陽離子交換柱使用手冊

陽離子交換柱使用手冊ChrompackHPLCIonoSpherCColumns注意ChrompackIonoSpherC色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會(huì)溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。在使用這個(gè)柱子之前，你要充分地熟悉這本手冊講述的內(nèi)容。1．

簡介ChrompackIonoSpherC柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽離子交換材料，含有磺酸鹽功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無機(jī)陽離子。2．

色譜柱老化在開始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過正確的老化。一個(gè)沒有正確老化的柱子可能會(huì)帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測試過并進(jìn)行了老化。因此沒有必要在第一次使用時(shí)用水沖洗）。3．

洗脫液推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽離子。絕對不能使用水楊酸緩沖液，因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過濾，防止發(fā)生檢測和泵送問題。一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長，否則你的柱子會(huì)堵塞，柱壓會(huì)升高到無法接受的水平。4．

流量和壓力柱內(nèi)徑（毫米）流速（ml/min）最佳最高2.00.21.03.00.42.04.61.04.010.04.718.0注意：最高壓力：不銹鋼柱：4500psi；玻璃柱：3000psi增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動(dòng)。如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液完全流出柱子為止（2分鐘）。拆除柱子而沒有等待壓力的降低會(huì)損壞柱子。高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。使用保護(hù)柱（見第6節(jié)）會(huì)防止污染物沉積在分析柱上。5．

樣品處理保持柱子長壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?與流動(dòng)相極性差別很大的化合物泵入色譜柱，不管是來自流動(dòng)相還是樣品。特別地，要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì)。這些最終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。6．

保護(hù)柱一定要使用保護(hù)柱，因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對于ChromSep柱我們建議使用ChromSepCation交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時(shí)候就需要更換保護(hù)柱了。對于常用不銹鋼柱，我們建議使用ChromguardCationexchangeHighEfficiency（高效）柱(10X3.0mm)或HighCapacity（高容量）柱(50X3.0mm)。7．

進(jìn)樣量和濃度柱尺寸長度*內(nèi)徑最大樣品體積250×2.0mm±10μl200×3.0mm±15μl250×4.6mm±50μl250×10.0mm±250μl當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低（在柱樣品預(yù)濃縮）的時(shí)候，更高的樣品量也可以注射。8．

溫度ChrompackIonoSpherC柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40°9．

貯存在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。10．

檢測靈敏度對于陽離子的檢測，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液。11．柱效損失的可能原因1．

額外的峰展寬。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持最小。2．

洗脫的平衡時(shí)間不夠。3．

不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度。4．

洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。5．

固定相污染。a.

高柱壓伴隨分辨率降低。1．

顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。（a）樣品來源---過濾或離心（b）洗脫液來源---過濾洗脫液，封閉洗脫液容器。（c）系統(tǒng)來源---沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵；安裝在線系統(tǒng)過濾器。2．

蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚（a）微生物在樣品中生長。（b）微生物在洗脫液中生長。b.

正常柱壓伴隨柱效降低1．

有機(jī)污染（a）

樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。（b）

從樣品中帶來的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。（c）

在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來。12.對于糾正污染問題的可能有效的操作1．

準(zhǔn)備新鮮的洗脫液在很多情況下，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準(zhǔn)備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應(yīng)當(dāng)用0.2到0.4微米的濾膜過濾，在使用以前要脫氣。2．

色譜柱再生要進(jìn)行色譜柱的再生工作a．

首先倒轉(zhuǎn)色譜柱b．

以0.4ml/min的流速用1M硝酸銨洗脫30ml。c．

以0.4ml/min的流速用40：60（v：v）的甲醇/水洗脫30ml。d．

以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml。e．

以0.4ml/min的流速用水洗脫30ml。f．

以0.4ml/min的流速用洗脫液洗脫30ml。g．

將柱子轉(zhuǎn)回正常方向。用洗脫液平衡。陽離子交換柱使用手冊（ChrompackHPLCIonoSpherCColumns）注意ChrompackIonoSpherC色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會(huì)溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。在使用這個(gè)柱子之前，你要充分地熟悉這本手冊講述的內(nèi)容。1.簡介ChrompackIonoSpherC柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽離子交換材料，含有磺酸鹽功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無機(jī)陽離子。2.色譜柱老化在開始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過正確的老化。一個(gè)沒有正確老化的柱子可能會(huì)帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測試過并進(jìn)行了老化。因此沒有必要在第一次使用時(shí)用水沖洗）。3.洗脫液推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽離子。絕對不能使用水楊酸緩沖液，因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過濾，防止發(fā)生檢測和泵送問題。一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長，否則你的柱子會(huì)堵塞，柱壓會(huì)升高到無法接受的水平。4.流量和壓力柱內(nèi)徑（毫米）流速（ml/min）最佳最高2.00.21.03.00.42.04.61.04.010.04.718.0注意：最高壓力：不銹鋼柱：4500psi；玻璃柱：3000psi增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動(dòng)。如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液完全流出柱子為止（2分鐘）。拆除柱子而沒有等待壓力的降低會(huì)損壞柱子。高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。使用保護(hù)柱（見第6節(jié)）會(huì)防止污染物沉積在分析柱上。5.樣品處理保持柱子長壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?與流動(dòng)相極性差別很大的化合物泵入色譜柱，不管是來自流動(dòng)相還是樣品。特別地，要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì)。這些最終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。6.保護(hù)柱一定要使用保護(hù)柱，因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對于ChromSep柱我們建議使用ChromSepCation交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時(shí)候就需要更換保護(hù)柱了。對于常用不銹鋼柱，我們建議使用ChromguardCationexchangeHighEfficiency（高效）柱(10X3.0mm)或HighCapacity（高容量）柱(50X3.0mm)。7.進(jìn)樣量和濃度柱尺寸長度*內(nèi)徑最大樣品體積250×2.0mm±10μl200×3.0mm±15μl250×4.6mm±50μl250×10.0mm±250μl當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低（在柱樣品預(yù)濃縮）的時(shí)候，更高的樣品量也可以注射。8.溫度ChrompackIonoSpherC柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40°C以上使用。9.貯存在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。10.檢測靈敏度對于陽離子的檢測，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液。11．柱效損失的可能原因1)額外的峰展寬。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持最小。2)洗脫的平衡時(shí)間不夠。3)不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度。4)洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。5)固定相污染。a.高柱壓伴隨分辨率降低。1]顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。（a）樣品來源---過濾或離心（b）洗脫液來源---過濾洗脫液，封閉洗脫液容器。（c）系統(tǒng)來源---沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵；安裝在線系統(tǒng)過濾器。2]蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚（a）微生物在樣品中生長。(b)微生物在洗脫液中生長。b.正常柱壓伴隨柱效降低1]有機(jī)污染（a）樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。（b）從樣品中帶來的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來。12.對于糾正污染問題的可能有效的操作1)準(zhǔn)備新鮮的洗脫液在很多情況下，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準(zhǔn)備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應(yīng)當(dāng)用0.2