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化學(xué)發(fā)光試劑及其應(yīng)用化學(xué)發(fā)光試劑及其應(yīng)用化學(xué)發(fā)光試劑概述化學(xué)發(fā)光分析的基本原理化學(xué)發(fā)光試劑的主要類型化學(xué)發(fā)光試劑的應(yīng)用化學(xué)發(fā)光試劑概述
發(fā)光被定義為處在激發(fā)態(tài)的分子或原子回到基態(tài)時所發(fā)射的光。按照獲得激發(fā)態(tài)能源的不同有各種類型的發(fā)光。在化學(xué)發(fā)光(chemluminescence,CL)中,由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生能的原子或分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時所產(chǎn)生的這一光輻射現(xiàn)象叫化學(xué)發(fā)光。根據(jù)化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度測定物質(zhì)含量的分析方法叫化學(xué)發(fā)光分析。
1887年Redziszewski首次報道了絡(luò)吩堿(lophine,2,4,5-三苯基咪痤)在堿性條件下與氧氣反應(yīng)發(fā)出黃金設(shè)色的光———人為的化學(xué)發(fā)光……
化學(xué)發(fā)光的特點(diǎn)
1。靈敏度高,如用熒光素酶和磷酸三腺苷(ATP)的發(fā)光反應(yīng),可測定2*10-17mol/L的ATP,即可檢測一個細(xì)胞中的ATP含量。2.分析方法簡單快捷,不需要復(fù)雜的儀器,不需要光源和色散裝置,業(yè)沒有光學(xué)分析方法中常見的散射光和雜散光等引起的背景值?;瘜W(xué)發(fā)光分析法的測量儀器比較簡單,主要包括樣品室、光檢測器、放大器和信號輸出裝置?;瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在樣品室中進(jìn)行,反應(yīng)發(fā)出的光直接照射在檢測器上,目前常用LUM-F流動注射化學(xué)發(fā)光儀器
1.化學(xué)發(fā)光的基本條件
一個化學(xué)反應(yīng)要產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象,必須滿足以下條件:第一是:該反應(yīng)必須提供足夠的激發(fā)能(對于藍(lán)光發(fā)射需300kj.mol-1,紅光需150kj.mol-1),導(dǎo)致電子從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)。第二是:化學(xué)反應(yīng)的能量至少能被一種物質(zhì)所說接受并使之生成激發(fā)態(tài)。第三是:處于激發(fā)態(tài)的分子或原子必須具有一定的化學(xué)發(fā)光量子效率時期能釋放出光子,或能轉(zhuǎn)移它的能量給另一個分子使之處于激發(fā)態(tài)并使發(fā)出光子1.自身化學(xué)發(fā)光反應(yīng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng),按反應(yīng)機(jī)理可分成自身化學(xué)發(fā)光,敏化化學(xué)發(fā)光,偶合反應(yīng)化學(xué)發(fā)光,電致化學(xué)發(fā)光反……
是指被測物質(zhì)為反應(yīng)物直接參與化學(xué)反應(yīng),利用自身化學(xué)反應(yīng)釋放的能量激發(fā)產(chǎn)物分子的光輻射??捎梅磻?yīng)式表示為:
A+B→C*+D,C*→C+hv
這類化學(xué)發(fā)光反應(yīng)最多和最普遍,多數(shù)有機(jī)物分子在液相中的化學(xué)反應(yīng)屬于這一類型2.敏化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)
是指某些化學(xué)反應(yīng)中的由于激發(fā)態(tài)產(chǎn)物本身不發(fā)光或反光十分微弱,但通過加入某種能諒接受體(熒光劑)可導(dǎo)致發(fā)光。反應(yīng)式為:
A+B→C*+D,F+C*→F*+C,F*→F+hvC為能量給于體,F(xiàn)為能量接受體。
如一氧化氮與臭氧的氣相化學(xué)發(fā)光反應(yīng)有較高的化學(xué)發(fā)光效率,其反應(yīng)機(jī)理為3.化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與反應(yīng)物濃度的關(guān)系
化學(xué)發(fā)光反應(yīng)所以能用于分析測定,是因?yàn)榛瘜W(xué)發(fā)光強(qiáng)度(ICL)與化學(xué)反應(yīng)速度(dp/dt)相關(guān)聯(lián),而一切影響反應(yīng)速度的因素有多可以作為建立測定方法的依據(jù)。
化學(xué)發(fā)光反應(yīng)一般可表示為:
A+B→C*,C*→C+hv
該發(fā)光反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度取決于翻譯的速度dp/dt和反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光量子效率(ΦCL)
ICL(T)=ΦCLdp/d
式中ΦCL可表示為:ΦCL=Φr+Φf,其中Φr為生成激發(fā)態(tài)產(chǎn)物的量子效率,Φf為激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子的發(fā)光量子效率,對于一定的化學(xué)發(fā)光反應(yīng),為一定值;其反應(yīng)速度可按質(zhì)量作用定律表示出與反應(yīng)體系中物質(zhì)濃度的關(guān)系。因此,通過測定化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度就可以測定反應(yīng)體系種某種物質(zhì)的濃度,原則上講,對任何發(fā)光反應(yīng),只要反應(yīng)是一級或假一及反應(yīng),都可以通過上式進(jìn)行化學(xué)發(fā)光定量分析?;瘜W(xué)發(fā)光分析測定的物質(zhì)對象可分為三類:第一類物質(zhì)是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中的的反應(yīng)物
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