樣品的采集與處理

第二章樣品的采集與處理一項(xiàng)分析工作一般包括下列步驟：

（1）試樣的采集和制備；（2）定性檢驗(yàn)；（3）試樣的分解；（4）干擾的消除；（5）測定；（6）分析結(jié)果的計(jì)算和評(píng)價(jià)。1精選ppt第一節(jié)樣品的采集和保存

在定量分析中往往用樣本平均值來估計(jì)總體平均值。這就要求進(jìn)行測定時(shí)所使用的分析試樣具有高度代表性，即樣本平均值能代表總體平均值，否則，分析結(jié)果再“準(zhǔn)確”也毫無意義。總體：分析對(duì)象的全體樣品：從總體抽出的一小部分樣品采樣：從總體中抽出樣品的操作過程。2精選ppt一、樣品的采集原則原則：代表性、典型性和適時(shí)性。1、代表性：代表總體，各個(gè)方向分別采集，2、典型性：針對(duì)典型樣品，有目的。例如：參假食品的檢測。是事件應(yīng)對(duì)中必采的樣品。胃內(nèi)容物是確定攝入中毒的最好檢體，尿是分析非揮發(fā)性毒物的較好檢體；血液是最重要的毒物檢測樣品，3、適時(shí)性：有時(shí)間概念，例如：發(fā)生食品中毒應(yīng)及時(shí)赴現(xiàn)場采集。3精選ppt對(duì)化學(xué)事故（或中毒事件）可供采集的樣品有現(xiàn)場樣品（環(huán)境、食品、化學(xué)品及其它用品等）及患者的生物材料（血、尿、胃內(nèi)容物、組織）。采樣時(shí)機(jī)可以選在事發(fā)現(xiàn)場救助時(shí)、醫(yī)院搶救和治療時(shí)、甚至在病人恢復(fù)時(shí)，某些中毒甚至可在事件發(fā)生后數(shù)十天仍有可能采集到有價(jià)值的樣品?，F(xiàn)場遺留的食物、化學(xué)品、盛裝的容器是首先應(yīng)采集的樣品

4精選ppt采樣時(shí)應(yīng)避免樣品污染和被測組分的損失選擇合適的采樣器具和采樣方法詳細(xì)完整記錄采樣環(huán)境至少采集兩份樣品，用于分析和保存5精選ppt二、樣品的保存1、密封保存法2、冷藏保存法3、化學(xué)保存法存放容器的選擇存放容器的清洗存放時(shí)間6精選ppt三、各類樣品采集方法簡介

（一）、空氣樣品：氣體樣品為均勻樣品?？刹捎弥苯臃ê蜐饪s法。1、直接采樣2、濃縮采樣：（1）、溶液吸收法。（2）、固體吸附劑阻留法。（3）、濾紙膜阻留法（4）冷阱收集—低溫濃縮采樣裝置：收集器，流量計(jì)，采樣動(dòng)力7精選ppt

