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血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餛水,同時(shí)用玻璃棒攪拌,過(guò)濾后收集濾提取的DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取,進(jìn)行充分的攪拌和研磨,過(guò)濾后收集研磨液。2.去除濾液中的雜血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餛水,同時(shí)用玻璃棒攪拌,過(guò)濾后收集濾提取的DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取,進(jìn)行充分的攪拌和研磨,過(guò)濾后收集研磨液。2.去除濾液中的雜其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī)在溶液中,DNA鏈略帶負(fù)電荷,而鹽離子可被吸引到DNA勺負(fù)電荷上,中和這些負(fù)電荷只要控制鹽的濃度,就能夠使DNM段或者散開(kāi),或者聚合在一起,因此,食鹽能保持溶液中的濃度與細(xì)胞液相當(dāng)。DNM溶于酒精,但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理,就可以用酒精萃取DNADNM二苯胺作用生成藍(lán)色沉淀,即可觀察到。提取生物大分子的基本思路是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對(duì)于DNA勺粗提取而言,就是要利用DNA兩RNA蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異,提取DNA去除其他成分。DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,利用這一特點(diǎn),選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解,而使雜質(zhì)沉淀,或者相反,以達(dá)到分離目的。此外,DNM溶于酒精溶液,但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理,可以將DNM蛋DNA對(duì)酶高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白質(zhì),但是對(duì)DN應(yīng)有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80oC的高溫,而DNM80oC以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜,但對(duì)DN應(yīng)有影響。DNA的鑒定在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色,因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑實(shí)驗(yàn)用具斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平。95%酉精、蒸餛實(shí)驗(yàn)材料的選取凡是含有DNA勺生物材料都可以考慮,但是使用DNA^量相對(duì)較高的生物組織,成功原理①加入蒸餛水能使雞血細(xì)胞破裂蒸餛水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體,水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi),使血細(xì)胞脹可能含有核蛋白、多糖和RNA?雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)步驟1.可能含有核蛋白、多糖和RNA?雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)步驟1.破碎細(xì)胞,獲,或者相反,以達(dá)到分離目的。此外,DNM溶于酒精溶液,但是細(xì)被染成藍(lán)色,因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑實(shí)驗(yàn)用具洋蔥或進(jìn)一步的分離。DNA對(duì)酶高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白裂,再加上攪拌的機(jī)械作用,就加速了雞血細(xì)胞的破裂出DNA②加入洗滌劑和食鹽的作用洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細(xì)胞膜,有利于(細(xì)胞膜和核膜的破裂),從而釋放DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA勺溶解。③研磨不充分,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA#放不完全,提取的DNA1變少,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?可能含有核蛋白、多糖和RNA?雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)步驟1.破碎細(xì)胞,獲取含DNA勺濾液動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易,以雞血細(xì)胞為例,在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餛水,同時(shí)用玻提取洋方案一的原理是DN"不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì),不分解DNA方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA勺變性溫度不同。注意事項(xiàng)①用高鹽濃度的溶液溶解DNA能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNAtDNA容解度不同的多種雜質(zhì)。②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNM蛋白質(zhì)分開(kāi);方案三利用的是DN倚口蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA>離。DNA的析出與鑒定l/L的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻質(zhì)蛋白,從而使提取的DNM蛋白質(zhì)分開(kāi);方案三利用的是DNl/L的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻質(zhì)蛋白,從而使提取的DNM蛋白質(zhì)分開(kāi);方案三利用的是DN倚口可能含有核蛋白、多糖和RNA?雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)步驟1.破碎細(xì)胞,獲A勺生物材料都可以考慮,但是使用DNA^量相對(duì)較高的生物組織中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物,這就是粗提取的DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取上面的水分。支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。
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