外泌體科學研究策略與方法課件

外泌體研究策略外泌體研究策略1目錄、外泌體概述二、外泌研究興起外泌體基礎(chǔ)研究技術(shù)四、外泌體研究策略基本邏輯五、外泌體研究實例目錄2外泌體概述Exosome是直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21日/m1的小囊泡。Exosome天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,外泌體(Eσsome)是活細胞分泌的來源于晩期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性囊泡AK150101Rabs57RabGDISyritenin2RhoGDsRAP18TrapaniTanAAdvanceddrugdeliveryeviews,2019,65(3):357-367外泌體概述3外泌體研究的興起15腫擅轉(zhuǎn)移血管相關(guān)(再生、損傷)藥物送免相興骨損傷、修復(fù)病毒/細菌/寄生蟲感染肌相關(guān)(肥厚、梗死及其并發(fā)癥)化療相關(guān)(抵抗、其他并發(fā)癥)一(腫)耐藥子病/妊識別/胎兒染色體異常生物標志物榜尿病及其并發(fā)癥汁微環(huán)牙周再坐外泌體檢測技術(shù)2018外泌體中標項目研究的主要癌癥種類外泌體研究的興起410mIRNA/小RNAncRNA狀2018外泌體中標項目機制研究涉及的主要非編碼RNA種類105間充質(zhì)干癌細胞血清/血漿巨噬細胞內(nèi)皮細胞其他干細胞尿液2018外泌體中標項目的主要外泌體來源間充質(zhì)干癌細胞血清/血漿巨噬細胞內(nèi)皮細胞其他干細胞尿液6外泌體研究基礎(chǔ)技術(shù)1、外泌體分離1)超速離心2)磁珠免疫捕獲3)沉淀或過濾法,2、外泌體鑒定與定量1)鑒定:電鏡或NTA來分析其大小和形態(tài),流式細胞儀或WB檢測表面標記蛋白esternblot和ELSA檢測TSG101、CD632)定量:NA檢測外泌體數(shù)量,BCA定量檢測蛋白濃度3、外泌體功能研究1)熒光標記外泌體檢測外泌體進入細胞2)常規(guī)實驗:外泌體處理細胞檢測功能3)wB/qPCR/熒光標記技術(shù)檢測外泌體中發(fā)揮關(guān)鍵作用的生物分子在受體細胞胞核、胞質(zhì)以及外泌體中的表達外泌體研究基礎(chǔ)技術(shù)7外泌體研究策略基本邏輯外泌體研究的本質(zhì):供體細胞對受體細胞的功能影響,通過外泌這個介質(zhì)發(fā)揮作用aspanin(CD9,CD63,CD81CytoskeletonproteinsmRNA,MIRNA,LncRNANucleusNucleus99POaMVB④④●(c)EndocytosisJournalofHematologyOncologyDecember2019,8:83外泌體研究策略基本邏輯8外泌體研究基本路線圖相互作用的受/供體細胞的選擇供體細胞外泌體分離和鑒定外泌體對受體細胞功能的影響外泌體能夠影響受體細胞功能的因素:細胞因子、mRNAncRNA、mRNA、circinAl以及其他外泌體研究基本路線圖9外泌體研究整體研究策略1、通常來說只要是涉及到兩種不同細胞甚至同種細胞的兩種不同狀態(tài):癌與正常細胞(癌轉(zhuǎn)化與抑制)、干細胞與高分化細胞損傷與修復(fù))以及功能狀態(tài)細胞與非激活狀態(tài)細胞,就可以設(shè)計外泌體研究方案。2、外泌體研究關(guān)鍵點參與外泌功能的關(guān)鍵生物分子一一細胞因子mRNA、IncANA、mRNA、cirCRNA以及其他。3、外泌體設(shè)計基本思路有:關(guān)鍵生物分子到外泌體或外泌體到關(guān)鍵生物分子。但無論怎樣其核心無法改變一定或有效應(yīng)受體(供體有時會忽略,例如血清來源外泌體等外泌體研究整體研究策略10外泌體科學研究策略與方法課件11外泌體科學研究策略與方法課件12外泌體科學研究策略與方法課件13外泌體科學研究策略與方法課件14外泌體科學研究策略與方法課件15外泌體科學研究策略與方法課件16外泌體科學研究策略與方法課件17外泌體科學研究策略與方法課件18外泌體科學研究策略與方法課件19外泌體科學研究策略與方法課件20外泌體科學研究策略與方法課件21外泌體科學研究策略與方法課件22外泌體科學研究策略與方法課件23外泌體科學研究策略與方法課件24外泌體科學研究策略與方法課件25外泌體科學研究策略與方法課件26外泌體科學研究策略與方法課件27外泌體科學研究策略與方法課件28外泌體科學研究策略與方法課件29外泌體科學研究策略與方法課件30外泌體科學研究策略與方法課件31外泌體科學研究策略與方法課件32外泌體科學研究策