藥流宮血安對藥流后子宮出血的影響

藥流宮血安對藥流后子宮出血的影響

子宮血安是由花媒石、三七、母字和兔蠶絲籽制成的。具有消除淤血、強腎調(diào)經(jīng)等功效。它對月經(jīng)和藥物流產(chǎn)后的子宮出血也很有效。我們研究了藥流宮血安的止血、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用,為該藥的臨床研究提供依據(jù)。1云南白藥、米非司酮、益母草浸膏藥流宮血安,飛鷹公司研制的治療藥流后子宮出血的新藥,批號:990413。云南白藥,消炎痛,己烯雌酚注射液,米非司酮,益母草浸膏,縮宮素注射液,子宮肌蓄養(yǎng)液(NaCl9g、KCl0.4g、CaCl20.06g、葡萄糖0.5g、NaHCO30.5g,全量100mL)。1.2實驗動物2方法和結(jié)果2.1流宮血安脈劑對止血作用的研究2.1.1云南白藥出血時間測定取健康小鼠50只,雌雄各半,隨機分為5組,藥流宮血安給藥組分別ig給予原料浸膏8.6,17.2,34.4g生藥/kg,陽性對照組給予云南白藥1g/kg(20mL/kg),空白對照組給予同體積生理鹽水,連續(xù)5d,于末次給藥后30min,以利剪在距小鼠尾尖0.5cm處橫斷,血液自行流出后計時,每隔15s用濾紙吸取血滴1次,直至自然停止,計算出血時間,結(jié)果見表1。結(jié)果表明,給藥5d后,藥流宮血安原料浸膏17.2,34.4g生藥/kg組與對照組比較,其出血時間均明顯縮短,并有明顯的量效關(guān)系。2.1.2藥流宮血安檢測小鼠凝血時間取健康小鼠(雌雄各半)及受孕小鼠各50只,隨機分為5組,每組10只。正常小鼠分組及用藥同2.1.1。受孕小鼠于孕第7天ig給予米非司酮12.5mg/kg(10mL/kg)造成流產(chǎn),并于造型當日開始給藥,藥流宮血安給藥組劑量同2.1.1,連續(xù)5d至孕第11天。健康及藥流后小鼠均于末次給藥后30min,眼內(nèi)眥球靜脈叢取血,自血液滴在玻片上開始計時,每隔30s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次,觀察到挑起血絲為止,計算凝血時間,結(jié)果見表2。結(jié)果表明,給藥5d后,陽性對照組凝血時間與對照組相比明顯縮短(P<0.01),而藥流宮血安對健康及孕流后小鼠的凝血時間并無明顯影響。2.2不同濃度蓄養(yǎng)液對正常宮理率和前藥間隔時間的影響取雌性未孕大鼠,實驗前24～48h按0.2mg/100g體重sc己烯雌酚,實驗時將離體子宮放入盛有20mL蓄養(yǎng)液的浴槽中,另一端與肌力換能器相連。恒溫水浴保持溫度在(37±0.5)℃,并不斷向蓄養(yǎng)液中通氣。給藥前記錄一段正常子宮收縮曲線后,每次加入不同濃度藥液0.2mL,記錄給藥后的子宮收縮曲線,相鄰兩次給藥間隔時間為10min,結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明,藥流宮血安對正常大鼠離體子宮平滑肌均有明顯的收縮作用,且其收縮作用隨劑量加大而增強。2.3動物單次給藥后大鼠精子濕重變化選用雌性性成熟小鼠,乙醚麻醉后取俯位,于背部脊柱兩側(cè)肋下做縱切口,摘取兩側(cè)卵巢。術(shù)后1周開始每日做陰道涂片檢查陰道上皮周期性變化情況,連續(xù)檢查5d,未呈現(xiàn)動情期變化的小鼠作為手術(shù)合格動物。將去勢合格的動物隨機分為5組,每組10只,給藥組分別ig藥流宮血安原料浸膏8.6,17.2,34.4g生藥/kg(20mL/kg),空白對照ig同體積的生理鹽水,陽性對照每只小鼠sc己烯雌酚0.2mL,連續(xù)5d。自給藥之日起,每天做陰道涂片檢查動情周期轉(zhuǎn)換情況,5d后處死小鼠,解剖檢查每只動物的子宮積液和水腫情況,稱量子宮濕重后,將子宮放在10%福爾馬林液中固定,石蠟包埋,自子宮輸卵管端向子宮體方向于不同位置作切片。每側(cè)子宮取4片,每只子宮共做8個切片,H.E染色后,于顯微鏡下用測微尺測量子宮上皮細胞的增生高度(每只子宮兩側(cè)共測量40個位點,所得平均值作為該子宮上皮細胞的平均高度)及基質(zhì)細胞層的厚度(每只子宮測量8個位點,所得平均值作為該子宮上皮細胞的高度)。2.3.1動情期的變化結(jié)果見表4。空白對照組動物均未呈現(xiàn)動情周期變化,而陽性對照組在給藥后第3天即有從動情周期轉(zhuǎn)入動情期的變化,至第5天所有動物均呈現(xiàn)或呈現(xiàn)過動情期變化;藥流宮血安各劑量組小鼠在給藥后的陰道涂片檢查中,均呈現(xiàn)過上皮細胞增多的變化,但未出現(xiàn)轉(zhuǎn)入動情期的角化上皮改變。