分子診斷學(xué)：第十六章 題目

選擇題抑癌基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)技術(shù)包括______。ACGHBICC/IHCCMSSDMSPERT-PCR2．檢測(cè)致病基因結(jié)構(gòu)異常的方法有_______。A斑點(diǎn)雜交B等位基因特異的寡核苷酸探針雜交C單鏈構(gòu)象多態(tài)性D限制性內(nèi)切酶圖譜分析E限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性3．在基因轉(zhuǎn)錄水平上的檢測(cè)方法有_______。ARNA分子雜交B逆轉(zhuǎn)錄PCRC限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析D限制性內(nèi)切酶圖譜分析E單鏈構(gòu)象多態(tài)性4．下列不屬于復(fù)雜性疾病的是_______。A高血壓B外傷C肺癌D急性粒細(xì)胞白血病5．下列屬于表觀遺傳性改變的是_______。A抑癌基因Rb1突變B癌基因K-ras突變C抑癌基因APC啟動(dòng)子高甲基化改變D微衛(wèi)星不穩(wěn)定性6．血漿DNA定量檢測(cè)方法包括_______。A放射免疫法B實(shí)時(shí)熒光定量PCR法C溴化乙錠法D對(duì)流免疫電泳法ERNA—DNA雜交法7．下列與結(jié)腸直腸癌的發(fā)生有關(guān)的分子改變是_______。A抑癌基因APC啟動(dòng)子高甲基化改變Bt（9；22）染色體異常C抑癌基因Rb1突變D抑癌基因APC突變8．下列與肺癌的發(fā)生有關(guān)的分子改變是_______。A抑癌基因APC啟動(dòng)子高甲基化改變Bt（9；22）染色體異常C抑癌基因Rb1突變D抑癌基因APC突變9．在甲基化特異性引物基因擴(kuò)增過(guò)程中，原始被分析的DNA模板進(jìn)行化學(xué)修飾后，未甲基化的胞嘧啶會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)開______。AABTCUDG10．下列微小殘留病中具有血管外腫瘤細(xì)胞增殖特性的是_______。A播散腫瘤細(xì)胞B游離腫瘤細(xì)胞C循環(huán)腫瘤細(xì)胞D微轉(zhuǎn)移名詞解釋分子診斷循環(huán)DNADNA芯片技術(shù)微小殘留?。╩inimalresidualdisease，MRD）限制性內(nèi)切酶圖譜XE"限制性內(nèi)切酶圖譜（restrictionmap）"分析問(wèn)答題復(fù)雜性疾病分子診斷有哪些研究特點(diǎn)？簡(jiǎn)述復(fù)雜性疾病分子診斷的臨床意義。分子診斷有哪些常用的技術(shù)？DNA芯片技術(shù)有哪些優(yōu)點(diǎn)？分子診斷在腫瘤臨床中有哪些應(yīng)用？簡(jiǎn)述甲基化特異性引物基因擴(kuò)增的原理。簡(jiǎn)述腫瘤微轉(zhuǎn)移與播散腫瘤細(xì)胞的區(qū)別。答案：選擇題：CD、ABCDE、AB、B、C、ABCDE、D、A、C、D名詞解釋：分子診斷是以DNA和RNA為診斷材料，通過(guò)檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)或表達(dá)功能的異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過(guò)程循環(huán)DNA是一種無(wú)細(xì)胞狀態(tài)的胞外DNA，它存在于血液(血清或血漿)、滑膜液等體液中。循環(huán)DNA主要是由單鏈或雙鏈DNA及其混合物組成，主要以DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在，但也存在著部分游離的DNA。DNA芯片技術(shù)是指在固相支持物上原位合成(insitusynthesis)寡核苷酸或者直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，得出樣品的遺傳信息（基因序列及表達(dá)的信息）。對(duì)于腫瘤（尤其是中晚期腫瘤）患者而言，即使原發(fā)病灶被去除，患者體內(nèi)仍然可能存在來(lái)自原發(fā)病灶的腫瘤細(xì)胞。這些腫瘤細(xì)胞以單個(gè)腫瘤細(xì)胞，或以肉眼不可見(jiàn)細(xì)胞集落的形式存于血液或人體組織中。在腫瘤患者體內(nèi)存在的這種腫瘤病變，被稱為腫瘤微小殘留病。如果DNA突變后改變了某一核酸限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，使原來(lái)某一識(shí)別位點(diǎn)消失，或形成了新的識(shí)別位點(diǎn)，那么相應(yīng)限制性內(nèi)切酶片段的長(zhǎng)度和數(shù)目會(huì)發(fā)生改變，一般基因組DNA經(jīng)該種限制性內(nèi)切酶水解，再做Southern印跡，根據(jù)雜交片段的圖譜，可診斷該點(diǎn)突變。問(wèn)答題：（1）直接檢測(cè)疾病或疾病相關(guān)基因，屬病因診斷，針對(duì)性強(qiáng)；（2）特異性強(qiáng)、靈敏度高：由于分子診斷采用核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、表達(dá)芯片、蛋白質(zhì)芯片及質(zhì)譜等新技術(shù)手段，檢測(cè)分析的特異性和靈敏性均大大增高；（3）適用范圍廣：其應(yīng)用的范圍已從原先局限的遺傳性疾病擴(kuò)大到腫瘤、心血管及感染性疾病等領(lǐng)域。2．利用分子診斷的技術(shù)手段，可對(duì)絕大多數(shù)臨床復(fù)雜性疾病做出早期快速診斷；確定個(gè)體對(duì)疾病的易感性；疾病的分期分型、療效監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷等3．檢測(cè)致病基因結(jié)構(gòu)異常的方法：斑點(diǎn)雜交、等位基因特異的寡核苷酸探針雜交、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、限制性內(nèi)切酶圖譜XE"限制性內(nèi)切酶圖譜（restrictionmap）"分析、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性XE"限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）"遺傳連鎖分析、DNA分子雜交基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)方法：RNA分子雜交、逆轉(zhuǎn)錄PCR、基因序列分析及表達(dá)檢測(cè)技術(shù)：DNA序列分析、生物芯片與基因芯片4．DNA芯片技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：①可平行、高通量、綜合性地檢測(cè)大量基因；②快速、敏感、準(zhǔn)確；③不需要使用同位素，可以對(duì)疾病進(jìn)行前瞻性診斷，從而在亞健康狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)真正意義上的基因診斷。5．包括：腫瘤早期診斷、腫瘤患者預(yù)后判斷、腫瘤篩查、腫瘤微小殘留病檢測(cè)、腫瘤耐藥監(jiān)測(cè)6．對(duì)原始被分析的DNA模板進(jìn)行化學(xué)修飾后，未甲基化（野生型）DNA轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化（突變型）DNA則仍然保持不變。因此，對(duì)未知甲基化檢測(cè)樣品進(jìn)行化學(xué)修飾后，以針對(duì)甲基化和未甲基化（非甲基化）的特異性序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，對(duì)修飾后的模板DNA進(jìn)行甲基化特異性引物基因擴(kuò)增。甲基化陽(yáng)性的樣本用甲基化引物可以擴(kuò)增出陽(yáng)性產(chǎn)物，而非甲基化的樣本以非甲基化引物可以擴(kuò)增出陽(yáng)性產(chǎn)物。利用電泳可以對(duì)結(jié)果加以鑒