低ph值對小龍蝦免疫功能及風(fēng)電機(jī)組的影響

低ph值對小龍蝦免疫功能及風(fēng)電機(jī)組的影響

小型紅蝦是科克氏家族的著名繁殖蝦。它的分類屬于節(jié)肢動物門甲殼類動物亞門（crep極小a）硬甲亞門（malaca）本托納（gonada）科。超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase,SOD）是一種金屬酶，在生命體中廣泛存在，是生物體新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)的天然清除劑，在小龍蝦體內(nèi)與其免疫水平密切相關(guān)，能在增強(qiáng)小龍蝦機(jī)體免疫功能的同時加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的防御能力1材料和方法1.1試驗(yàn)材料從桃源小龍蝦養(yǎng)殖基地捕獲小龍蝦1200只，體長3.1～9.5cm，平均6.3cm；體質(zhì)量2.3～6.0g。1.2flh-400氣溶劑TGL-16M高速離冷凍心機(jī)，由天津廣豐科技有限公司提供；Synergy-2酶標(biāo)儀，由美國寶特提供；FLH-300便攜式pH計(jì)，由弗朗電子（大連）有限公司提供；SOD酶檢測試劑盒，由南京建成公司提供；0.1g電子天平、冷藏柜、移液槍等。NaOH溶液，分析純，由滄州倉孟化工產(chǎn)品有限公司提供；1mol/LHCL溶液，由譜焰實(shí)業(yè)（上海）有限公司提供；生理鹽水和蒸餾水。1.3ph值對小龍蝦的影響小龍蝦的養(yǎng)殖在湖南文學(xué)院生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖試驗(yàn)基地進(jìn)行，利用循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)，養(yǎng)殖桶為聚乙烯桶（規(guī)格為直徑850mm、高1000mm），裝水40cm進(jìn)行小龍蝦養(yǎng)殖，水體pH值7.4，用1mol/LHCL和1mol/LNaOH將養(yǎng)殖水體的pH值調(diào)整至6.12、4.42、2.22，以pH值7.4為對照組（CK）。3次重復(fù)。試驗(yàn)前1d停止喂食。將小龍蝦隨機(jī)放入各聚乙烯桶中，每桶放養(yǎng)小龍蝦100只，為模擬生態(tài)環(huán)境，在每桶底部放置盆栽伊樂藻3盆，供小龍蝦棲息，減少自殘，低pH值脅迫時間48h，試驗(yàn)期間不投喂換水。分別在低pH值脅迫的第2、4、8、12、24、48h記錄小龍蝦死亡數(shù)，統(tǒng)計(jì)死亡率，并隨機(jī)抽取10尾，測定SOD活力。1.4sod活力測定隨機(jī)取樣，取出的小龍蝦分別用1mL無菌注射器從其頭胸甲后插入心臟取血0.5mL，放入1.5mL離心管中，置于4℃冰箱中靜置24h后，10000r/min高速冷凍離心8min，分離血清。再用南京建成公司提供的SOD酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測定SOD活力，依據(jù)說明書配制底物應(yīng)用液和酶工作液，各加入20μL在普通一次性96孔微孔板中，37℃孵育20min，酶標(biāo)儀450nm處測定讀數(shù)。在本反應(yīng)體系中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的酶量為一個SOD活力單位。1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用ExcelforWindows對測定數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)顯著水平為P<0.05。2結(jié)果與分析2.1不同ph值對克氏原螯蝦血清超氧化物歧化酶活性的影響由表1可以看出，在低pH值酸性溶液下小龍蝦的超氧化物歧化酶的活性隨時間成正比例下降。試驗(yàn)全過程中，同一時間，pH值越低，SOD活力越弱，說明不同梯度低pH值的酸性溶液能夠明顯降低克氏原螯蝦血液SOD活力。低pH值脅迫2、4h時，SOD活性CK與處理組之間差異不顯著。脅迫8h時，CK與處理組差異顯著（P<0.05),3個處理組之間差異不顯著。