(二)水樣（三）食品隨機(jī)抽樣、系統(tǒng)抽樣、指定代表性樣品（四）生物材料生物介質(zhì)(biologicalmatrix)包括全血、血漿、血清、尿、毛發(fā)、唾液和各種組織。其中最常用的生物樣品是血液和尿液。8精選ppt1.血樣的采集供測定的血樣應(yīng)能代表整個(gè)血藥濃度。若能從動(dòng)脈或心臟取血最為理想，但只能用于動(dòng)物，不能用于人。動(dòng)物采血可根據(jù)不同種類及實(shí)驗(yàn)需要，采取適當(dāng)?shù)姆椒āＨ绱?、小鼠可由尾?dòng)脈、靜脈、心臟、眼眶取血或斷頭取血等，家兔可由耳緣靜脈、頸靜脈等多處取血，犬可由前、后肢靜脈等處取血。對(duì)于受試者通常采用靜脈取血(成人從肘正中靜脈取血，小兒從頸外靜脈取血)。靜脈取血一般將注射器針頭插入靜脈血管抽取。抽取的血液轉(zhuǎn)移至試管或其它容器時(shí)應(yīng)緩緩壓出，以防血細(xì)胞破裂。全血在加肝素或檸檬酸、草酸鹽等抗凝劑后，離心分取血漿，其體積約為全血的一半。血清則是由血液中纖維蛋白原等影響下，引起血塊凝結(jié)而析出，離心取用，而血塊凝結(jié)時(shí)往往易造成藥物吸附的損失。9精選ppt全血直接作為樣品時(shí)，也應(yīng)加入抗凝劑混勻，防止凝血。對(duì)大多數(shù)藥物來說，血漿濃度與紅細(xì)胞中的濃度呈正比，所以測定全血不能比測定血漿提供更多的信息。而全血的凈化較血漿與血清復(fù)雜，尤其是溶血后，血色素等可能會(huì)給HPLC測定帶來影響。但是，一些藥物可與紅細(xì)胞結(jié)合，或藥物在血漿和紅細(xì)胞的分布比率因人而異，在這些情況下，宜采用全血。血樣抽取量受到一定的限制。人體藥代動(dòng)力學(xué)研究需要在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)(一般為12~20點(diǎn))取樣，每次由前臂靜脈取血3~5m1。隨著高靈敏度測定方法的建立，取樣量可繼續(xù)降低，從而更易為受試者接受。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取血量應(yīng)注意是否超過了動(dòng)物的生理承受能力。10精選ppt制備血漿樣品時(shí)，將采取的血樣置含有抗凝劑的試管中，緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)試管使其充分混合、離心，所得上清液即為血漿。常用的抗凝劑有肝素，它是體內(nèi)正常的生理成分，因而不會(huì)改變血樣的化學(xué)組成或引起藥物的變化，一般不會(huì)干擾測定。通常lml血液采用20個(gè)單位的肝素即可抗凝?？蓪⑴渲坪玫母嗡厝芤壕鶆虻赝坎荚谠嚬鼙谏希?0~70℃烘干備用。其它抗凝劑有檸檬酸、草酸鹽、EDTA等，但它們可能引起被測組分發(fā)生變化或干擾某些藥物的測定。制備血清樣品時(shí)，將采取的血樣在室溫下至少放置30~60min，待血液凝固后，以3000~4000r/min離心10min，分取上層澄清的血清。11精選ppt2.尿樣的采集尿藥測定主要用于藥物劑量回收、藥物代謝及生物利用度研究，也可用于乙?；x和氧化代謝快、慢型測定等。因?yàn)槟蛩帩舛韧ǔＷ兓^大，所以應(yīng)測定一定時(shí)間內(nèi)排入尿中藥物的總量，這就要同時(shí)測定在規(guī)定時(shí)間內(nèi)的尿量(體積)及尿藥濃度。尿液的主要成分是水、尿素及鹽類。它是一種良好的細(xì)菌培養(yǎng)基，因而需立即冷藏或防腐處理，否則細(xì)菌會(huì)很快繁殖而引起尿素分解，產(chǎn)生氨氣，這在夏天進(jìn)行得很快，除產(chǎn)生異常氣味外，還有可能導(dǎo)致樣品分解。冷藏條件一般可置4℃冰箱內(nèi)。若欲在室溫下保存，應(yīng)在收集尿樣后，立即加入防腐劑。常用的防腐劑有甲苯、氯仿或改變尿液的酸堿性，以抑制細(xì)菌的繁殖。加入的防腐劑是否干擾測定或與被測組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，應(yīng)由實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，以便選取合適的防腐措施。在所有體液樣品中，尿樣最容易獲得，并且樣品量大，取樣次數(shù)可以增加，內(nèi)含藥物(母體藥物及代謝物)濃度高。健康人的尿液中不含蛋白質(zhì)，不需除蛋白，所以常用作藥物體內(nèi)代謝研究。12精選ppt3.唾液樣的采集由于某些藥物在唾液中的濃度與血漿濃度密切相關(guān)，即可利用唾液中的濃度反映血漿中的藥物濃度。由于唾液樣品采集時(shí)無傷害、無痛苦，取樣不受時(shí)間、地點(diǎn)的限制，因而樣品容易獲得。一般成人每日分泌唾液1~1.5L。唾液的比重為1.003~1.008，粘度是水的1.9倍；唾液的pH在6.2~7.6之間變動(dòng)，分泌量增加時(shí)趨向堿性而接近血液的pH。通常得到的唾液含有粘蛋白。唾液的采集應(yīng)盡可能在剌激少的安靜狀態(tài)下進(jìn)行，采集前應(yīng)漱口，除去口腔中的食物殘?jiān)僖鹤匀环置诹魅胧占苤?。采集后離心，分取上清液作為藥物濃度測定的樣品。也可采用物理方法(嚼石蠟片等)或化學(xué)方法(廣泛應(yīng)用的是檸檬酸或維生素C等，有的將約10mg檸檬酸結(jié)晶放在舌尖上，或者將10%的檸檬酸溶液噴在舌上，棄去開始時(shí)的唾液后再取樣)刺激，使在短時(shí)間內(nèi)得到大量的唾液，但這樣可能影響唾液中的藥物濃度。13精選ppt唾液中的粘蛋白決定了唾液的粘度，它是在唾液分泌后受唾液中的酶催化而生成的。為阻止粘蛋白的生成，應(yīng)將唾液在4℃以下保存。如果分析時(shí)沒有影響，則可用堿處理唾液，使粘蛋白溶解而降低粘度。唾液在保存過程中，會(huì)放出CO2，而使pH升高，需要測定唾液pH時(shí)，應(yīng)在取樣時(shí)測定較好。冷凍保存的唾液解凍后應(yīng)將樣品混勻后使用，以免產(chǎn)生誤差。只有知道唾液中藥物濃度與血清中藥物的總濃度有一定的比值時(shí)，唾液中藥物濃度的監(jiān)測才有意義。14精選ppt4、毛發(fā)：是許多重金屬元素的蓄積庫，含量比較固定可以記錄外部環(huán)境對(duì)肌體的影響。頭發(fā)能反映肌體短期內(nèi)的物質(zhì)代謝，也能反映不同階段的代謝情況。頭發(fā)易于采集，便于保存。采集的方法：取枕部距頭皮2~5cm內(nèi)的發(fā)段，重量1~2克。5、組織：死尸最好在24~48小時(shí)取樣。15精選ppt第二節(jié)樣品的處理一、樣品處理的目的血漿(plasma)和血清(serum)是體內(nèi)藥物分析經(jīng)常采用的樣本，其中尤以血漿最為常用。因?yàn)樗幬镌隗w內(nèi)達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)，血漿中藥物濃度一般與藥物在作用部位的濃度密切相關(guān)，可以反映藥物在靶器官的狀況。進(jìn)行HPLC分析時(shí)，生物樣品一般都需要進(jìn)行純化處理。對(duì)純化程度的要求，取決于使用的分析方法及樣品所含雜質(zhì)情況。僅有少數(shù)情況下可取樣品直接進(jìn)樣，對(duì)于大多數(shù)樣品而言，進(jìn)行預(yù)處理是必要的。16精選ppt樣品處理時(shí)要求：1、必須分解完全，不能造成被測組分的損失2、樣品不能被污染。3、試劑消耗盡可能少4、樣品處理器皿應(yīng)與樣品量相適應(yīng)17精選ppt二、樣品處理方法樣品溶液制備游離態(tài)——溶解法

