紫外分光光度法檢測規(guī)程

紫外分光光度法檢測規(guī)程目的：程序：方式，本法在藥品查驗(yàn)中要緊用于藥品的區(qū)分、檢查和含量測定。. 或百分吸取系數(shù)求算出被測物質(zhì)的含量，多用于制劑的含量測定。. 對物質(zhì)定性可用吸取峰波長或吸取度比值作為區(qū)分方式；假設(shè)化合峰處化合物無吸取，那么可用本法作雜質(zhì)檢查。生的，合物分子構(gòu)造中如含有共軛體系、芳香環(huán)或發(fā)色基團(tuán)，都可在近紫外區(qū)〔200-400nm〕或可見光區(qū)〔400-850nm〕產(chǎn)生吸取。通常利用的紫外分光光度190—900nm，因此又稱紫外—可見分光光度計(jì)。紫外吸取的吸取定律，它是紫外分光光度法定量分析的依據(jù)，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=lg

1 T式中：A為吸取度T為透光率E為吸取系數(shù)C為溶液濃度L為光路長度如溶液的濃度〔C〕1〔g/m，光路長度〔〕1cm，相應(yīng)的吸取系E表示。假設(shè)溶液的濃度〔C〕為摩爾濃度〔mol/，１ｃｍ光路長度為1cm時，那么相應(yīng)吸取系數(shù)為摩爾吸取系數(shù)，以ε來表示。. 儀器：. 系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處置系統(tǒng)等部份組成。即氘燈和碘鎢燈，前者用于紫外區(qū)，后者用于可見光區(qū)。透鏡或反射鏡等組成，色散元件有棱鏡和光柵二種，棱鏡多用自然石英或熔融硅石制成，對200—400nm波長光的色散力量很強(qiáng)，對600nm以上波長的光色散力量較差，用，故常稱為衍射光柵，光柵光譜是按波長作線性排列，故為勻排光譜，雙光束儀器多用光柵為色散元件。. 檢測器有光電管和光電倍增管二種。替切換光路，使光分成樣品〔S〕和參比〔R〕兩光束，并前后抵達(dá)檢測器，檢見，仍宜用固定波長測量方式。. 紫外分光光度計(jì)的檢定：. 波長準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確度350nm處±，500nm處±，700nm處±。波長準(zhǔn)確度檢定方式：.. 用低壓汞燈檢定，關(guān)閉光源，將汞燈〔用筆式汞燈最便利〕直接對準(zhǔn)進(jìn)光狹縫，如為雙光束儀器，用單光束能量測定方式，承受波長掃描方式，掃描速〔如15nm/min〔如〕量程0—100%，在3次，由儀器識別記錄各峰值〔假設(shè)儀器無“峰檢測”功能，必要時可對指定波進(jìn)步行“單峰”掃描。單光束儀器以751G型為例，可將選擇開關(guān)放在×位置，透光率讀數(shù)放在100〔或選擇開關(guān)放在×1，10，關(guān)小狹縫，翻開光閘門，緩緩轉(zhuǎn)動波長盤，查找汞燈峰顯現(xiàn)的條譜線與儀器波長讀數(shù)的誤差。用于檢定紫外—可見分光光度計(jì)的汞燈譜線波、、、、〔紫色〔藍(lán)色〔綠色、〔黃色查對，3次。氣，按、、、、波優(yōu)勢有鋒利的吸取同，應(yīng)利用經(jīng)計(jì)量部門校驗(yàn)過的。外分光10%氧化鈥〔HO23，配成4%溶液即得。高氯酸鈥溶液較強(qiáng)的吸取峰波長、、、、后而非真實(shí)波長，為了準(zhǔn)確測定，建議承受定點(diǎn)檢定而不用掃描方式。. 12060mg，1000ml〔L〕1000ml1cm石英池，以硫酸液〔L〕為空白，在235、257、313、350nm別離測定吸取度，然后換算E，測得值應(yīng)符合下表中規(guī)定的允差范圍〔1。國際藥典規(guī)定的允差亦１ｃｍ為±1%。波長〔nm波長〔nm〕吸取度強(qiáng)度允差范圍１ｃｍ235最小—257最大—313最小—350最大—和國國家計(jì)量檢定規(guī)程JJG682—90《雙光束紫外可見分光光度計(jì)檢定規(guī)程》執(zhí)行，并符合有關(guān)項(xiàng)下的規(guī)定。日常常規(guī)測定主假設(shè)是對以上兩項(xiàng)時常檢查。. 樣品測定操作方式：. 吸取系數(shù)測定〔性狀項(xiàng)下液，在規(guī)定的波優(yōu)勢測吸取度，并計(jì)算吸取系數(shù)，應(yīng)符合規(guī)定范圍。. 區(qū)分及檢查：按各該品種項(xiàng)下規(guī)定的方式，測定供試品溶液在有關(guān)波優(yōu)的比值，均應(yīng)符合規(guī)定。. 含量測定：.1. 品溶液，比照品溶液中所含被測成份的量應(yīng)為供試品溶液中被測成份標(biāo)示量的〔100±10〕%之內(nèi)，用同一溶劑，在規(guī)定的波優(yōu)勢測定供試品溶液和比照品溶液的吸取度。.2. 收系數(shù)測定法”的規(guī)定進(jìn)展。.3.檢定。.留意事項(xiàng)：. 試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后利用。. %以下者可配對利用，不然必需加以校正。.取吸取池時，手指拿毛玻璃面的雙側(cè)。裝盛樣品溶液，以池體積的4/5的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸取池放入樣品室時應(yīng)留意每次放入方向一樣。用硫酸，發(fā)煙硝酸〔3：1V/V〕混合液略加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔壞吸取池的光學(xué)外表，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸取池外表。. 測定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長四周是不是符合要規(guī)定。以空氣為空白測定溶劑在不同波優(yōu)勢的吸取度的規(guī)定波長范圍〔nm〕 220—240 241—250 251—300 300以上吸取度 < < < <每次測按時應(yīng)承受同一廠牌批號，混合均勻的一批溶劑。. 稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時，稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少；5ml2份，如為比照22%1份。. 供試品測試液的濃度，除各該品種項(xiàng)下已有注明外，供試品溶液的吸取圍，配制適合的讀數(shù)濃度。. 選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品的吸取帶的半寬度，不然測得的吸取度會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸取度再也不增加為2nm縫寬，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸取度檢查那么用1nm縫寬或更窄，不然其264nm的吸取度會偏低。5.6.8. 2nm度，以1nm試樣的同一性、純度和儀器波長的準(zhǔn)確度。結(jié)果計(jì)算：. 的濃度以正比法算出供試品溶液的濃度，再計(jì)算含量。A ：A =C ：C樣 對 樣 對C =A /A ×C樣 樣 對 對式中：A為吸取度值；C為測試液濃度〔mg/ml計(jì)。. 吸取系數(shù)法：中國藥典規(guī)定的吸取系數(shù)，系指１ｃｍ1cm1%〔g/ml〕時的吸取度值，故應(yīng)先求出被測１ｃｍ