脅迫12h時，CK與pH值2.22、4.42的處理組之間有顯著差異（P<0.05),pH值2.22的處理與pH值6.12的處理之間差異顯著（P<0.05），其他各組之間無顯著差異。脅迫24h時，CK與處理組存在顯著差異（P<0.05),3個處理組之間沒有顯著差異。脅迫48h時，CK與處理組間差異顯著（P<0.05),pH值2.22的處理與pH值4.42、6.12的處理之間有顯著差異（P<0.05），其他組間沒有顯著差異。暴露在pH值2.22的酸性溶液中48h，克氏原螯蝦血清的超氧化物歧化酶活性降至CK的65.83%,pH值4.42中的克氏原螯蝦血清的超氧化物歧化酶活性降至CK的76.25%,pH值6.12中的克氏原螯蝦血清的超氧化物歧化酶活性降至CK的91.76%，差異顯著（P<0.05）。由此表明，隨著脅迫時間的延長，超氧化物歧化酶活力數(shù)值越來越低，呈下降趨勢，除pH值6.12的酶活力在24h時達(dá)到最小值外，其他組均在48h到達(dá)到最小值。2.2龍蝦的免疫特性由表2可以看出，在低pH值酸性溶液中養(yǎng)殖的小龍蝦出現(xiàn)個別死亡現(xiàn)象，時間越久，死亡率越高。說明低pH值的酸性溶液對小龍蝦的成長十分不利，其原因可能由于長時間處于酸性溶液破壞了小龍蝦的免疫系統(tǒng)影響小龍蝦自身的有效修復(fù)功能，導(dǎo)致小龍蝦無法有效地抵抗疾病。脅迫8h之前，各組均沒有出現(xiàn)小龍蝦死亡現(xiàn)象。12h時，pH值2.22的處理組出現(xiàn)小龍蝦死亡，死亡率3.33%，其他各組均沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。24h時，除CK外，低pH值的3個處理組均出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，pH值2.22的處理組死亡率比其他處理組高出3.34個百分點(diǎn)。48h時，所有各組均出現(xiàn)死亡，死亡與低pH值脅迫有關(guān)，CK死亡可能與試驗(yàn)未進(jìn)行投餌導(dǎo)致小龍蝦自殘有關(guān)，pH值2.22的處理組死亡率比CK高6.67個百分點(diǎn)，比其他處理組均高3.33個百分點(diǎn)。3低ph值對小龍蝦免疫功能的影響本試驗(yàn)研究了在低pH值連續(xù)作用條件下小龍蝦免疫防御的超氧化歧化酶的活性，結(jié)果表明，當(dāng)養(yǎng)殖水體pH值低于6.12時，小龍蝦活動受到限制，正常的生理活動受到影響。在酸性溶液的持續(xù)作用下，SOD活力和時間成正比下降，不同梯度的低pH值酸性溶液能夠明顯降低小龍蝦SOD活力。各處理組SOD活力除pH值6.12的處理組外，均在48h達(dá)到最小值，可以看出，12h前SOD活力隨著時間越來越低，在12h有所回升，然后又隨著時間下降。暴露在pH值2.22的酸性溶液中48h，小龍蝦血清的SOD活性降至對照組的65.83%,pH值4.42中的小龍蝦血清的SOD活性降至對照組的76.25%,pH值6.12中的小龍蝦血清的SOD活性降至對照組的91.76%，差異顯著（P<0.05），由此表明，低pH值能顯著降低小龍蝦的免疫功能。在低pH值酸性溶液中養(yǎng)殖的小龍蝦出現(xiàn)個別死亡現(xiàn)象，時間越久，死亡率越高。因此，在養(yǎng)殖過程中一定要注意經(jīng)常檢測養(yǎng)殖水水質(zhì)，并且讓養(yǎng)殖水處于循環(huán)狀態(tài)，水體pH值應(yīng)保持在6.12以上，及時調(diào)控，避免不必要的死亡。SOD是一種具有抗氧化功能的防御酶，它在清除小龍蝦體內(nèi)多余自由基的同時讓自由基的形成與消滅處于平衡狀態(tài)，與小龍蝦的免疫水平密切相關(guān)。以長期活性氧自由基作為免疫因子，既可以衡量小龍蝦免疫能力狀態(tài)，也可以預(yù)防疾病，用于實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)。提高小龍蝦的免疫水平，增強(qiáng)機(jī)體的防御能力，可以保護(hù)小龍蝦機(jī)體不受傷害。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在低pH值的脅迫作用下，12h后SOD活力在小龍蝦體內(nèi)減弱極為明顯，表明代謝功能和免疫能力衰弱。朱毅菲在低pH值脅迫條件下，小龍蝦體內(nèi)會產(chǎn)生大量的活性氧自由基，SOD作為小