復(fù)方利血平片中4種成分的含量測(cè)定

復(fù)方利血平片中4種成分的含量測(cè)定

利血平片是治療早期和中期高血壓的多組藥物的制劑。這些化合物復(fù)雜，主要包括利血平、鹽酸異丙基吡啶、羥色胺、硫酸二甲酯、維生素b1、維生素b2、泛酸鈣、三氟酸鎂和氯化鉀?，F(xiàn)行的藥典標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)單一組分的測(cè)定作了規(guī)定,未對(duì)多組分的測(cè)定制定標(biāo)準(zhǔn),也有研究人員對(duì)其含有的部分成分的測(cè)定進(jìn)行了研究。但是其檢測(cè)方法存在同時(shí)測(cè)定的組分少、條件復(fù)雜、分離度低等不足。藥學(xué)實(shí)踐中迫切需要對(duì)其中的成分進(jìn)行快速、準(zhǔn)確定量的分析方法。本研究針對(duì)復(fù)方利血平片中的氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、維生素B1和維生素B6進(jìn)行了定性定量研究,建立了復(fù)方利血平片中氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、維生素B1和維生素B6含量測(cè)定的高效液相色譜法。此方法簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可為復(fù)方利血平片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供參考。1實(shí)驗(yàn)部分1.1藥品化學(xué)品氫氯噻嗪對(duì)照品(批號(hào)100309-201103)、硫酸雙肼屈嗪(批號(hào)100514-200301)、維生素B1(批號(hào)100390-200703)、維生素B6(批號(hào)100116-201103)均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;復(fù)方利血平片(批號(hào)120315、120510、120611),上海信誼嘉華藥業(yè)有限公司;乙烷磺酸鈉、乙腈、甲醇、冰醋酸均為色譜純;磷酸,分析純;去離子水。LC-20AT液相色譜儀,包括DGU-20A5脫氣器、LC-20AT泵、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A柱溫箱、SPD-20AUV/VIS檢測(cè)器和LCsolution工作站。1.2溶液制備1.2.1維生素b、c、e的對(duì)照精密稱取氫氯噻嗪對(duì)照品124.0mg,置于100mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液溶解,并定容搖勻,作為對(duì)照(1);精密稱取硫酸雙肼屈嗪對(duì)照品42.0mg,置于100mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液溶解,并定容搖勻,作為對(duì)照(2);精密稱取維生素B1對(duì)照品10.0mg,置于100mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液溶解,并定容搖勻,作為對(duì)照(3);精密稱取維生素B6對(duì)照品10.0mg,置于100mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液溶解,并定容搖勻,作為對(duì)照(4)。精密量取對(duì)照(1)、(2)、(3)、(4)各5mL置于25mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液稀釋并定容、搖勻,作為對(duì)照液。1.2.2供試品溶液制備取復(fù)方利血平片20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取約180.0mg,置于100mL容量瓶中,加入0.1%磷酸溶液超聲3min溶解并定容,搖勻,用0.45μm的微孔過(guò)濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。1.3流動(dòng)相vd色譜柱KromasilC-18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),檢測(cè)波長(zhǎng)210nm,以0.2%己烷磺酸鈉(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=3.5)-甲醇-乙腈(75∶20∶5)為流動(dòng)相,流速1.0mL/min,進(jìn)樣量20μL,柱溫30℃。2結(jié)果與討論2.1保留時(shí)間的確定分別進(jìn)樣對(duì)照液、供試品溶液和空白溶液各20μL,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,見(jiàn)圖1。由圖1可知,4個(gè)組分的保留時(shí)間分別為氫氯噻嗪7.009min,維生素B68.918min,硫酸雙肼屈嗪24.532min,維生素B129.113min。氫氯噻嗪與維生素B6、硫酸雙肼屈嗪與維生素B1的分離度好,均大于4.0,理論塔板數(shù)均大于9000。2.2磷酸溶液的配制分別精密量取上述對(duì)照(1)溶液1,3,5,7,8,10mL,各加0.1%的磷酸溶液稀釋定容到25mL;分別精密量取上述對(duì)照(2)、(3)、(4)溶液1,3,5,10,15,20mL,各加0.1%的磷酸溶液稀釋定容到25mL,搖勻,進(jìn)樣20μL進(jìn)行測(cè)定。以濃度X對(duì)色譜峰面積Y進(jìn)行線性回歸,得到氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、維生素B1和維生素B6的線性回歸方程分別為:Y=37817X-132740R2=0.9994Y=400412X-98715R2=0.9993Y=100556X-184539R2=0.9987Y=423051X-909062R2=0.9991氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、維生素B1和維生素B6分別在49.6～496.0μg/mL,16.8～336.0μg/mL,4.0～80.0μg/mL,4.0～80.0μg/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.3以峰面積計(jì)算檢測(cè)nsd各品種含量取對(duì)照品溶液,以上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6針,以峰面積計(jì)算,RSD值氫氯噻嗪為0.12%,硫酸雙肼屈嗪為0.06%,維生素B1為0.56%,維生素B6為0.23%。2.4重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為120611的復(fù)方利血平片,按上述供試品溶液制備方法制備6份,按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,RSD值氫氯噻嗪為0.45%、硫酸雙肼屈嗪為0.21%、維生素B1為0.96%、維生素B6為0.78%,結(jié)果表明此方法重復(fù)性很好。2.5微生物過(guò)濾膜過(guò)濾法取批號(hào)為120611的復(fù)方利血平片20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取每份約180.0mg共9份,分別置于100mL容量瓶中,分別精密量取對(duì)照(1)2,2.5,3mL,對(duì)照(2)、(3)、(4)8,10,12mL,每個(gè)3份,加入0.1%磷酸溶液超聲3min溶解并定容,搖勻,用0.45μm的微孔過(guò)濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣測(cè)定。平均回收率氫氯噻嗪99.74%(RSD=0.78%),硫酸雙肼屈嗪99.83%(RSD=0.08%),維生素B199.02%(RSD=1.13%),維生素B699.56%(RSD=0.48%)。2.6進(jìn)樣測(cè)定取批號(hào)為120611的供試品溶液,分別在0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12h,按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,RSD值氫氯噻嗪為0.72%,硫酸雙肼屈嗪為0.43%,維生素B1為1.13%,維生素B6為0.83%。表明了供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.7樣品含量的測(cè)量取上述3批復(fù)方利血平片,按照供試品溶液制備方法制備,進(jìn)樣20μL測(cè)定,重復(fù)測(cè)定5次,結(jié)果見(jiàn)表1。3色譜條件的完善(1)復(fù)方利血平片是一種成分復(fù)雜的制劑,藥物成分多樣,化學(xué)性質(zhì)差異較大,選用0.1%磷酸溶液作為溶劑,保證了氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、維生素B1和維生素B6的溶解度,且溶液穩(wěn)定性好。(2)在色譜條件的建立過(guò)程中增加了離子對(duì)試劑的使用,并調(diào)節(jié)pH至3.5。氫氯噻嗪與維生素B6、硫酸雙肼屈嗪與維生素B1之間均能達(dá)到很好的分離度;峰形對(duì)稱,理論塔板數(shù)高。(3)色譜測(cè)試條件采用等度洗脫的方式,避免使用梯度洗脫法,