黑芽苗菜葉綠素提取方法的比較研究

黑芽苗菜葉綠素提取方法的比較研究

黑豆，通常被稱為豆苗。它口感細(xì)膩，營養(yǎng)豐富，鈣、磷、鐵、鉀等礦物和多種維生素。此外，它具有很高的藥用價(jià)值。它又冷又甜。具有活血化瘀、清熱消腫、強(qiáng)肝明目的的功效。更為重要的是黑豆芽富含葉綠素。葉綠素分子結(jié)構(gòu)與人體內(nèi)的血液分子相似,非常易溶入紅細(xì)胞中,能抑制細(xì)菌、排出毒素,有“綠色血液”之稱。研究表明,豆芽中的葉綠素能分解人體內(nèi)的亞硝酸胺,能夠起到預(yù)防直腸癌等多種消化道惡性腫瘤的作用。因此,研究黑豆芽的葉綠素測定提取方法,對于提高其品質(zhì)和黑豆芽葉綠素深度開發(fā)具有重要意義。關(guān)于葉綠素含量測定方法使用較多的是Arnon法,但是Arnon法需要把植物材料研磨和去殘?jiān)?提取時(shí)間長,工作量和操作誤差大。20世紀(jì)80年代初張憲政1材料和方法1.1萬分之一天麻儀器廠黑豆芽購于市場;722型分光光度計(jì):上海光學(xué)儀器廠;萬分之一天平:上海天平儀器廠;丙酮、乙醇:分析純,按體積比配制浸提液:95%乙醇,丙酮∶乙醇=1∶1,80%丙酮分別用A、B、C表示。1.2研磨法和直接浸提法提取葉綠素預(yù)處理樣品,取黑豆芽適量,用紗布或吸水紙吸干表面的水分,將子葉等剪成小于2mm碎條,混勻,分成2份。提取測量,一份在室溫(25℃)下,立即用研磨法和直接浸提法(A、B、C3種提取液)提取葉綠素。其中浸提法,稱取1g處理好的樣品置于50mL容量瓶中加入相應(yīng)提取液,定容,混勻,封口,置于黑暗條件下直接浸提。待組織完全變白,分別在波長663、645、470nm下測定吸光度值。另一份用天平精準(zhǔn)稱取(1g,9份),分別裝袋,密封好,放到冰箱冷凍6h,取出以浸提法測定吸光度值。浸提法、研磨法、冷凍浸提法每個(gè)處理各重復(fù)3次。1.3處理數(shù)據(jù)葉綠素含量的計(jì)算:C2結(jié)果與分析2.1黑麥芽糖葉綠素含量各種方法提取結(jié)果見表1。由表1可見,黑豆芽(不包括胚軸和胚根)葉綠素含量為0.1677mg/g(鮮重),a/b為2.524。2.2研磨法和冷凍浸提法提取葉綠素研磨法、浸提法、冷凍浸提法3種提取方法,對于葉綠素a、b提取結(jié)果表現(xiàn)一致,以冷凍浸提法提取效果最好,其次為研磨法,再次為浸提法(表2)。浸提法提取效果最差,一方面可能提取不完全,也可能在提取的過程中葉綠素有分解,相對冷凍浸提法,由于經(jīng)過了冷凍過程破碎了細(xì)胞,提取完全而且提取過程快減少了葉綠素分解,效果最好。研磨法在研磨、過濾等操作的過程中有損失,而且提取時(shí)間過程長造成弱光下葉綠素的分解,效果不及冷凍浸提法。葉綠素含量提取效果的單變量方差分析,見表3。由表3單變量方差分析表明,葉綠素aSig.=0.749,P>0.05,葉綠素bSig.=0.145,P>0.05,即不同提取方法間差異不顯著。2.3不同提取液提取效果不同提取液提取效果比較,見表4。由表4可見,不同提取液提取效果,對于葉綠素a、b提取結(jié)果表現(xiàn)一致,以95%乙醇提取效果最好,其次乙醇丙酮1∶1混合,再次為80%丙酮。由表2單變量方差分析表明,葉綠素aSig.=0.000,P<0.01,葉綠素bSig.=0.001,P<0.01,即不同提取液提取效果差異極顯著。進(jìn)一步進(jìn)行不同提取液提取效果多重比較分析表明(表5)。由表5可知,除葉綠素b丙酮乙醇1∶1混合提取液和80%丙酮提取液間差異不顯著,其余各處理間差異顯著。單種提取液95%乙醇提取效果最好,與明華等對玉米葉葉綠素提取研究結(jié)論一致,但乙醇丙酮1∶1混合液的提取效果不及95%乙醇,又與明華、李得孝由表6對95%乙醇提取液的3種方法提取效果比較也可看出,提取黑豆芽葉綠素以95%乙醇為提取液,以冷凍浸提效果最好。3不同提取方法對黑芽葉綠素提取效果的影響1)研磨法、浸提法、冷凍浸提法3種方法提取黑豆芽葉綠素,對于葉綠素a、b提取結(jié)果表現(xiàn)一致,以冷凍浸提法提取效果最好,其次為研磨法,再次為浸提法,但不同提取方法間差異不顯著。盡管3種方法提取效果差異不顯著,但研磨法工作量大,提取時(shí)間長;浸提法提取值偏低;冷凍浸提法速度快且效果好,故在黑豆芽葉綠素提取中可采用冷凍浸提法。2)3種提取液提取黑豆芽葉綠素,葉綠素a、b提取結(jié)果表現(xiàn)一致,以95%乙醇提取效果最好,其次乙醇丙酮1∶1混合液,再次為80%丙酮,且3種提取液提取效果差異極顯著。結(jié)合上文分析黑豆芽葉綠素以