Hela細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

HeLa細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

教學(xué)目標(biāo)1.理解細(xì)胞傳代培養(yǎng)的概念和原理2.能按照操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的概念概念：指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或其他比率轉(zhuǎn)移，接種到另外的培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)，也叫做繼代培養(yǎng)。HeLa細(xì)胞是一種貼壁生長的細(xì)胞，在進(jìn)行傳代時通常是采用胰蛋白酶消化，把細(xì)胞分散成單細(xì)胞再傳代。

培養(yǎng)細(xì)胞一代生長過程實驗前準(zhǔn)備

1、材料：HeLa細(xì)胞2、試劑：0.25％胰蛋白酶、1640培養(yǎng)基〔含10％小牛血清〕、PBS實驗前準(zhǔn)備超凈工作臺CO2培養(yǎng)箱倒置顯微鏡3.儀器設(shè)備〔1〕細(xì)胞培養(yǎng)用的器材和試劑滅菌；〔2〕超凈工作臺準(zhǔn)備〔75%酒精擦拭臺面，紫外燈照射30min〕；〔3〕試劑預(yù)熱〔37℃水浴鍋〕；〔4〕操作人員準(zhǔn)備〔75%酒精擦拭雙手等〕。4.實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備細(xì)胞生存環(huán)境：無菌、無毒細(xì)胞傳代操作1、倒去培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)液，參加2-3mL預(yù)熱的PBS液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞外表的碎片。吸除培養(yǎng)液細(xì)胞傳代操作

2、胰蛋白酶消化：參加適量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，注意消化液的量以蓋住細(xì)胞最好。

加消化液細(xì)胞傳代操作

3、蓋緊瓶蓋，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將消化液棄去，參加適量預(yù)熱后的培養(yǎng)液終止消化。〔一般消化時間約為2-3分鐘〕。

消化前細(xì)胞消化后細(xì)胞〔適度狀態(tài)〕吸除消化液細(xì)胞傳代操作

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液。吹打成細(xì)胞懸液分裝細(xì)胞傳代操作

5、以1：2或1：3進(jìn)行分裝，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，注明代號、日期，輕輕搖勻，置于37℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)〔如果瓶蓋不帶通氣孔，那么需將瓶蓋旋開半圈〕。24h后即可對細(xì)胞的生長情況進(jìn)行觀察記錄。當(dāng)細(xì)胞長成單層后即可用于接種或凍存。實驗操作本卷須知1.用電平安2.操作儀器平安3.及時標(biāo)準(zhǔn)記錄HeLa細(xì)胞傳代培養(yǎng)實驗原理細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已根本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代〔再培養(yǎng)〕。

傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同