2.3.2藥流宮血安對小鼠精子體重的影響結(jié)果見表5。藥流宮血安各劑量組小鼠在給藥5d后解剖,取子宮稱重,各組子宮體重比明顯大于對照組,表明藥流宮血安具有使去勢小鼠子宮增重的作用,顯示一定的類雌激素樣作用。2.3.3藥流宮血安治療藥物致皮細胞高度變化在己烯雌酚的作用下,小鼠子宮上皮細胞高度明顯增大,基質(zhì)細胞層厚度明顯增寬;藥流宮血安各劑量組均可使子宮上皮細胞高度明顯增加,而基質(zhì)細胞層厚度變化不明顯(P>0.05)。藥流宮血安各劑量組可使子宮上皮細胞增生,顯示具有一定的類雌激素樣作用,結(jié)果見表6。2.4子宮出血量測定取健康小鼠,雌雄按2∶1比例合籠交配,次日晨雌鼠作陰栓檢查,以查到陰栓為受孕第1天。將查到陰栓的受孕小鼠隨機分為5組,每組10只,于受孕第7天造型,ig米非司酮12.5mg/kg,體積為10mL/kg,同時每鼠于陰道內(nèi)置入定量海綿(0.032～0.035g),造型當日給藥,給藥組分別ig藥流宮血安原料浸膏8.6,17.2,34.4g生藥/kg(10mL/kg),空白對照給予同體積的生理鹽水,陽性對照給予益母草浸膏6g/kg,連續(xù)5d。每日更換海綿,觀察記錄每鼠子宮出血情況,并將取出的海綿裝入玻璃小瓶密閉冷藏,連續(xù)收集至受孕第11天。受孕第12天眼眶取靜脈血20μL,加入4mL5%NaOH溶液中,并以5%NaOH溶液為空白對照,用HITACHIU-1100型紫外分光光度計于545nm波長下,測定靜脈血吸光度(A),取血后將小鼠處死,取出子宮放入10%福爾馬林液中固定,H.E染色,進行組織學(xué)檢查。將第鼠連續(xù)收集的海綿加入適量的5%NaOH溶液浸提24h后,測定子宮出血A值,按下式計算自造型日起5d內(nèi)的子宮出血總量。式中:V1為稀釋靜脈血所用5%NaOH量(mL)V2為浸提子宮血所用5%NaOH量(mL)實驗結(jié)果見表7。病理組織學(xué)檢查,對照組流產(chǎn)子宮的宮腔擴大,內(nèi)、系膜動靜脈擴張,肌層較薄。而與對照組相比,給藥組流產(chǎn)子宮宮腔縮小,內(nèi)膜區(qū)動、靜脈收縮,肌層致密、增厚,腺體增生。結(jié)果表明,藥流宮血安具有減少藥流后小鼠子宮出血量并促進流產(chǎn)子宮復(fù)原的作用。2.5流暢宮血安的抗炎作用2.5.1給藥、大鼠消炎痛試驗取健康小鼠50只,雌雄各半,隨機分為5組,每組10只,給藥組分別ig藥流宮血安原料浸膏8.6,17.2,34.4g生藥/kg(20mL/kg),陽性對照組給予消炎痛10mg/kg,空白對照給予同體積的生理鹽水,連續(xù)5d,于末次給藥后45min,于一側(cè)耳殼正、反兩面均勻涂抹二甲苯0.05mL,40min后處死動物,沿耳廓基線剪下兩耳,于同一部位用直徑7mm的打孔器沖下耳片,稱重,以兩耳片重量差為腫脹指標,各給藥組的腫脹抑制率見表8。2.5.2連續(xù)給藥大鼠水腫抑制率測定將Wistar大鼠(190～210g)用乙醚麻醉,于下腹正中做一2cm切口,暴露子宮,沿左側(cè)子宮角上1cm處作一橫切口,將一塑料管(管徑2mm,長0.5cm,重11mg,酒精消毒)放置于子宮內(nèi),并與子宮切口縫合固定以防脫落。取手術(shù)成功大鼠50只,隨機分為5組,每組10只,術(shù)后2h開始ig給藥,分組及劑量同2.5.1,連續(xù)5d,陽性對照連續(xù)給藥3d,于末次給藥后1h乙醚麻醉處死動物,取出兩側(cè)子宮稱重,以兩側(cè)子宮重量差為腫脹度值,計算各給藥組的腫脹抑制率,見表9。藥流宮血安17.2g生藥/kg以上劑量對異物埋置致大鼠子宮炎癥有明顯的抑制作用。2.6連續(xù)給藥后扭體反應(yīng)次數(shù)觀察對ip醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響。取健康小鼠50只,雌雄各半,分組及給藥劑量同2.5.1,連續(xù)5d,陽性對照連續(xù)給藥3d,于末次給藥后60min,ip0.6%醋酸溶液0.4mL,注射5min后開始計時,觀察15min內(nèi)各組動物產(chǎn)生扭體反應(yīng)的次數(shù),結(jié)果見表10。3子宮出血藥藥流宮血安ig給藥,可明顯縮短小鼠出血時間并減少藥物流產(chǎn)后小鼠子宮出血量,其作用主要通過收縮子宮平滑肌,同時表現(xiàn)輕微類雌激素樣作用,使子宮內(nèi)膜區(qū)動、靜脈收縮