分光光度計設(shè)計實驗

設(shè)計實驗可見分光光度法測定新血寶膠囊中鐵的條件實驗實驗者：［摘要］：采用分光光度法測定的鐵，并且討論了吸收波長，顯色劑用量，溶液ph，顯色時間和顯色溫度等因素對吸光度的影響，從而找到最佳實驗條件，然后在此條件下測定新血寶膠囊中鐵的含量。關(guān)鍵詞：可見分光光度法：鐵含量：新血寶：測定條件：實驗1綜述：新血寶膠囊，為膠囊劑，內(nèi)容物為棕黃色的粉末；氣香，味微苦、甘，有鐵腥味。為內(nèi)科虛證類非處方藥藥品。功能主治：補血益氣，健脾和胃。用于痔瘡出血、月經(jīng)過多、偏食等原因所致的缺鐵性貧血。成分為雞血藤、黃芪、大棗、當歸、白術(shù)、陳皮、硫酸亞鐵。本實驗主要是采用鄰二氮菲分光光度法測定新血寶膠囊中硫酸亞鐵中的鐵。采用這種辦法將受到很多因素的影響，如顯色劑的用量，最大吸收波長，溶液ph，顯色時間，顯色溫度等的影響，經(jīng)查文獻知最佳的實驗條件：顯色劑用量為0.15%0.8?2.4ml［1］，最大吸收波長510?514nm［4］，溶液ph5?8［2］，顯色時間（室溫下）1分鐘［5］，顯色溫度293.15K及以上［3］等。亞鐵離子容易被氧化生成三價鐵離子，三價鐵離子與鄰二氮菲也能生成淡藍色絡(luò)合物但其不穩(wěn)定。故在顯色前用鹽酸羥胺將三價鐵離子還原成亞鐵離子，化學方程式：2Fe3++2NH2OH-HC1==2Fe2++N2t+2H2O+4H++2Cl-。儀器與試劑儀器：721分光光度計，phS-2型酸度計，8個25ml的容量瓶，7個50ml的容量瓶，恒溫箱5個，不同規(guī)格的移液管.試劑：供試液，鐵標準液(160ug/ml)，鄰二氮菲(0.15%),ph=5的HAc-NaAc緩沖液HC(0.1mol/L)HC(0.001mol/L)HC(0.0001mol/L)NaO頊0.01mol/L)NaOH(0.001mol/L),NaOH(0.0001mol/L),NH2OH-HC1(10%)供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物0.25克，精密稱定，置于250ml容量瓶中，加硫酸溶液(1-20)2.5ml和水100ml，混勻，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液2ml,置于50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。對照品溶液濃度:160ug/ml.o實驗條件的選擇3.1顯色劑的用量原理：不同量的鄰二氮菲與亞鐵離子在ph=2?9的還原性溶液中生成橙紅色的配合物在510nm測得其吸光度。據(jù)資料［1］可知100ug/ml的鐵標準液稀釋50倍，顯色劑鄰二氮菲(0.15%)的用量為1?3ml時，吸光度值基本不變。本實驗選用的鐵標準液為160ug/ml，稀釋50倍后，粗估鄰二氮菲的用量應(yīng)在2?5ml之間。方法:取8個25ml的容量瓶，各加鐵標準液0.5ml,及5ml的HAc-NaAc緩沖液，1ml的10%的NH2OH-HCl溶液，搖勻，放置兩分鐘后分別加入0.15%的鄰二氮菲1.0ml,2.0ml,2.5ml,3.0ml,3.5ml,4.0ml,4.5ml,5.0ml，用水稀釋至刻度，搖勻。在721分光光度計上用1cm的吸收池，在選定的波長510nm測定溶液的吸光度(A)o繪制吸光度-鄰二氮菲體積曲線。V顯色劑0.51.02.03.03.54.04.55.0A繪制A-v圖像選取吸光度最大且恒定的顯色劑用量。3.2最大吸收波長原理：亞鐵離子與適量的鄰二氮菲在pH=2?9的還原性的溶液中生成橙紅色的配合物，在不同的波長（500?530nm）下測定吸光度（A）。據(jù)資料［3］可知亞鐵離子與鄰二氮菲的配合物在510?514nm波長處有最大吸收，故將波長范圍確定在490?530nm之間。方法:取25ml的容量瓶，加鐵標準液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc緩沖液，1ml的10%的NH2OH-HCl溶液，搖勻，放置兩分鐘后加入0.15%的鄰二氮菲ml,用水稀釋至刻度，搖勻。在721分光光度計上用1cm的吸收池，在不同的波長（490?530nm）測定溶液的吸光度（A）。繪制吸光度-波長曲線。選取吸光度最大且恒定的波長。