免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座

簡介

免疫標(biāo)識技術(shù)(immunolabelingtechnique)是指用熒光素、酶、放射性同位素等反抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)識，然后再經(jīng)過檢測標(biāo)識物來觀察抗原抗體反應(yīng)試驗(yàn)技術(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：特異、敏度和快速；

可定性、定量和定位免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第1頁分類免疫標(biāo)識技術(shù)

放射免疫技術(shù)免疫酶技術(shù)免疫熒光技術(shù)

免疫金標(biāo)識技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第2頁放射免疫技術(shù)

放射免疫技術(shù)為一個將放射性同位素測量高度靈敏性和抗原抗體反應(yīng)高度特異性相結(jié)合，在體外測定超微量物質(zhì)一項(xiàng)技術(shù)慣用放射性同位素有：125I、3H、14C、35S、32P三種方法：基于競爭性結(jié)合反應(yīng)放射免疫分析(RIA)非競爭性結(jié)合免疫放射分析(IRMA)放射受體分析技術(shù)（RRA）免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第3頁放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)含有靈敏度高、特異性強(qiáng)、精密度好優(yōu)點(diǎn)，慣用于各種激素、微量蛋白質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物和藥品等微量物質(zhì)測定，但含有放射污染缺點(diǎn)。免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第4頁免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)特異性與酶高效催化作用有機(jī)結(jié)合一個方法。慣用酶：辣根過氧化物酶(HRP)堿性磷酸酶(AP)特點(diǎn)：-靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、試劑穩(wěn)定和簡易安全等優(yōu)點(diǎn)。免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第5頁免疫酶技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)酶免疫組化技術(shù)雙抗體夾心法雙抗原夾心法間接法雙位點(diǎn)一步法分類競爭法免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第6頁免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是用熒光標(biāo)識抗體或抗原與樣品(細(xì)胞、組織或分離物質(zhì)等)中對應(yīng)抗原或抗體結(jié)合，以適當(dāng)檢測熒光技術(shù)對其進(jìn)行分析方法慣用于標(biāo)識熒光素有：異硫氰酸（FITC）、羅丹明（RB200）慣用方法有直接法和間接法兩種免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第7頁

直接熒光法：把熒光素標(biāo)識抗體與待檢標(biāo)本（細(xì)胞懸液、細(xì)胞涂片或組織切片）相互作用，洗去未結(jié)合熒光標(biāo)識抗體，在熒光顯微鏡下觀察，有熒光部分為陽性。。

免疫熒光技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第8頁

間接熒光法：將特異性抗體（一抗）和待檢標(biāo)本（細(xì)胞懸液、細(xì)胞涂片或組織切片）相互作用后加入熒光素標(biāo)識一抗抗體（二抗）顯示結(jié)果。

免疫熒光技術(shù)

免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第9頁試驗(yàn)一

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

---雙抗體夾心法測定甲胎蛋白（AFP)免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第10頁酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)是一個集免疫學(xué)、生物化學(xué)及光學(xué)檢測技術(shù)為一體測定方法。將抗原或者抗體固定化后，加入酶標(biāo)抗體或抗原，形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第11頁EEEE雙抗體夾心法【試驗(yàn)原理】免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第12頁ELISA基本試驗(yàn)過程包被：將已知抗原或抗體經(jīng)過物理吸附到固相載體表面，使抗原或抗體固相化抗原抗體反應(yīng)：先后加入被檢標(biāo)本和酶結(jié)合物，使之與固相抗原或抗體發(fā)生免疫反應(yīng)而被結(jié)合固定酶促反應(yīng)：在反應(yīng)體系中加入酶作用底物，使發(fā)生酶促反應(yīng)而顯色免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第13頁ELISA基本試驗(yàn)過程免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第14頁【試驗(yàn)器材】1、AFP診療試劑盒2、AFP陽性對照品，陰性對照品，待檢品3、微量加樣器、溫箱免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第15頁【操作步驟】將包被孔編號，分別加入陽性對照、待測樣品及陰性對照各50ul在各孔內(nèi)加入酶結(jié)合物1滴，37℃溫育30分鐘甩掉孔內(nèi)液體，然后在各孔中分別加入洗滌液1滴，搖勻，棄去，用蒸餾水或自來水加滿各孔甩掉，重復(fù)5次，然后在吸水紙上吸干（倒扣在吸水紙上）各孔內(nèi)加入底物和顯色液各1滴，輕輕搖動混勻，室溫避光反應(yīng)2-5min，觀察結(jié)果免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第16頁【注意事項(xiàng)】

1、加樣應(yīng)加在加樣孔底部，防止產(chǎn)生氣泡，預(yù)防產(chǎn)生假陰性2、洗滌必須徹底，預(yù)防產(chǎn)生假陽性免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第17頁【試驗(yàn)結(jié)果】若待檢孔顯色淺于或等于陰性對照孔則判定為若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則判定為若待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則判定為陰性陽性弱陽性免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第18頁【臨床意義】1、原發(fā)性肝癌大規(guī)模普查

2、能夠用作檢測胎兒畸形、畸胎瘤免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第19頁試驗(yàn)二

免疫金標(biāo)識技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第20頁免疫金標(biāo)識技術(shù)

免疫金標(biāo)識技術(shù)(Immunogoldlabellingtechique)是將金顆粒標(biāo)識抗原或抗體，用于檢測對應(yīng)抗體或抗原一個試驗(yàn)方法免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第21頁免疫金標(biāo)識技術(shù)該技術(shù)主要利用了金顆粒含有高電子密度特征，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)識物在對應(yīng)配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量快速免疫檢測方法中免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第22頁【試驗(yàn)原理】膠體金標(biāo)識鼠抗人α—hCG抗體抗人β—hCG抗體抗鼠IgG抗體hCG妊娠診療試紙免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第23頁【試驗(yàn)原理】免疫標(biāo)記技術(shù)專家講座第24頁【操作步驟】1.待測樣品、檢測試紙和其它檢測材料等恢復(fù)到室溫后檢測2.將測試紙有箭頭一端插入尿液標(biāo)本容器中，5秒鐘后取出平放，5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果

注意：測試紙插入尿液深度不可超出MAX標(biāo)志線免疫標(biāo)記技術(shù)