菌種保藏的注意事項(xiàng) 課件

菌種保藏的注意事項(xiàng)主講教師：李蒙123保藏方法的選擇細(xì)胞菌齡的選擇細(xì)胞懸液目錄CONTENTS4保護(hù)劑5凍結(jié)和解凍的速度6菌種活化Part01保藏方法的選擇微生物的種類很多，不同的微生物其特性可能差異很大；因此，應(yīng)根據(jù)微生物菌種的具體特性、保藏的目的等因素來選擇合適的保藏方法；菌種經(jīng)常使用，可選擇斜面低溫保藏法；需長期保藏，可選擇超低溫保藏法或液氮保藏法。1保藏方法的選擇Part02細(xì)胞菌齡的選擇2細(xì)胞菌齡的選擇對微生物菌種進(jìn)行保藏時(shí)，不同菌齡的微生物細(xì)胞對保藏的效果有較大的影響；一般情況下，應(yīng)選擇生長同步且成熟的細(xì)胞群體、抗逆性強(qiáng)的孢子或芽孢進(jìn)行菌種保藏；保藏不產(chǎn)芽孢的細(xì)胞、酵母菌時(shí)，應(yīng)選擇對數(shù)生長期末期到穩(wěn)定期初期之間的細(xì)胞；保藏產(chǎn)芽孢細(xì)胞、放線菌、霉菌時(shí)，應(yīng)選擇其成熟的芽孢或孢子。Part03細(xì)胞懸液3細(xì)胞懸液增大菌種的懸液濃度，可提高存活的細(xì)胞數(shù)量，提高菌種的存活機(jī)率；一般情況下，細(xì)菌細(xì)胞或芽孢的濃度應(yīng)不低于108個(gè)/mL；酵母菌細(xì)胞或霉菌孢子的濃度應(yīng)不低于107個(gè)/mL；另外，微生物經(jīng)過培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中可能存在對細(xì)胞有害的代謝產(chǎn)物；因此，對使用液態(tài)培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物細(xì)胞可離心去除培養(yǎng)液，再用無菌水懸浮成菌懸液，斜面菌種則可直接用無菌水洗脫成菌懸液。Part04保護(hù)劑4保護(hù)劑保藏溫度過低時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的自由水可形成冰晶，會(huì)對微生物菌種造成傷害；此時(shí)可加入保護(hù)劑，適合的保護(hù)劑可有效使細(xì)胞內(nèi)的自由水滲出胞外，減少胞內(nèi)冰晶的形成，有利于提高菌種的存活率，延長保藏期；常用的保護(hù)劑一般有甘油、脫脂牛乳、山梨醇、葡聚糖、淀粉、血清等；使用終濃度一般為10%~30%。Part05凍結(jié)和解凍的速度5凍結(jié)和解凍的速度對于液氮保藏法，凍結(jié)速度和解凍速度對保藏的效果影響較大，一般使用慢凍結(jié)而快解凍的方式；研究表明，速度在1~10℃/min范圍內(nèi)的程序降溫，細(xì)胞死亡率低，超過10℃/min的快速凍結(jié)，細(xì)胞的死亡率大大提高（真核微生物較顯著）；解凍時(shí)，一般迅速放置于35℃~40℃的溫水中快速解凍，接著進(jìn)行菌種活化相關(guān)工作；如果解凍速度較慢，有可能出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)再結(jié)冰，對細(xì)胞造成傷害，從而影響菌種保藏的效果。Part06菌種活化菌種的活化就是將保藏狀態(tài)的微生物菌種置于適宜的條件中培養(yǎng)，使其恢復(fù)原有生命活力及優(yōu)良性狀的過程；活化菌種時(shí)，應(yīng)使用該菌種的最適合培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，經(jīng)過2~3代的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，即可達(dá)到活化的目的；一般情況下，