳染病檢測疫苗效果測試自身免疫過敏反應(yīng)其它分子標(biāo)志物如激素、多肽調(diào)控蛋白等Bio-PlexTMMulti-array基因分型基因多態(tài)性基因突變基因表達(dá)疾病標(biāo)志物發(fā)育過程基因基因調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)譜

一般細(xì)胞因子研究疾病建模后翻譯修飾信號(hào)傳導(dǎo)因子蛋白功能\相互作用抗體交叉反應(yīng)和特異性蛋白蛋白相互作用受體配體結(jié)合酶的活性抗原決定簇藥物篩選疾病Marker發(fā)現(xiàn)疾病Model試劑開發(fā)的公司ClinicalDiagnosticsBMD

FutureDiagnostics

Genaco

INOVADiagnostics,Inc.

ImmuneTech

MultimetrixGmbH

OneLambda,Inc.

OrchidDiagnostics

ZeusScientific,Inc.

Research/DrugDiscoveryAppliedCytometrySystems

BenderMedSystems

BiosourceInternational

LINCOResearch

MarligenBiosciences,Inc

MiraiBio

QIAGEN

R&DSystems

RadixBioSolutions

RulesBasedMedicine

TmBioScience

Upstate

糖鏈解析—凝集素液相芯片技術(shù)分布：溶酶體、細(xì)胞膜、細(xì)胞外液功能：分子識(shí)別、配體；細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳遞；細(xì)胞黏附、遷移、增殖、分化。凝集素芯片現(xiàn)狀液相凝集素芯片的建立Proteomics2014,14,78–86Detectionlimitandresponselinearityofdirectassayandantibody-overlayassayFigure2.(A)LODand(B)linearityofresponseofdirectassaywithRCA120(n=3).(C)LODand(D)linearityofresponseofantibodyoverlayassayforHpprofilingwithRCA120(n=3).GalMethodvalidationofmultiplexedassayFigure3.Multiplexedassayofbead-basedlectinarray(n=3).(A)MultiplexedassayofRCA120andWGAtotestthespecificities.ASF,FET(500ng/mLeach),andthesamemoleofBSAwereused.(B)Dose-dependentnetintensityofASFandFET(20to500ng/mLeach)forRCA120andWGA.(C)MultiplexedassayofRCA120,PNA,andConAtotestthespecificitiesandcomparethesignalsbetweensingleandmultiplexedassay.ASF(12ng/mL)andthesamemoleofHRPandBSAwereused.(D)Dose-dependentnetintensityofASF(1.8to600ng/mL)forConA,RCA120,andPNA.(E)Multiplexedantibody-overlaylectinarrayofRCA120andSNA-I.Hp(3ng/mL)andthesamemoleoftransferrinwereused.(F)Dose-dependentnetintensityofHp(0.3to75ng/mL)forRCA120andSNA-I.Glycosylationprofilingtestof17selectedlectinsFigure4.Glycanprofilingwith17-lectinbead-basedlectinarray(n=3).(A)Seventeenlectinswithdifferentbindingspecificitieswereincubatedwiththreeglycoproteins(50ng/mLofHRP,33ng/mLofmLam,and50ng/mLofASF)thatcontaindifferenttypesofglycans.(B)ThespecificitiesandcleavagesitesofPNGaseFandO-glycanase.(C)Biotin-ASF(50ng/mL)intactordigestedbyPNGaseFwasprobedonthearray.(D)Biotin-ASF(50ng/mL)intactordigestedbyO-glycanasewasprobedonthearray.ErrorbarsrepresentSDoftriplicatedeterminantsDifferentialglycosylationprofilingofHCC-AssociatedIgG((i)(ɑ-1,6)corefucosylationasconfirmedbyPSA,Lensculinarisagglutinin,andAAL;(ii)heavy(ɑ-2,6)sialyl