A=———CL式中：A為供試品溶液測得的吸取度值；C100ml中所含溶質(zhì)的克數(shù)；L為吸取池的光路長度〔c；供試品的含量%=

樣品〕

×100%樣品標(biāo)準(zhǔn)

為藥典或標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的百分吸取系數(shù)。. 吸取系數(shù)測定法：本法要緊用于品種的吸取系數(shù)測定。. 測定方式：取精制樣品，周密稱取必定量，使樣品溶液配成吸取度讀數(shù)1cm吸取池中，在規(guī)定波優(yōu)勢按項(xiàng)的規(guī)定測出讀數(shù)，然后再用同批溶劑將其稀釋1倍，使吸取度在—之間，再按上述方式測定。樣品應(yīng)同時測定2份，同一臺儀器測定的2份間相對誤差應(yīng)不超過±%，不然應(yīng)重測。測按時先4臺不同型號的儀器復(fù)測。吸取系數(shù)可依照比耳—朗伯定律求算，以下例說明：ε某化合物的分子量為287，用乙醇配成濃度為%的溶液，在波長297nmε處，用1cm石英池，測得吸取度為，求E１％值及克分子吸取系數(shù) 值。１ｃｍE％297A/CL= =205１ｃｍε=A/CL= =5873297nm.

1000100 1287.