波長490500510512514516518520530A3.3溶液ph原理：亞鐵離子與適量的鄰二氮菲在pH=3?9的還原性的溶液中生成橙紅色的配合物，在最大吸收波長下測定吸光度（A）。據(jù)資料［3］可知鄰二氮菲與亞鐵離子顯色生成橙紅色絡(luò)合物在ph=5?8范圍內(nèi)吸光度最大。故實驗選擇的ph范圍為3?9.方法:取7個25ml的容量瓶，各加標準液0.5ml及1ml10%的NH2OH-HCl溶液，搖勻，放置兩分鐘后加入0.15%的鄰二氮菲ml,如下表加入NaOH和HCl,用水稀釋至刻度，搖勻，并用ph計測定溶液ph。在721分光光度計上用1cm的

吸收池，在最大吸收波長測定溶液的吸光度（A）。繪制吸光度-PH曲線。選取吸光度最大且恒定的ph。HCl(0.1mol/L)NaOH(0.01mol/L)pH（估計值）pH（測量值）酸堿配比1ml7.5ml3酸堿配比1ml9.75ml4HCl(0.001mol/L)NaOH(0.0001mol/L)pH（估計值）pH（測量值）酸堿配比1ml7.5ml5酸堿配比1ml9.75ml6酸堿配比1ml10ml7HCl(0.0001mol/L)NaOH(0.001mol/L)pH（估計值）pH（測量值）酸堿配比9.75ml1ml8酸堿配比7.5ml1ml9PH3456789A3.4顯色時間原理：亞鐵離子與適量的鄰二氮菲在pH=2?9的還原性的溶液中生成橙紅色的配合物，不同的時間（5?35分鐘）在最大吸收波長下測定吸光度（A）。方法:取25ml的容量瓶，加標準液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc緩沖液，1ml的10%的NH2OH-HCl溶液，搖勻，放置兩分鐘后分別加入0.15%的鄰二氮菲ml,用水稀釋至刻度，搖勻。在721分光光度計上用1cm的吸收池，（5?35分鐘）在選定的波長 nm測定溶液的吸光度（A）。繪制吸光度-時間曲線。min時間5101520253035A3.5顯色溫度原理：在不同的溫度下（5?35度）亞鐵離子與適量的鄰二氮菲在pH=2?9的還原性的溶液中生成橙紅色的配合物，適宜的時間最大吸收波長下測定吸光度（A）。據(jù)資料［6］可知顯色時間達20分鐘當溫度在20~30度時，，吸光度最大且穩(wěn)定不變.方法:取6個25ml的容量瓶，各加標準液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc緩沖液，1ml的10%的NH2OH-HC1溶液，搖勻，分別放置恒溫箱（5,10,15,20,25,30,35度）中兩分鐘，同時將0.15%的鄰二氮菲 ml放入相應(yīng)的恒溫箱中2分鐘,然后同溫度亞鐵離子與鄰二氮菲混合，用水稀釋至刻度搖勻并置與恒溫箱中 分鐘之后的，在721分光光度計上用1cm的吸收池，在選定的波長510nm測定溶液的吸光度。繪制吸光度-溫度曲線。溫度5101520253035A總結(jié)：測量水中鐵含量最佳的實驗條件。1顯色劑用量2最大吸收波長3溶液ph4顯色時間5顯色溫度可見分光光度法測定新血寶膠囊中鐵方法：:取6個50ml的容量瓶，各加標準液o.oo,o.25,o.5o,i.oo,i，5o,2.ooml及5ml的HAc-NaAc緩沖液，1ml的10%的NH2OH?HCl溶液，搖勻，放置兩分鐘后分別加入0.15%的鄰二氮菲ml,用水稀釋至刻度，搖勻。在721分光光度計上用1cm的吸收池，在選定的波長510nm測定溶液的吸光度A。繪制鐵離子濃度-吸光度標準曲線。并求出線性回歸方程。C(ug/ml)00.81.63.24.86.4A在同樣的條件下，測定供試液（調(diào)ph）與鄰二氮菲配合物的吸光度。帶入線性回歸方程求出供試液的鐵離子濃度為c1（ug/ml）.新血寶內(nèi)容物（0.25g）里含有亞鐵離子質(zhì)量為m1（ug）K為稀釋倍數(shù) k=50/2=25m1=c1*K*250結(jié)論：新血寶膠囊中鐵的含量為m1藥典：新血寶膠囊中鐵的含量為 ~之間故判斷該藥品是否合格。參考文獻秦巖.鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實驗的改進.[J]沈陽醫(yī)學院報,2oo8,io（1）:44-45李建雄.自來水鐵含量測定的實驗研究.[J]內(nèi)蒙古石油化工，2。11，（6）:4