甘青烏頭化學(xué)成分的分離與鑒定

甘青烏頭化學(xué)成分的分離與鑒定

甘青烏拉（maxim.）是甘青烏拉科的一種干燥的草本植物。它生長在海拔31500米的高山草地和碎石帶。主要分布在青海東部、西藏南部、甘肅南部、四川西部和云南西北部。陜西的秦嶺也分布在西藏常用的藥物名單之一。BrukerAdvance600核磁共振譜儀,內(nèi)標(biāo)為TMS;Agilent6250Accurate-MassQ-TOFLC/MS質(zhì)譜儀;Agilent6130SQ-MSD質(zhì)譜儀;Nicolet5700FT-IR光譜儀(美國ThermoNicolet公司);T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度儀(北京普析通用有限責(zé)任公司);Agilent7890A氣相色譜儀,FID檢測器為Agilent6130SQ-MSD;RUDOLPHAutopolVplus旋光儀(美國魯?shù)婪蚬?;X-4顯微熔點(diǎn)儀(編號830710080158,上海精密科學(xué)儀器有限公司);Waters1515型高效液相色譜儀;LC3000型高壓制備液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司生產(chǎn))。柱色譜硅膠200~300目(青島海洋化工廠);SephadexLH-20(GE公司,瑞典);ODS(50μm,YMCCo.,日本);高效薄層板GF254(Merck公司,德國);AB-8大孔吸附樹脂(凈品級,南開大學(xué)化工廠,天津);IntersilC常規(guī)提取分離用甲醇、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、無水乙醇、甲酸等均為北京化工廠分析純產(chǎn)品。高效液相用色譜甲醇和乙腈為Fisher公司產(chǎn)品。水為娃哈哈純凈水。甘青烏頭于2010年8月購于青海三江寶商貿(mào)有限公司,經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所馮學(xué)峰研究員鑒定為毛茛科烏頭屬植物甘青烏頭A.tanguticum的干燥全草。2%乙醇法干燥的甘青烏頭全草(10kg),粉碎,用95%乙醇熱回流提取3次,每次2h,乙醇加入量分別為8,6,6倍藥材量,過濾,合并濾液,減壓回收溶劑至無醇味;混懸液加水稀釋至一定體積,依次用石油醚,乙酸乙酯萃取,分別合并各部分萃取液,回收溶劑得石油醚浸膏(256.04g)和乙酸乙酯浸膏(130.39g);剩余水溶液上AB-8大孔吸附樹脂柱,依次用水,30%,60%,95%乙醇洗脫,分別合并各部分洗脫液,減壓回收溶劑至干,得水部分(605.00g),30%乙醇部分(407.97g),60%乙醇部分(107.0g)和95%乙醇部分(5.23g)。30%乙醇洗脫部分,經(jīng)硅膠柱色譜分離,氯仿-甲醇-水(8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1,5∶5∶1)梯度洗脫,共得到13個部分(Fr.1~Fr.13)。Fr.1有沉淀析出,過濾,經(jīng)甲醇重結(jié)晶,得化合物17(150mg)。Fr.2經(jīng)硅膠柱色譜,氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.05,8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脫,分為5部分(Fr.2-1~Fr.2-5)。其中Fr.2-3部分出現(xiàn)沉淀,過濾,沉淀經(jīng)乙醇重結(jié)晶,得化合物16(10mg)。Fr.3依次經(jīng)正相、反相硅膠柱色譜,SephadexLH-20得到Fr.3-1。Fr.3-1經(jīng)制備HPLC,乙腈-0.1%甲酸水(8∶92)洗脫,得化合物1(t60%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜,氯仿-甲醇(9∶1,8∶2,7∶3,6∶4,5∶5)梯度洗脫,TLC檢測,相同組分合并,分為12份(Fr.1~Fr.12)。Fr.7經(jīng)硅膠柱色譜,氯仿-甲醇-水(8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脫,得化合物11(40mg)。Fr.8經(jīng)硅膠柱色譜,氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.05,8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脫,得化合物10(40mg)。3結(jié)構(gòu)評價1材料表面化合物1白色無定型粉末;ESI-MSm/z395[M+Na]2化合物2白色粉末;ESI-MSm/z329[M-H]3-化合物3白色粉末;HR-ESI-MSm/z379.10214[M+Na]4-化合物4白色粉末;ESI-MSm/z379[M+Na]5化合物白色粉末;ESI-MSm/z409[M+Na]化合物6白色粉末;UV(MeOH)λ化合物7黃色無定型粉末。mp201~202℃;ESI-MSm/z901[M-H]化合物8黃色無定型粉末;mp204~205℃;ESI-MSm/z885[M-H]化合物9黃色無定形粉末,mp198.0℃。ESI-MSm/z755[M-H]化合物10淡黃色無定形粉末,mp220.0℃。ESI-MSm/z1071[M+Na]化合物11黃色無定形粉末,mp196.8℃。ESI-MSm/z1063[M-H]化合物12白色針晶;ESI-MSm/z323[M+Na]化合物13白色無定形粉末;ESI-MSm/z339[M+Na]化合物14白色無定形粉末;ESI-MSm/z339[M-H-glc]化合物15白色無定形