水溶法：水溶性成分

酸性水溶液浸出法：在酸性水溶液中溶解度增大且穩(wěn)定的成分

堿性水溶液浸出法：在堿性水溶液中溶解度增大且穩(wěn)定的成分

有機(jī)溶劑浸出法：易溶于有機(jī)溶劑的成分18精選ppt結(jié)合態(tài)——分解法

全部分解法——無機(jī)成分

干灰化法（1）高溫灰化，450~550℃。

（2）低溫灰化，高頻等離子體技術(shù)。

濕消化法

硝酸、硫酸、高氯酸、高錳酸鉀、過氧化氫硝酸—硫酸消化、硝酸-高氯酸或硝酸-過氧化氫消化硝酸-硫酸-高氯酸消化

19精選ppt密封加壓消化法密閉罐消化，防止揮發(fā)性元素?fù)p失微波溶樣法部分分解法——有機(jī)成分酸水解、堿水解、酶水解

eg：食品中結(jié)合態(tài)脂肪的測定20精選ppt常用的分離與富集方法

溶劑萃取固相萃取固相微萃取超臨界流體萃取蒸餾與揮發(fā)膜分離21精選ppt溶劑萃?。阂?液萃取，液-固萃取，液-氣萃取原理：物質(zhì)在互不相溶的兩相中分配系數(shù)不同決定因素：物質(zhì)的疏水性和親水性22精選ppt分配系數(shù)KD：溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中分配達(dá)到平衡時(shí)，該溶質(zhì)在有機(jī)相中的濃度與其在水相中的濃度之比KD越大，物質(zhì)越易溶于有機(jī)溶劑中分配比D：分配平衡時(shí)，溶質(zhì)在有機(jī)相中總濃度與其在水相中的總濃度之比萃取百分率E%：物質(zhì)被萃取到有機(jī)相中的百分率，也稱萃取回收率D值大的萃取劑有助于提高萃取效率23精選ppt萃取體系：簡單分子，螯合物，離子締合物，溶劑化合物萃取條件的選擇溶劑：分配比D大，較高選擇性，和水的比重相差較大，無毒或低毒，沸點(diǎn)低溶液酸度：對(duì)物質(zhì)存在形態(tài)有較大影響其他試劑：適當(dāng)螯合劑，配位劑等萃取操作：分液漏斗24精選ppt固相萃