ecanrmp150全自動酶免疫儀穩(wěn)定性評價

ecanrmp150全自動酶免疫儀穩(wěn)定性評價

自動酶標儀在臨床使用中越來越常見。傳統(tǒng)的酶聯免疫計算方法（elisa）逐漸被標準化和自動取代。我科自2005年2月購進瑞士TECAN公司的RMP150型全自動酶免儀,我們對該儀器的性能進行了全面的評價,并對加樣系統(tǒng)運行兩年后的準確性進行了校檢比較,現報告如下。1材料和方法1.1各配套試劑RMP150型全自動酶免儀,瑞士TECAN公司生產。AbbottAXSYM及配套試劑,美國雅培公司生產。空白酶標微孔板條和乙肝五項檢測試劑盒,北京萬泰藥業(yè)有限公司生產。乙型肝炎表面抗原(HbsAg)陰、陽性混合血清及35份標本均來自江蘇省中醫(yī)院臨床病人。1.2方法1.2.1加樣回收及變異度計算用電子天平稱量8根加樣針分別加樣10μl和100μl蒸餾水的重量,每根加樣針重復加樣15次,計算其均值及變異度(CV)值。該儀器使用兩年后用同樣方法測定加樣系統(tǒng)加樣的準確性。1.2.2閱讀方法讀數系統(tǒng)的零點飄移、通道差、孔間差、精密度、線性評價參照文獻方法進行。1.2.3殘液量的測定取三塊空白酶標微孔板(96孔板),先用電子天平稱取重量,再分別用該儀器以蒸餾水洗滌5次后,分別稱取重量,計算洗板后總的殘液量及平均每孔的殘液量。1.2.4陽性標本加樣將HbsAg陽、陰性混合血清各分為3組,每組均為8管,以H表示陽性標本(陽性混合血清測定的吸光度在3.0以上),以L表示陰性標本,使每根加樣針按H1、H2、H3、L1、L2、L3的順序加樣。實驗結果以公式(L1-L3)/H×100%計算污染率。1.2.5測定五項指標AbbottAXSYM儀器對照試驗35份標本,用全自動酶標儀和AbbottAXSYM測定乙肝五項指標,結果進行比較。2結果2.1樣品系統(tǒng)的取樣精度實驗見表1、表2。2.2點飄移a值經測定TECANRMP150型全自動酶標儀的八個通道的零點飄移A值均在±0.003范圍內波動;通道差極差值為0.009,孔間差為±0.005086;線性的回歸方程y=0.9236x+0.0553,r=0.9999;精密度評價結果見表3。2.3清潔板的殘余液量測量三塊空白酶標微孔板用蒸餾水洗滌5次前后的重量及每孔殘液量見表4。2.4樣品和樣品的交叉污染見表5。2.5比較abbottassm儀器的結果見表6。3交叉污染的檢測儀器加樣準確性是保證實驗結果準確性的首要條件,我們用電子天平稱量8根加樣針分別加樣10μl和100μl蒸餾水的重量,重復測定15次,結果表明該儀器的加樣系統(tǒng)加樣的準確性符合設計要求(儀器設計要求加樣10μl的CV值<3%,加樣100μl的CV值<0.5%)。儀器使用兩年后用同樣方法對儀器進行測定,結果仍符合要求(見表1、表2)。零點飄移是評價儀器在一定時間內零點吸光度的變化趨勢,間接地反映了儀器內部檢測系統(tǒng)在一定時間內處于工作狀態(tài)下的穩(wěn)定性,TECANRMP150儀器的八個通道的零點飄移A值在±0.003范圍內波動,反應該儀器光學系統(tǒng)的穩(wěn)定性較好;通道差是儀器的內部固有誤差,是衡量酶標儀性能好壞的重要指標之一,其極差值越接近于零,通道差越小,說明同一樣品在不同通道檢測結果的一致性越好,該儀器的通道差極差值為0.009,孔間差值為±0.005086。同時這三個指標也能評價儀器的機械性能情況,如連續(xù)進板、檢測、退出等,測定的入射光是否對準板孔中央,酶標板移動后位置是否準確等情況。檢測結果表明該儀器的比色系統(tǒng)的內部電路部件、光學部件及機械部件性能良好。批內精密度是由20d中每天2批,每批2次之差經統(tǒng)計學處理后所得的結果;日內批間精密度由20d中每天2批測定結果均值之差經統(tǒng)計學處理后所得的結果;日間精密度表示20d中每天所測均值的標準差,反映了每日均值的離散度;總精密度則是對批內、批間和日間精密度進行加權統(tǒng)計的結果。本實驗的該儀器的批內、日內批間、日間及總精密度小于等1.698%,能滿足臨床工作需要。線性評價是評價儀器的一個重要手段,可顯示分析物濃度與分析系統(tǒng)響應的相關性,其線性越好、線性范圍越廣,則其檢測的可報告范圍也就越廣,檢測結果也就越準確。該儀器于492波長處檢測甲基橙系列溶液,回歸方程Y=0.9236X+0.0553,r=0.9999,反映儀器的線性響應較好。在ELISA法實驗中洗板的好壞及洗板后殘液量的多少直接影響了實驗結果,決定了實驗的成敗。本儀器所特有的洗板機吸針插入反應孔底部兩點吸樣的方式,確保了洗板殘液量少的特性。從表4結果可見,洗板殘液量平均每孔小于0.4μl,該殘液量對檢測結果基本無影響。本次實驗中的交叉污染實驗設計,HbsAg陽、陰性混合血清各3組,每組8管,使儀器的8根加樣針均能連續(xù)3次加高濃度樣品(陽性混合血清的吸光度平均值為3.475)后,連續(xù)3次加低濃度樣品(陰性混合血清的吸光度平均值勤為0.007),并且保證了每根加樣加在同一排,洗板的順序也同樣由高濃度向低濃度。如此設計使實驗不僅反映加樣針所攜帶的標本和試劑交叉污染情況,也能反映洗板機探針引起的污染誤差。本實驗的交叉污染率在0.029%～0.802%內,為可接受的低水平。將TECANRMP150與AbbottAXSYM儀器對照試驗,同時測定了35個臨床標本的乙肝五項指標,總的符合率為96.57%,其中抗HBs和抗HBe分別有一個標本AbbottAXSYM測定為陽性而本儀器測定為陰性,抗HBc有4個標本AbbottAXSYM測定為陽性而本儀器測定為陰性。兩儀器測定結果不相符的6個測試中有4個AbbottAXSYM測定值接近與參考值相近,分別為抗HBs為12mIU/mL(>10mIU/ml為陽性)、抗HBe為0.89S/CO(<1S/CO為陽性)、抗HBc有兩個分別為0.91S/CO和0.82S/CO(<1S/CO為陽性),另2個抗HBc測試TECANRMP150儀測定結果是明顯的假陰性。原因分析,一方面是由于ELISA方法本身的敏感性比AbbottAXSYM差;再者是國產